□ 衛(wèi)潤(rùn)鑫 徐子婷 河南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院

高效液相色譜在食品檢測(cè)中的應(yīng)用

□ 衛(wèi)潤(rùn)鑫 徐子婷 河南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院

本文分析了高效液相色譜法特點(diǎn)，性質(zhì)及原理，利用高效液相色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)樣品維生素在皂化過(guò)程會(huì)發(fā)生分離，檢測(cè)奶粉中維生素D的含量，最終得出奶粉中維生素D的含量為398.0μg/100g。

高效液相色譜法；維生素D；食品檢測(cè)

高效液相色譜法在食品檢測(cè)中已經(jīng)應(yīng)用很長(zhǎng)時(shí)間，高效液相色譜法的缺點(diǎn)也很明顯，設(shè)備成本較高，檢測(cè)樣本需要數(shù)量大，標(biāo)本前處理過(guò)程復(fù)雜，對(duì)操作人員要求高，目前臨床使用較少。而且，HPLC雖然能夠分開(kāi)25-（OH）D2和25-（OH）D3，但25-（OH）D2濃度太低，HPLC檢測(cè)限達(dá)不到要求[1]。由于維生素D不穩(wěn)定、測(cè)定方法復(fù)雜、變異大和受影響因素多等特點(diǎn)，目前維生素測(cè)定方法主要采用高效液相色譜法，可以測(cè)定蛋白質(zhì)、多肽、碳水化合物、核酸、寡核苷酸等物質(zhì)，有分辨率高、高效率分離的特點(diǎn)[2]。

1 高效液相色譜法特點(diǎn)

1.1 高壓

液相色譜法以載液形式傳輸，液體在傳輸?shù)倪^(guò)程中會(huì)到達(dá)色譜柱，在色譜柱內(nèi)阻力較大，因此要迅速地通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液施加高壓。需要的壓強(qiáng)一般為（150～350）×105Pa[3]。

1.2 高速

流動(dòng)相流速在柱內(nèi)速度可達(dá)1～10 mL/min。高效液相色譜法耗時(shí)短，一般少于1 h[4]。

1.3 高效

高效液相色譜法在食品檢測(cè)的應(yīng)用效率比其他方法更高效穩(wěn)定，這主要得益于高壓，高速的環(huán)境下，流動(dòng)相的高效親和力更有利于色譜分析。

2 性質(zhì)及原理

高效液相色譜法，根據(jù)固定相可以分為凝膠滲透色譜可以分為高效疏水色L高分辨率反相高效液相色譜法和離子交換色譜和高效高親和力的高效液相色譜類型。用不同類型高效液化合物分離原理基本上與普通液體色譜分析相似。高效液相色譜法的特點(diǎn)是高分辨率、快速、靈敏和重復(fù)性好[5-6]。

IEC本質(zhì)上是離子交換的產(chǎn)物，交換過(guò)程可表示為：[X-(溶劑中]+[樹(shù)脂-R4N+Cl-]= [樹(shù)脂-R4N+X-]+Cl-[溶劑中]。

當(dāng)交換過(guò)程達(dá)到平衡時(shí)：KX=[-R4N+X-][Cl-]/[-R4N+Cl-][X-]。

分配系數(shù)為：DX=[-R4N+X-]/ [X-]=KX[-R4N+Cl-]/[Cl-]。

只要能在溶劑中電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法來(lái)做色譜分離。

3 實(shí)驗(yàn)

3.1 原理

選取維生素在皂化過(guò)程中與脂肪分離，以石油醚萃取后，用正相色譜柱提取富集，用反相色譜柱，紫外檢測(cè)器定量測(cè)定。

3.2 適用范圍

本方法來(lái)源于GB/T 5413.9－1997一般食品和乳粉維生素A、維生素D、維生素E的測(cè)定。適用于大部分食品或強(qiáng)化食品及飼料中的維生素D含量的測(cè)定。

3.3 主要儀器

高壓液相色譜儀（具有可變波長(zhǎng)的紫外檢測(cè)器，數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)或記錄儀）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；平底燒瓶（250 mL）；分液漏斗（500 mL）。

3.4 試劑

所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純，所有實(shí)驗(yàn)用水均指蒸餾水。異丙醇（色譜純）；2%焦性沒(méi)食子酸乙醇溶液（取2 g焦性沒(méi)食子酸溶于100 mL無(wú)水乙醇中）；75%氫氧化鉀溶液（取75 g氫氧化鉀溶于100 mL水中）；石油醚（沸程30～60 ℃）；甲醇（色譜純）；正己烷（色譜純）；環(huán)己烷（色譜純；）維生素D標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3.5 計(jì)算

X=[(As/Asd)×ρs×ρ]sd/m

式中：X——樣品中維生素D，mg/100g；

m——稱樣量，含量，IU/100g；

ρs——進(jìn)樣液中維生素D的濃度，μg/mL；

As——進(jìn)樣液中維生素D的峰面積，μg；

Asd——標(biāo)樣中維生素D的峰面積，μg；

ρsd——標(biāo)樣中維生素D的濃度，μg/mL。

3.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

稱取嬰兒奶粉10.8 g，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)的提取取后，測(cè)得維生素D峰面積為18 692μg，標(biāo)樣峰面積為24 767μg，帶入公式計(jì)算，得出奶粉中維生素D的含量398.0 IU/100g。

4 結(jié)論

隨著現(xiàn)在食品行業(yè)的快速發(fā)展，人們對(duì)食品安全越來(lái)越重視，高效液相色譜分析技術(shù)也日漸完善，高效液相色譜分析法將會(huì)在未來(lái)應(yīng)用越來(lái)越廣泛。

[1]孫長(zhǎng)顥.營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)(供預(yù)防醫(yī)學(xué)類專業(yè)用)[M].6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2012.

[2]高海燕,王善廣.利用反相高效液相色譜法測(cè)定梨汁中有機(jī)酸的種類和含量[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2004,30(8):96-100.

[3]鐘慈平.固相萃取—超高效液相色譜檢測(cè)食品中直接紅染料方法的研究[D].重慶：西南大學(xué),2014.

[4]黃國(guó)宏.高效液相色譜技術(shù)在食品分析中的應(yīng)用[J].食品工程,2006(4):47-51.

[5]李紅艷,王瑾,邵亮亮,等.固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定功能性飲料中微量維生素B(12)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,1(3):384-386.

[6]李菁菁,葉潤(rùn),崔亞娟,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定配方奶粉中泛酸、生物素和氰鈷胺素[J].食品工業(yè)科技,2015,36(12):61-64.

衛(wèi)潤(rùn)鑫（1988—），男，河南鄭州人，本科，工程師。研究方向：食品分析。