□ 徐 鎮(zhèn) 宿遷市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品檢測(cè)領(lǐng)域中的應(yīng)用進(jìn)展

□ 徐 鎮(zhèn) 宿遷市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所

本文簡(jiǎn)要概述了酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA），并從檢測(cè)農(nóng)藥和獸藥殘留、轉(zhuǎn)基因食品、病原微生物檢測(cè)和生物毒素等方面，分析了ELISA技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用，以供參考。

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)；食品檢測(cè)；獸藥殘留

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)是一種以免疫技術(shù)為基礎(chǔ)的檢測(cè)手段，具有高敏感性和特異性優(yōu)點(diǎn)。ELISA技術(shù)最開(kāi)始主要應(yīng)用于對(duì)細(xì)菌和病毒的檢測(cè)，隨著技術(shù)的發(fā)展，應(yīng)用于抗原抗體的檢測(cè)。由于單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展，研究出不同類(lèi)型的高純度抗體而促進(jìn)了ELSA的快速發(fā)展[1]。

1 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)基本原理

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)的原理，首先將待測(cè)抗原或抗體與抗體或抗原反應(yīng)形成免疫復(fù)合物，免疫復(fù)合物再與酶標(biāo)記的二抗反應(yīng)[2]，抗原決定簇和抗體的結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合，從而使反應(yīng)具有高特異性。由于標(biāo)記的酶結(jié)合在免疫復(fù)合物上，可以催化底物發(fā)光或呈現(xiàn)熒光，從而放大免疫效果，利用酶標(biāo)儀測(cè)定產(chǎn)物。ELISA要想得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，需要選擇合適的試劑盒進(jìn)行規(guī)范的操作。由于酶的催化活性較高，這種技術(shù)的檢測(cè)靈敏度也較高。

2 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 農(nóng)藥殘留的檢測(cè)

農(nóng)藥殘留是指植物、動(dòng)物或某些環(huán)境中由于使用過(guò)農(nóng)藥而在植物的組織、細(xì)胞以及動(dòng)物的體內(nèi)蓄積儲(chǔ)存。近年來(lái)，隨著農(nóng)藥的大量使用，植物中的殘留量較大并有逐漸增加的趨勢(shì)，已成為我國(guó)食品安全方面的一個(gè)重要問(wèn)題。傳統(tǒng)的檢測(cè)農(nóng)業(yè)殘留的成本較高，試驗(yàn)操作困難且費(fèi)時(shí)費(fèi)力，但ELISA技術(shù)操作簡(jiǎn)單且快速，在世界上很多國(guó)家已經(jīng)普遍應(yīng)用[3]。

ELISA技術(shù)主要可用于有機(jī)磷、有機(jī)氯、氨基甲酸酯類(lèi)和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)等農(nóng)藥殘留上，使用最多的是氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留。有研究顯示，ELISA技術(shù)檢測(cè)胺甲萘以及蟲(chóng)螨威的氨基甲酸之類(lèi)的限度為2.0×10-6和8.0×10-6。擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)是一種合成的對(duì)神經(jīng)有毒性的藥物，研究表明其最低的檢測(cè)限為21～23 ng/mL[4]。有機(jī)氯農(nóng)藥在自然環(huán)境中可以穩(wěn)定存在，利用ELISA檢測(cè)納米標(biāo)記的DDT的抗體范圍為0.7～1 000 ng/mL，同時(shí)研發(fā)成功了浸蘸式競(jìng)爭(zhēng)ELISA快速檢測(cè)技術(shù)，有機(jī)磷的檢測(cè)范圍為1.4～92.1 ng/L。因此，ELISA技術(shù)已成為農(nóng)藥殘留方面一種經(jīng)常使用的方法，可準(zhǔn)確檢測(cè)出各種物質(zhì)中的農(nóng)藥殘留量，從而確保人們的食品安全。

2.2 動(dòng)物中獸藥殘留的檢測(cè)

獸藥殘留主要是指在動(dòng)物及其產(chǎn)品中原型藥物或其代謝物的積累或保留。獸藥殘留問(wèn)題在社會(huì)中的發(fā)展日趨嚴(yán)重，人們體內(nèi)獸藥殘留量達(dá)到一定程度導(dǎo)致中毒。隨著ELISA技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于家禽、畜肉類(lèi)中的獸藥檢測(cè)殘留經(jīng)常使用的、主要檢測(cè)的藥物有激素類(lèi)藥物、抗生素、驅(qū)蟲(chóng)類(lèi)藥物和呋喃類(lèi)等。有研究顯示，利用ELISA檢測(cè)動(dòng)物源性食品中的2-甲基-5-硝基咪唑回收率為85.65%～108.65%，檢測(cè)限為1.9×10-4mg/L。檢測(cè)動(dòng)物源性食品里紅霉素的回收率為69.0%～107.5%。

2.3 轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)

隨著基因技術(shù)的發(fā)展，很多種類(lèi)的轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)入市場(chǎng)，其安全性成為當(dāng)前食品安全關(guān)注的重點(diǎn)。目前，由于學(xué)者沒(méi)有對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的安全性產(chǎn)生一致的看法，所以很多國(guó)家嚴(yán)格控制進(jìn)入市場(chǎng)的轉(zhuǎn)基因食品。利用ELISA檢測(cè)的原理檢測(cè)特定的轉(zhuǎn)基因表達(dá)蛋白，從而判定食品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分。有研究表明，利用玉米Bt9 ELISA試劑盒，可以成功檢測(cè)玉米粉中的Star-link Cry9c蛋白。而Strategic公司研發(fā)出的MON810 ELISA試劑盒準(zhǔn)確檢測(cè)MON810的蛋白質(zhì)，其利用的方法是類(lèi)似于夾心ELISA法，其原理是先將兩種抗體與Cry IA（b）抗原結(jié)合成夾心復(fù)合物，從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離和檢測(cè)。也就是在檢測(cè)過(guò)程中先將第一個(gè)抗體固定在酶標(biāo)版上，然后Cry IA（b）蛋白與酶標(biāo)版上的抗體結(jié)合，然后第二個(gè)抗體可以通過(guò)自身的化學(xué)鍵與酶結(jié)合而與第一個(gè)抗體結(jié)合，然后沖洗掉酶標(biāo)板中的殘留液，加入顯色劑，利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其顏色。

2.4 病原微生物檢測(cè)

病原微生物會(huì)對(duì)食品造成污染。以前檢測(cè)微生物的方法主要是通過(guò)分離培養(yǎng)或者生化試驗(yàn)的方式進(jìn)行檢測(cè)，不但需要大量的手工操作，而且檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程需要6～7天。同時(shí)，一些如大腸桿菌和幽門(mén)螺桿菌等在缺乏營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境下，進(jìn)入一種類(lèi)似休眠的狀態(tài)，進(jìn)入營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境后會(huì)立即復(fù)蘇，此時(shí)仍然有致病性。在檢測(cè)時(shí)很容易造成漏檢現(xiàn)象，而利用ELISA技術(shù)就可以避免此現(xiàn)象的發(fā)生。ELISA技術(shù)能快速檢測(cè)食品中常見(jiàn)的金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、大腸桿菌和軍團(tuán)菌。

2.5 生物毒素檢測(cè)

細(xì)菌會(huì)在一定的環(huán)境下產(chǎn)生生物毒素。雖然食品會(huì)經(jīng)過(guò)加熱等其他的制作過(guò)程，但仍然無(wú)法破壞生物毒素的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。有研究利用ELISA法中的AFB1試劑盒檢測(cè)食品中的黃曲霉素。

3 結(jié)語(yǔ)

在食品安全檢測(cè)時(shí)，利用ELISA技術(shù)不但簡(jiǎn)化了操作步驟，而且具有較高的靈敏性和特異性，因此在臨床上得到廣泛應(yīng)用。但該技術(shù)也有一定的缺陷，不能同時(shí)分析多個(gè)對(duì)照，試劑的選擇性要求較高等。

[1]陳棟.酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法及其對(duì)食品安全檢查的重要作用[J].食品安全導(dǎo)刊,2016(9):17-18.

[2]侯瑾,李迎秋.酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國(guó)調(diào)味品,2017(6):165-169.

[3]張也,劉以祥.酶聯(lián)免疫技術(shù)與食品安全快速檢測(cè)[J].食品科學(xué),2003(8):201-204.

[4]文孟棠.抗擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥