劉瑜

摘 要：酶免分析儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物、衛(wèi)生等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)、檢測(cè)和分析過程，但目前并沒有相應(yīng)的規(guī)程或規(guī)范作為酶免分析儀的校準(zhǔn)依據(jù)。本文對(duì)酶免分析儀的組成部分和工作原理進(jìn)行了歸納和分析，依據(jù)現(xiàn)有的量值溯源方法和體系對(duì)酶免分析儀的校準(zhǔn)和量值溯源進(jìn)行了探討。

關(guān)鍵詞：酶免分析儀；校準(zhǔn)方法；量值溯源

中圖分類號(hào)：R446 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

1.酶免分析儀組成結(jié)構(gòu)和工作原理

全自動(dòng)酶免分析儀又稱全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)和全自動(dòng)酶免工作站，可以全自動(dòng)完成酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試驗(yàn)，包括稀釋、樣本分配、試劑分配、溫育、洗板、酶標(biāo)判讀、結(jié)果打印等全步驟。該儀器廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物、衛(wèi)生等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)、檢測(cè)和分析過程，尤其是在醫(yī)療衛(wèi)生檢測(cè)行業(yè)中酶免分析儀更是必不可少的檢測(cè)儀器，在各種傳染病檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu)育初篩檢測(cè)、糖尿病、腫瘤檢測(cè)等都有著廣泛的應(yīng)用。

酶免分析儀主要由酶標(biāo)系統(tǒng)、溫育系統(tǒng)、移液系統(tǒng)和洗板系統(tǒng)組成。其中：移液系統(tǒng)負(fù)責(zé)定量向酶標(biāo)板樣品杯中加入樣品、酶結(jié)合物或反應(yīng)底物；溫育系統(tǒng)負(fù)責(zé)控制反應(yīng)溫度，使抗原與抗體有效結(jié)合；酶標(biāo)系統(tǒng)是酶免分析儀的核心部分，其原理是依據(jù)酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物與酶的相應(yīng)底物能夠產(chǎn)生顯色反應(yīng)，顯色程度與被檢測(cè)樣品中待測(cè)抗體或抗原的含量相關(guān)，根據(jù)顯色物吸光度值確定待測(cè)物質(zhì)含量，不同待測(cè)顯色物質(zhì)有其各自的特征吸收譜線，并遵守朗伯-比爾定律；洗板系統(tǒng)是酶免分析儀中的一個(gè)重要部件，用以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)及雜質(zhì)，樣品杯是否清洗干凈，是決定酶免分析儀檢定結(jié)果是否正確的關(guān)鍵因素之一。

2.酶免分析儀主要校準(zhǔn)項(xiàng)目

根據(jù)酶免分析儀的工作原理和組成結(jié)構(gòu)，可以分別對(duì)酶標(biāo)系統(tǒng)、溫育系統(tǒng)、移液系統(tǒng)和洗板系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)和量值溯源以達(dá)到對(duì)整機(jī)校準(zhǔn)的目的。因此本規(guī)范參考了JJG 861-2007《酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程》的技術(shù)指標(biāo)來(lái)作為酶免分析儀酶標(biāo)系統(tǒng)部分的技術(shù)指標(biāo)。酶免分析儀的孵育系統(tǒng)與培養(yǎng)箱的功能相似，且酶免分析儀廣泛地應(yīng)用于各種傳染病檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu)育初篩檢測(cè)、糖尿病、腫瘤檢測(cè)等方面，因此本規(guī)范選取了比較常用的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 223-2002《乙型肝炎表面抗原酶免分析儀檢驗(yàn)方法》和JJF 1101-2003《環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備溫度、濕度校準(zhǔn)規(guī)范》作為孵育系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)的參考。酶免分析儀移液系統(tǒng)無(wú)論在使用的量程范圍上還是使用的精度上都符合JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》的適用范圍，所以本規(guī)范參考JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》來(lái)制定移液系統(tǒng)的技術(shù)指標(biāo)。因此酶免分析儀的計(jì)量特性和技術(shù)指標(biāo)見表1。

3.酶免分析儀的主要校準(zhǔn)設(shè)備

分光光度計(jì)（波長(zhǎng)示值誤差優(yōu)于1nm）；光譜中性濾光片：吸光度標(biāo)稱值分別：0.2Abs、0.5Abs、1.0Abs、1.5Abs（不確定度≤0.01Abs）；分析天平（精度十萬(wàn)分之一）；數(shù)字溫度計(jì)（最小分度不低于0.1℃）；蒸餾水。

4.酶免分析儀校準(zhǔn)方法

4.1 波長(zhǎng)示值誤差和波長(zhǎng)重復(fù)性

將儀器特征波長(zhǎng)濾光片放在分光光度計(jì)的樣品槽里，利用分光光度計(jì)的掃描功能，測(cè)出峰值，測(cè)量3次取平均值與理論值之差為儀器波長(zhǎng)示值誤差△λ，取3次測(cè)量的極差為波長(zhǎng)重復(fù)性δλ。

4.2 吸光度示值誤差

依次選用405nm、450nm、490nm、630nm或儀器特有的波長(zhǎng)，對(duì)吸光度分別為0.2、0.5、1.0、1.5的標(biāo)準(zhǔn)濾光片以空氣為參比進(jìn)行測(cè)量，連續(xù)測(cè)量3次，記錄儀器示值并計(jì)算其平均值。吸光度示值誤差△A按公式（3）計(jì)算：

4.3 吸光度通道差異

在450nm波長(zhǎng)下，將吸光度為1.0的標(biāo)準(zhǔn)濾光片放在不同通道下以空氣為參比進(jìn)行測(cè)量，并記錄吸光度示值。通道差異δA 按公式（4）計(jì)算：

4.5 孵育系統(tǒng)溫度波動(dòng)和溫場(chǎng)均勻性

對(duì)中部測(cè)溫點(diǎn)連續(xù)測(cè)量30分鐘，記錄溫度示值最大值T中部max和最小值T中部min，孵育系統(tǒng)溫度波動(dòng)σT按公式（6）進(jìn)行計(jì)算：

4.6 移液容量相對(duì)誤差和重復(fù)性

保證室內(nèi)環(huán)境有良好的控溫條件，將酶免分析儀和純水在恒溫條件下放置一段時(shí)間，使其溫度與室溫相同。取干凈的樣品杯放在電子天平上，待天平示值穩(wěn)定后，按下歸零鍵使天平復(fù)零。設(shè)定好移液器移液的體積，用酶免分析儀的移液器將純水移入樣品杯中。記錄純水的溫度，將樣品杯放在電子天平上，記錄此時(shí)天平顯示的數(shù)值，重復(fù)測(cè)量6次，記錄每一次的重量值mi。按照公式（8）算出20度時(shí)的實(shí)際移液容量V20：

4.7 洗板系統(tǒng)最大殘留量

將洗滌液全部換為純水，將溫度計(jì)插入純水中，待溫度計(jì)示值穩(wěn)定5min后測(cè)定純水的溫度。選1個(gè)干凈的樣品杯放入天平中稱量，得到空杯質(zhì)量M0。把該樣品杯放入空的酶標(biāo)板中，開啟洗板系統(tǒng)用純水對(duì)樣品杯進(jìn)行清洗。清洗完后，將樣品杯放入電子天平中進(jìn)行稱量，得到清洗后的樣品杯質(zhì)量M1，則清洗后每杯的殘留量△M按

結(jié)語(yǔ)

本文所述的校準(zhǔn)方法通過對(duì)酶免分析儀各個(gè)組成部分分別進(jìn)行校準(zhǔn)和量值溯源，能夠比較全面地對(duì)儀器的整體性能進(jìn)行評(píng)估和分析，更能比較好地完成酶免分析儀量值的溯源，使酶免分析儀測(cè)得的數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確可靠。

參考文獻(xiàn)

[1] JJG 861-2007，酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程[S].