張葉祥，周宜軒，胡業(yè)彬，何 佳

養(yǎng)肝益水顆粒對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腎臟保護(hù)作用的影響

張葉祥，周宜軒，胡業(yè)彬，何 佳

目的 觀察養(yǎng)肝益水顆粒對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓、尿微量白蛋白(尿MA)、腎臟組織中內(nèi)皮素、一氧化氮、血管性假性血友病因子水平的影響。方法 將SHR大鼠隨機(jī)分為中藥組(養(yǎng)肝益水顆粒)、西藥組(卡托普利組)、模型組，每組8只。另外選取Wistar-Kyoto大鼠8只作為正常對(duì)照組。灌胃6周后檢測(cè)其血壓、尿MA、腎臟組織中內(nèi)皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、血管性假性血友病因子(vWF)的表達(dá)。結(jié)果 中藥組能夠降低SHR大鼠血壓進(jìn)行性增高的趨勢(shì)；治療后尿MA低于模型組(P<0.01)；中藥組腎臟組織中ET-1、vWF的表達(dá)較模型組顯著下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而NO水平較模型組顯著升高(P<0.01)。結(jié)論 中藥養(yǎng)肝益水顆粒可以減弱SHR大鼠血壓增高趨勢(shì)，持久降低血壓，減少SHR大鼠尿MA的水平，降低腎組織中ET-1、vWF的表達(dá)，升高NO的水平，從而起到保護(hù)高血壓腎損害的作用。

自發(fā)性高血壓大鼠；養(yǎng)肝益水顆粒；血壓；尿微量白蛋白；內(nèi)皮素；一氧化氮；血管性假性血友病因子

高血壓(essential hypertension，EH)是臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病，影響重要臟器的功能，尤其高血壓腎損害漸進(jìn)發(fā)展直至發(fā)生尿毒癥，近年來(lái)其發(fā)生率逐年增高，為醫(yī)學(xué)界研究的重要課題[1-2]。而高血壓早期腎損害起病隱匿，一旦出現(xiàn)臨床癥狀，損害就會(huì)進(jìn)行性加重，直至出現(xiàn)終末期腎病。因而，早診斷、早干預(yù)具有重要意義。高血壓直接導(dǎo)致病人血管內(nèi)皮功能紊亂，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷；血管內(nèi)皮損傷是“高血壓-內(nèi)皮-心血管事件”鏈的始動(dòng)因子和載體。因此，除降壓之外的另一個(gè)治療新靶點(diǎn)是對(duì)高血壓病人血管內(nèi)皮功能的干預(yù)，尋找具有內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的藥物成為治療的趨勢(shì)[3]。本實(shí)驗(yàn)觀察養(yǎng)肝益水顆粒(我院院內(nèi)制劑)對(duì)高血壓病人血管內(nèi)皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、血漿血管性假性血友病因子(vWF)的干預(yù)，進(jìn)一步評(píng)估其對(duì)高血壓病人早期腎損害的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 一般材料 選取SHR大鼠24只，12周齡，體重(182±18.5)g，雌雄各半。選取12周齡、雌雄各半的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠8只，體重(195±18.9) g，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。養(yǎng)肝益水顆粒(由黃芪、菟絲子、益母草、芡實(shí)、懷牛膝、丹參等組成)，由安徽省中醫(yī)院制劑中心提供；卡托普利由上海三維制藥有限公司生產(chǎn)；生理鹽水由安徽豐原藥業(yè)生產(chǎn)；尿MA試劑盒購(gòu)自上海太陽(yáng)生物公司；ET-1試劑盒購(gòu)自北京華英生物技術(shù)研究所；NO、vWF試劑盒購(gòu)自南京建成生物有限公司；BP-6動(dòng)物血壓測(cè)量?jī)x購(gòu)自成都泰盟科技有限公司。

1.2 方法 將24只SHR大鼠隨機(jī)分為中藥組(養(yǎng)肝益水顆粒)、西藥組(卡托普利組)、模型組，每組8只；WKY大鼠8只作為正常對(duì)照組。中藥組(養(yǎng)肝益水顆粒)以相當(dāng)于成人每天口服劑量的5倍量即15.5 g/(kg·d)生藥的混懸液灌胃；西藥組(卡托普利組)以相當(dāng)于成人劑量的兩倍即以10.2 mg/(kg·d)混懸液灌胃；模型組、正常對(duì)照組均每日灌服生理鹽水1次；灌服量均為2 mL，共6周。飼養(yǎng)溫度16℃～24℃，采用12 h光照。實(shí)驗(yàn)期間給予標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。

1.3 檢測(cè)方法 每天灌胃前，先用紅外線照射鼠尾動(dòng)脈15 min，定時(shí)測(cè)量大鼠的收縮壓(SBP)，連續(xù)測(cè)量3天，取平均值。給藥后1周、2周、4周、6周時(shí)分別以同樣方法測(cè)量鼠尾動(dòng)脈收縮壓。于給藥前后搜集大鼠24 h尿，留取2 mL，保存溫度-20℃，待統(tǒng)一檢測(cè)。ET-1、NO、vWF水平：麻醉后從大鼠頸部動(dòng)脈抽取2 mL抗凝血，迅速以2 000 r/min離心10 min，取上清于子彈頭中備測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1 生存狀況 24只12周齡SHR大鼠以及8只12周齡WKY大鼠。隨機(jī)分為中藥組(養(yǎng)肝益水顆粒)、西藥組(卡托普利組)、模型組各8只，正常對(duì)照組8只。灌胃中藥組、西藥組各死亡1只，可能誤吸死亡。實(shí)際獲得30只大鼠實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。治療后各中藥組、西藥組SHR大鼠毛色及精神狀況均較治療前佳，活動(dòng)較多；模型組精神狀況欠佳，活動(dòng)量少；WKY大鼠精神狀態(tài)較好，無(wú)明顯變化。

2.2 各組大鼠血壓比較 治療前SHR大鼠血壓顯著高于WKY大鼠(P<0.01)，模型組大鼠的血壓呈進(jìn)行性增高的趨勢(shì)，而中藥組、西藥組均能降低血壓進(jìn)行性增高的趨勢(shì)。12周齡SHR大鼠的血壓仍然處于自發(fā)性升高的階段。西藥組降壓效果最好，但與中藥組在降壓的幅度上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。中藥組在治療前后血壓顯著下降(P<0.05)，在第6周時(shí)與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血壓比較(±s) mmHg

2.3 各組大鼠尿MA比較 治療前后各組SHR大鼠尿MA均高于正常組(P<0.01)；且模型組與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；中、西藥組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但中藥組與西藥組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠尿MA的比較(±s) mg/L

2.4 各組大鼠血管內(nèi)皮NO、ET-1、vWF因子水平的比較 治療后中藥組、西藥組血管內(nèi)皮ET-1、vWF水平顯著低于模型組(P<0.01)，但組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，兩組與正常對(duì)照組相近(P>0.05)；NO水平顯著高于模型組(P<0.01)，組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，兩組與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血管內(nèi)皮NO、ET-1、vWF因子水平比較(±s)

3 討 論

高血壓可導(dǎo)致重要臟器，如心、腦、腎等靶器官的進(jìn)行性損害，直至其發(fā)生功能衰竭。高血壓早期腎損害的機(jī)制：隨著高血壓程度加劇、病程加長(zhǎng)，高血壓導(dǎo)致腎小球內(nèi)高壓力、高灌注、高濾過(guò)率，腎小球毛細(xì)血管損傷，通透性增加，使微量白蛋白尿丟失增加，發(fā)生臨床微量白蛋白尿。此時(shí)，如果嚴(yán)格控制血壓，尚可穩(wěn)定，甚至逆轉(zhuǎn)早期腎損害的加劇趨勢(shì)。

中醫(yī)學(xué)根據(jù)高血壓的臨床表現(xiàn)，多歸屬于“眩暈”、“頭痛”等范疇。但對(duì)于原發(fā)性高血壓早期腎損害的認(rèn)識(shí)無(wú)明確記載。我院名老中醫(yī)周宜軒教授認(rèn)為[4]，高血壓早期腎損害的主要病機(jī)是：肝腎陰虛兼血瘀?！耙夜锿础?，肝腎陰虛，“腎藏精”功能失調(diào)，精微外漏，故出現(xiàn)微量白蛋白尿；陰液不足，加之“久病必瘀”，瘀血內(nèi)生。因此，血脈瘀阻是高血壓發(fā)展的必然轉(zhuǎn)歸。周宜軒教授采用補(bǔ)肝腎、活血脈、固精微大法，創(chuàng)制養(yǎng)肝益水顆粒，臨床療效顯著。先前的臨床研究表明[5]，在西醫(yī)常規(guī)降壓藥物基礎(chǔ)上，加用養(yǎng)肝益水顆粒可以更好地控制血壓，改善原發(fā)性高血壓病人血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，這種作用獨(dú)立于降壓之外，可能與改善原發(fā)性高血壓病人炎性細(xì)胞因子有關(guān)。蔡曼曼等[6]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察到，養(yǎng)肝益水顆粒干預(yù)SHR大鼠腎臟組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、磷脂酰肌醇-3和蛋白激酶B進(jìn)而發(fā)揮其對(duì)高血壓早期腎損害的保護(hù)作用。

高血壓是心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素之一，降低血壓對(duì)于減少心腦血管事件具有重要意義。內(nèi)皮功能障礙是介導(dǎo)高血壓血管負(fù)面影響的重要機(jī)制之一[7]。血管內(nèi)皮細(xì)胞受損時(shí)，vWF釋放增多。王曉春等[8]發(fā)現(xiàn)高血壓病人的vWF明顯高于正常組。ET-1為強(qiáng)大的血管內(nèi)皮收縮因子，NO為內(nèi)皮依賴(lài)性舒張因子。本研究表明，治療6周后養(yǎng)肝益水組血壓大鼠明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以降低大鼠血壓進(jìn)行性增高的趨勢(shì)。治療后養(yǎng)肝益水顆粒組血管內(nèi)皮ET-1、vWF水平顯著低于模型組(P<0.01)，NO水平顯著高于模型組(P<0.01)。因此，養(yǎng)肝益水顆粒通過(guò)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞因子的干預(yù)，從而發(fā)揮其保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，降低血壓，保護(hù)腎損害的作用。

[1] 陸再英，鐘南山．內(nèi)科學(xué)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：251．

[2] 張琪，徐瑞，范貴娟.通心絡(luò)防治高血壓腎損害研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，32(2)：277-279.

[3] Kcdziora-Komatowska K，Czucxzeko J，Pawluk H，et al.The markers of oxidative stress and activity of the antioxidant system in the blood of elderly patients with essential arterial hypertension[J].Cell Mol Biol Lett，2004，9(4A)：635-641.

[4] 張葉祥.周宜軒用養(yǎng)肝益水顆粒治療原發(fā)性高血壓早期腎損害經(jīng)驗(yàn)探析[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2013，12(11)：1520-1521.

[5] 張葉祥.養(yǎng)肝益水顆粒對(duì)高血壓患者尿微量白蛋白及血管內(nèi)皮功能影響的臨床研究[J ].新中醫(yī)，2013，45(11)：13-15.

[6] 蔡曼曼，龍子江，周宜軒，等.養(yǎng)肝益水顆粒對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腎臟組織TGF-β、PI3K和PKB的影響[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2013，36(4)：257-260.

[7] 毛文星，李冰，王志梅，等.氧化應(yīng)激、血管內(nèi)皮功能障礙與高血壓[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，14(19)：3770-3774.

[8] 王曉春，葛慶峰，王蔓莉.高血壓前期患者血管內(nèi)皮功能的變化[J].山東醫(yī)藥，2011，51(32)：54-55.

(本文編輯王雅潔)

Renal Protective Effect of Yanggan Yishui Granule in Spontaneously Hypertensive Rats

Zhang Yexiang，Zhou Yixuan，Hu Yebin，He Jia

First Affiliated Hospital of Anhui University of Trdiditional Chinese Medicine，Hefei 230031，Anhui，China

Objective To investigate the effect of Yanggan Yishui granule (YYG) on the levels of blood pressure，urinary microalbuminuria (MA) in urine， kidney tissue endothelin-1 (ET-1)， nitricoxide (NO)， von Willebrand factor(vWF) in spontaneously hypertensive rats (SHR) ， and its mechanism of renal protection of SHR. Methods SHR were randomly divided into YYG group， captopril group， model group，8 each group.Eight Wistar-Kyoto rats were as normal control group.After 6 weeks，the blood pressure，urinary MA， ET-1 in the kidney tissue， the expression of nitric oxide (NO) and vWF were tested. Results The blood pressure trend of progressive increase reduced in YYG group.Urinary MA was lower than that in model group after treatment (P<. 01).Compared with model group， the expressions of kidney tissue ET-1，vWF decreased significantly in YYG group(P<0.01).NO concentration significantly increased compared with model group (P< 0.01). Conclusion YYG has renal protective effect，which can reduce increased blood pressure， lower blood pressure， reduce the levels of urine MA， decrease the expressions of ET-1 and vWF in renal tissue， increase the levels of NO in SHR.

spontaneous hypertension rats；Yanggan Yishui granule；blood pressure；urinary microalbuminuria；endothelin； nitricoxide；von Willebrand factor

安徽中醫(yī)藥大學(xué)基金項(xiàng)目(No.2013qn026)

安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院(合肥 230031)，E-mail：zhangyx1234@126.com

引用信息： 張葉祥，周宜軒，胡業(yè)彬，等.養(yǎng)肝益水顆粒對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠腎臟保護(hù)作用的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2016，14(24)：2891-2893.

R544.1 R289.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.24.012

1672-1349(2016)24-2891-03

2016-08-06)