辛志梅+徐德坤+張眉+吳斌+姜珊珊+辛相啟

摘 要：研究旨在明確烯酰嗎啉、聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽分別與嘧菌酯混配對(duì)葡萄霜霉病的聯(lián)合作用類型，采用離體葉盤法測(cè)定3種單劑及聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽與嘧菌酯6個(gè)配比、烯酰嗎啉與嘧菌酯5個(gè)配比對(duì)葡萄霜霉病的毒力。結(jié)果表明：嘧菌酯、聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽、烯酰嗎啉對(duì)葡萄霜霉病菌的EC50分別為2.010、64.961、2.722 mg·L-1；聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽與嘧菌酯15∶1、12∶1、9∶1、6∶1、3∶1、1∶1混配均表現(xiàn)為增效作用，其中，（6～9）∶1配比的SR值較大、增效作用較明顯；烯酰嗎啉與嘧菌酯4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2混配均表現(xiàn)為增效作用，其中，6∶4配比的SR值為1.82，增效作用最明顯。

關(guān)鍵詞：聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽；嘧菌酯；烯酰嗎啉；葡萄霜霉?。宦?lián)合毒力

中圖分類號(hào)：S436.631.1+9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2016）12-0117-04

Abstract This study was to clarify the co-effects of dimethomorph and polyhexamethylene biguanidine hydrochloride （PHMB） with azoxystrobin on P. viticola. The toxicities of the 3 single fungicides， the mixtures of PHMB and azoxystrobin at 6 different ratios， and the mixtures of dimethomorph and azoxystrobin at 5 different ratios on P. viticola were tested by in vitro leaf disc assay. The results showed that the EC50 of azoxystrobin， PHMB and dimethomorph were 2.010， 64.961 and 2.722 mg·L-1， respectively. The 6 different matching ratios of PHMB and azoxystrobin including 15∶1， 12∶1， 9∶1， 6∶1， 3∶1 and 1∶1， had synergistic effect on P. viticola， and the ratio of （6～9）∶1 had the larger SR value and the strongest synergistic effect. Similarily， the 5 different matching ratios of dimethomorph and azoxystrobin including 4∶6， 5∶5， 6∶4， 7∶3 and 8∶2 also had the synergistic effect on P. viticola， and the ratio of 6∶4 had the SR value as 1.82 and the strongest synergistic effect.

Keywords PHMB； Azoxystrobin； Dimethomorph； Plasmopara viticola； Allied toxicity

葡萄霜霉?。≒lasmopara viticola）是危害葡萄生產(chǎn)的重要病害之一，在我國(guó)各葡萄產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，可造成大面積減產(chǎn)，是制約葡萄產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。目前葡萄霜霉病的防控手段主要包括化學(xué)防治、種植抗病品種、準(zhǔn)確預(yù)警和避雨栽培。但由于該病害具有潛育期短、再侵染頻繁、病菌繁殖率高等特點(diǎn)，化學(xué)防治仍是最有效的防控手段。

在常用化學(xué)藥劑中，嘧菌酯和烯酰嗎啉是防治葡萄霜霉病較理想的藥劑[1]。嘧菌酯屬甲氧基丙烯酸酯類（strobilurins）殺菌劑，具有廣譜、高效、安全的特點(diǎn)，但由于作用位點(diǎn)單一，存在較大的抗性風(fēng)險(xiǎn)。張艷菊等2012-2013年從山東、黑龍江、江蘇等8省市采樣調(diào)查發(fā)現(xiàn)，山東省黃瓜霜霉病菌株對(duì)嘧菌酯抗性水平最高，EC50為0.1786 μg·mL-1，表明黃瓜霜霉病對(duì)嘧菌酯產(chǎn)生一定抗性[2]。另有研究表明，在一定試驗(yàn)條件下，辣椒疫霉病[3]、馬鈴薯晚疫病[4]、柑橘綠霉病[5]、番茄葉霉病[6]、果蔬灰霉病[7]等已對(duì)嘧菌酯產(chǎn)生不同程度抗性。烯酰嗎啉是羧酸酰胺類（carboxylic acid amides）殺菌劑，具有較好的內(nèi)吸治療性，有研究證明連續(xù)使用該藥對(duì)黃瓜霜霉病菌[8，9]、番茄晚疫病菌[10]存在抗藥風(fēng)險(xiǎn)。

結(jié)構(gòu)類型不同的殺菌劑復(fù)配使用是延緩抗藥性發(fā)展、提高防效的重要途徑，藥劑之間不同配比的聯(lián)合作用效果評(píng)價(jià)是殺菌劑復(fù)配的基礎(chǔ)研究工作[11]。鑒于此，筆者測(cè)定了嘧菌酯、烯酰嗎啉、聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽3種藥劑及其復(fù)配組合對(duì)葡萄霜霉病菌的毒力，明確不同配比對(duì)該病菌的聯(lián)合作用類型，以期為復(fù)配藥劑的研制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試病原菌

葡萄霜霉病菌（Plasmopara viticola），由山東省植物保護(hù)研究所生測(cè)實(shí)驗(yàn)室活體保存。

1.2 供試作物

葡萄品種為玫瑰香，溫室盆栽。試驗(yàn)時(shí)，剪取長(zhǎng)勢(shì)一致的頂部第3～4葉位葉片，用打孔器打成直徑為1 cm葉盤備用。

1.3 供試藥劑

98.0%聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽原藥、97.4%嘧菌酯原藥、96.11%烯酰嗎啉原藥，均由江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司提供。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 藥劑配制與處理 采用逐級(jí)稀釋法稀釋各處理藥劑。聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽原藥直接用水溶解稀釋，嘧菌酯、烯酰嗎啉原藥先用二甲基甲酰胺溶解，后用0.1%吐溫-80水溶液稀釋。

聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽單劑設(shè)置1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、500.0 mg·L-1等6個(gè)濃度梯度；嘧菌酯、烯酰嗎啉單劑的測(cè)試濃度均設(shè)置為0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 mg·L-1等6個(gè)濃度梯度。

在單劑毒力測(cè)定的基礎(chǔ)上，據(jù)表1所示單劑抑菌濃度區(qū)間及其EC50值，確定藥劑混配比例和測(cè)試濃度。聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽與嘧菌酯混配比例為15∶1、12∶1、9∶1、6∶1、3∶1和1∶1，設(shè)置1.0、5.0、10.0、25.0、50.0、75.0 mg·L-1等6個(gè)濃度梯度。烯酰嗎啉與嘧菌酯混配比例為4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2，設(shè)置0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 mg·L-1等6個(gè)濃度梯度。

于接菌24 h前進(jìn)行藥劑處理。將不同處理藥液分別噴于直徑1 cm葉盤背面，待藥液自然風(fēng)干后，將各處理葉盤背面向上放在培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿底部墊有相同藥液潤(rùn)濕的吸水紙。每皿同心圓位置放置10個(gè)葉盤，每處理1皿，重復(fù)3次?？瞻讓?duì)照用0.1% 吐溫-80水溶液處理。

1.4.2 病菌孢子囊懸浮液制備、接菌與培養(yǎng) 采集新鮮的葡萄霜霉病病葉，用毛筆在流水下將病葉上老的霉層刷洗掉，葉背朝上鋪在底部有2層吸水紗布的保濕盤內(nèi)，用塑料薄膜密封保濕盤，置人工氣候培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為22℃、相對(duì)濕度90%、光暗交替（光照12 h、黑暗12 h）。待病斑上新的孢子囊長(zhǎng)出后，用蒸餾水沖洗，稀釋配制成1×105個(gè)/mL的孢子囊懸浮液。

藥劑處理24 h后接菌。用移液器將孢子囊懸浮液接種至葉盤中心，每葉盤10 μL。置人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度22℃、相對(duì)濕度90%、光暗交替（光照12 h、黑暗12 h）。

1.4.3 病情調(diào)查及防效計(jì)算 培養(yǎng)10 d后調(diào)查結(jié)果。根據(jù)葉盤上病斑面積占該葉盤面積的百分率確定病情嚴(yán)重度，記載發(fā)病葉盤數(shù)、病情嚴(yán)重度，按公式（1）、（2）計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

病情嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：無(wú)病斑；1級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的5%及以下；3級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的6%～25%；5級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的26%～50%；7級(jí)：病斑面積占整個(gè)葉面積的51%以上。

病情指數(shù)=∑（各級(jí)病株數(shù)×相對(duì)應(yīng)級(jí)值）調(diào)查總株數(shù)×7×100 （1）

防治效果（%）=（1-防治區(qū)病情指數(shù)空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)）×100（2）

1.4.4 數(shù)據(jù)處理及分析方法 以藥劑濃度對(duì)數(shù)值為自變量x、以防治效果的幾率值為因變量y作回歸分析，求得毒力回歸曲線方程y=a+bx和相關(guān)系數(shù)r，根據(jù)回歸方程計(jì)算各單劑及不同比例混劑的EC50及其95%置信限。

按Wadley法，計(jì)算增效系數(shù)（SR）；根據(jù)SR值評(píng)價(jià)藥劑混用的聯(lián)合作用類型，即SR<0.5為拮抗作用，0.5≤SR≤1.5為相加作用，SR>1.5為增效作用，公式如式（3）、（4）。

SR=EC50（th）EC50（ob）（3）

EC50（th）=Pa+PbPaEC（A）50+PbEC（B）50（4）

式中：A、B分別為進(jìn)行混配的兩種單劑，Pa、Pb為相應(yīng)單劑在混劑中的比例，EC50（th）為混劑EC50理論值，EC50（ob）為混劑EC50實(shí)測(cè)值。

2 結(jié)果與分析

2.1 嘧菌酯等3種單劑對(duì)葡萄霜霉病的毒力

表1數(shù)據(jù)表明，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽、嘧菌酯、烯酰嗎啉對(duì)葡萄霜霉病菌的EC50（ob）分別為64.961、2.010、2.722 mg·L-1，嘧菌酯對(duì)葡萄霜霉病的室內(nèi)生物活性與烯酰嗎啉基本相當(dāng)，明顯高于聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽。

2.2 聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽與嘧菌酯對(duì)葡萄霜霉病的聯(lián)合毒力

表2數(shù)據(jù)表明，聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽與嘧菌酯15∶1、12∶1、9∶1、6∶1、3∶1和1∶1等6個(gè)供試配比的EC50（ob）分別為14.355、12.098、9.625、7.349、4.620、2.568 mg·L-1，對(duì)葡萄霜霉病均具有較高的室內(nèi)生物活性；6個(gè)供試配比的SR均大于1.5，表現(xiàn)為增效作用，其中，（6～9）∶1配比的增效作用最明顯。

2.3 烯酰嗎啉與嘧菌酯對(duì)葡萄霜霉病的聯(lián)合毒力

表3數(shù)據(jù)表明，烯酰嗎啉與嘧菌酯4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2等5個(gè)供試配比的EC50（ob）分別為1.445、1.451、1.465、1.499、1.556 mg·L-1，對(duì)葡萄霜霉病均具有很高的室內(nèi)生物活性；5個(gè)供試配比的SR均大于1.5，表現(xiàn)為增效作用，其中，6∶4配比的SR最大、增效作用最明顯。

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，嘧菌酯對(duì)葡萄霜霉病的室內(nèi)生物活性與烯酰嗎啉基本相當(dāng)，明顯高于聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽。聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽與嘧菌酯以（6～9）∶1混配的SR最大，增效作用最明顯；烯酰嗎啉與嘧菌酯以6∶4混配的SR最大，增效作用最明顯。

不同作用位點(diǎn)的藥劑混配能增強(qiáng)對(duì)病菌生長(zhǎng)的干擾而具有增效作用，是藥劑復(fù)配的基本原則之一。聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽是一種高分子聚合物，其中的陽(yáng)離子與微生物細(xì)胞表面的陰離子部位形成靜電吸附，阻礙細(xì)胞溶菌酶作用，使細(xì)胞表層結(jié)構(gòu)變性破壞，從而殺死細(xì)菌或抑制細(xì)菌繁殖[12，13]。聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽、嘧菌酯、烯酰嗎啉3種藥劑的作用位點(diǎn)不同，符合藥劑復(fù)配的基本原則。

本試驗(yàn)為室內(nèi)人工培養(yǎng)條件下測(cè)定結(jié)果，在自然條件下，由于藥劑對(duì)病害的作用效果要受田間環(huán)境因素和其他害蟲(chóng)發(fā)生情況等因素的影響，室內(nèi)測(cè)定結(jié)果與田間實(shí)際防治效果可能會(huì)有一定偏差，藥劑的田間防治效果還需根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)一步驗(yàn)證。

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