陳有軍，嚴(yán)群超，李 杰

(1廣州宏韻醫(yī)藥科技股份有限公司，廣州 510663；2暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣州 510632；3新疆絲路弘毅農(nóng)業(yè)科技有限公司，烏魯木齊 830011)

萌芽鷹嘴豆主要異黃酮變化規(guī)律及分布研究

陳有軍1，嚴(yán)群超2，李 杰3

(1廣州宏韻醫(yī)藥科技股份有限公司，廣州 510663；2暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣州 510632；3新疆絲路弘毅農(nóng)業(yè)科技有限公司，烏魯木齊 830011)

目的：考察鷹嘴豆萌芽過程中鷹嘴豆芽素A和芒柄花素含量的變化規(guī)律及豆芽不同部位2種成分含量的差異。方法：將鷹嘴豆在22 ℃萌芽，分別于萌芽的0、1、2、3、5、7、9d取樣品測(cè)定鷹嘴豆芽素A和芒柄花素含量，取萌芽7d鷹嘴豆，分別取其子葉、胚根和胚芽測(cè)定上述2種成分含量，分析2種成分含量變化規(guī)律和豆芽不同部位含量差異。 結(jié)果：鷹嘴豆芽素A 和芒柄花素含量自發(fā)芽后呈現(xiàn)不斷增長(zhǎng)的趨勢(shì)，第3～7d增長(zhǎng)迅速、第7～9d后增速放緩，不同部位含量大小依次為胚根>胚芽>子葉。結(jié)論：鷹嘴豆萌芽過程中鷹嘴豆芽素A和芒柄花素含量呈不斷上升趨勢(shì)，成分主要集中在胚根和胚芽中。

鷹嘴豆；萌芽；鷹嘴豆芽素A；芒柄花素

鷹嘴豆(Cicerarietinum)是世界上栽培面積較廣的食用豆類之一，中醫(yī)認(rèn)為，鷹嘴豆味甘、性平、無毒，具有補(bǔ)中益氣、溫腎壯陽、消渴、解血毒、強(qiáng)身健體和增強(qiáng)記憶力等功效。鷹嘴豆富含多種蛋白質(zhì)和氨基酸、異黃酮、皂苷類、黃烷酮類、有機(jī)酸、糖類、維生素、粗纖維及微量元素等成分[1]，具有顯著的降血糖、降血脂和抗癌等活性，其主要活性成分為異黃酮類成分[1，2]。鷹嘴豆中所含異黃酮類主要包括鷹嘴豆芽素A和芒柄花素類等，研究發(fā)現(xiàn)，這些異黃酮類成分在發(fā)芽過程中處于動(dòng)態(tài)變化的狀態(tài)，發(fā)芽后含量顯著增長(zhǎng)[1，3]，但其在發(fā)芽周期的變化規(guī)律，以及鷹嘴豆芽不同部位異黃酮類含量差異尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)擬通過考察其不同發(fā)芽周期及不同部位異黃酮含量，進(jìn)一步探索其萌芽周期的變化規(guī)律和異黃酮的分布規(guī)律，為針對(duì)功能性篩選或富集成分等提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

鷹嘴豆種子，購(gòu)自新疆木壘縣，經(jīng)新疆木壘縣農(nóng)業(yè)局鑒定為鷹嘴豆的干燥種子。鷹嘴豆芽素A對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物藥品檢定所(批號(hào)：111708-200501)；芒柄花素對(duì)照品，購(gòu)自上海永恒生物科技有限公司(批號(hào)：20140506)；甲醇為色譜純、乙醇和磷酸為分析純，均購(gòu)自天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 試驗(yàn)儀器

島津液相色譜儀，包括LC-15C 送液泵、 SPD-15C 紫外可見雙波長(zhǎng)檢測(cè)器和 SIL-10AF 自動(dòng)進(jìn)樣器；分析天平(常州市衡正電子儀器有限公司)；超聲波清洗機(jī)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件 Wondasil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇-0.1mol/L磷酸(80：20)，流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：25℃。

1.3.2 樣品制備

(1)對(duì)照品溶液：分別精密稱取P2O5減壓干燥器中干燥12h的鷹嘴豆芽素A對(duì)照品和芒柄花素對(duì)照品，加乙醇配制成每1 mL含鷹嘴豆芽素A 0.144mg和含芒柄花素0.119mg的混合溶液，即得。

(2)萌芽鷹嘴豆：取干燥飽滿的鷹嘴豆樣品，加適量水浸泡后，置22℃溫度下發(fā)芽，分別于發(fā)芽0、1、2、3、5、7、9d取樣品，漂洗后80℃干燥，備用。

(3)供試品溶液：取干燥好的萌芽鷹嘴豆，粉碎過80目篩，取細(xì)粉0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇溶液25mL，稱定重量，超聲處理30min，放至室溫后，稱定重量，加溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用 0.45μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.3.3 檢測(cè)方法建立

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密吸取對(duì)照品溶液2、5、10、15、20μL測(cè)定吸收峰面積。以吸收峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)作圖，進(jìn)行線性回歸，鷹嘴豆芽素 A和芒柄花素的回歸方程分別為：y=43.163x+0.4754(R2=0.999 4)、y=71.214x+0.323 9(R2=0.999 8)，結(jié)果表明鷹嘴豆芽素 A在0.288～2.88μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好、芒柄花素在0.238～2.38μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

(2)精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液 10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件，測(cè)定吸收峰面積，計(jì)算得鷹嘴豆芽素A 的RSD為0.69%、芒柄花素的RSD為1.49%，表明該方法精密度較好。

(3)重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品6 份，每份0.8g，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下的方法操作制備溶液，進(jìn)樣10μL，測(cè)定吸收峰面積，計(jì)算得鷹嘴豆芽素A 的RSD為1.87%、芒柄花素的RSD為2.12%，說明該方法重復(fù)性較好。

(4)穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10μL，分別于第0、1、2、4、6、8h進(jìn)樣，測(cè)得峰面積，計(jì)算得鷹嘴豆芽素A 的RSD為0.79%，芒柄花素的RSD為2.13%，說明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

(5)回收率試驗(yàn)：取已知濃度的萌芽鷹嘴豆粉6份(鷹嘴豆芽素A 和芒柄花素含量分別為0.308%和0.217%，每份0.6g，精密稱定，依次精密加入鷹嘴豆芽素A對(duì)照品和芒柄花素對(duì)照品1.71μg和1.20μg，依照“2.2.3”項(xiàng)下的方法操作制備溶液。按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果鷹嘴豆芽素A平均回收率(n=6)為98.71%、RSD為1.05%；芒柄花素平均回收率(n=6)為99.87%、RSD為1.09%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同萌芽期鷹嘴豆芽素A和芒柄花素含量變化

分別取不同發(fā)芽期的萌芽鷹嘴豆樣品依據(jù)“2.2.3”制備供試品溶液，測(cè)定鷹嘴豆芽素A 和芒柄花素含量，結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示，鷹嘴豆芽素A 和芒柄花素含量自發(fā)芽后一直呈現(xiàn)不斷增長(zhǎng)的趨勢(shì)，0～3d增長(zhǎng)速度較緩慢、第3～7d增長(zhǎng)迅速、第7d后至第9d增速放緩。

2.2 不同部位對(duì)鷹嘴豆芽素A和芒柄花素含量的影響

取干燥好的萌芽鷹嘴豆，分別剝?nèi)∑渥尤~、胚根和胚芽，依據(jù)“2.2.3”制備供試品溶液，其中胚根和胚芽供試品溶液稀釋10倍后作供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定鷹嘴豆芽素A 和芒柄花素含量，結(jié)果見圖2和圖3。結(jié)果顯示，萌芽鷹嘴豆不同部位中鷹嘴豆芽素A和芒柄花素含量相關(guān)較大，含量大小依次為胚根>胚芽>子葉。

圖1 不同萌芽期鷹嘴豆芽素A和芒柄花素含量

圖2 萌芽鷹嘴豆不同部位鷹嘴豆芽素A含量

圖3 萌芽鷹嘴豆不同部位芒柄花素含量

3 討論

本文建立了HPLC高效液相色譜測(cè)定鷹嘴豆中豆芽素A和芒柄花素含量的方法，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可用于鷹嘴豆的含量測(cè)定和質(zhì)量控制。但在成分測(cè)定過程中本試驗(yàn)亦參考文獻(xiàn)報(bào)道考察了染料木素[4]，但并未發(fā)現(xiàn)該成分，在萌芽0d時(shí)，各成分含量極低，與文獻(xiàn)報(bào)道存在一定的差異，這可能與樣品的不同采收期或不同產(chǎn)地有關(guān)。

種子在發(fā)芽過程中，可以引起多種酶類發(fā)生變化及蛋白組學(xué)發(fā)生改變，進(jìn)而引起成分含量變化[5，6]。鷹嘴豆在萌發(fā)過程中各營(yíng)養(yǎng)成分和植酸的含量亦發(fā)生了較顯著的變化，其中淀粉、可溶性糖、部分氨基酸及植酸和總酚等含量明顯下降，而蛋白質(zhì)含量則有上升趨勢(shì)，萌芽鷹嘴豆總異黃酮含量則遠(yuǎn)高于鷹嘴豆中異黃酮含量[3，7]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，鷹嘴豆萌芽后其主要異黃酮成分鷹嘴豆芽素A和芒柄花素含量均大幅度增加，萌芽第3～7d增長(zhǎng)速度迅速，第7d含量增長(zhǎng)速度放緩。萌芽鷹嘴豆2種主要異黃酮主要存在于胚根部位。本試驗(yàn)可為以萌芽方式篩選功能原料或富集鷹嘴豆異黃酮提供參考?！?/p>

[1]李朋收，劉洋洋，范冰舵，等.鷹嘴豆化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]，中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，6，20(11)：235-238.

[2]趙堂彥，孟茜，瞿恒賢，等.鷹嘴豆?fàn)I養(yǎng)功能特性及其應(yīng)用[J]. 糧油食品科技，2014，22(4)：38-41.

[3]Yue Gao,Yang Yao,Yingying Zhu，et al.Isoflavone Content and Composition in Chickpea (Cicer arietinum L.)Sprouts Germinated under Different Conditions[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2015，63(10)：2701-2707.

[4]邢江浩，孫曉莉，周軍.HPLC同時(shí)測(cè)定鷹嘴豆中染料木素、刺芒柄花素和鷹嘴豆芽素A的含量[J]. 藥物分析雜志，2009，29(1)：73-75.

[5]李新華，劉星波.大豆發(fā)芽過程中酶的含量變化及營(yíng)養(yǎng)變化研究[J]. 食品工業(yè)科技，2010，10(31)：149-151.

[6]劉寶祥，樸永哲，翟明昌，等.大麥發(fā)芽過程中蛋白質(zhì)組的變化研究[J]. 食品工業(yè)科技，2013，11(34)：108-111.

[7]肖俊松，吳華，張亞歌.鷹嘴豆萌發(fā)過程中營(yíng)養(yǎng)成分和抗?fàn)I養(yǎng)因子的變化規(guī)律[J]. 食品科學(xué)，2011，32(23 )：134-138.

(責(zé)任編輯 李燕妮)

Change Rule and Distribution of Main Isoflavones During Germination Process of Cicer arietinum

CHEN You-jun1，YAN Qun-chao2，LI Jie3

(1Guangzhou Hongyun Medical Scientific and Technological Co.Ltd，Guangzhou 510663，China；2School of Medicine Jinan University，Guangzhou 510632，China；3Xinjiang Dooou Agricultural Science and Technology Co.Ltd，Wulumuqi 830011，China)

【Objective】To observe the changing rule and distribution of main isoflavones including biochanin A and fermononetin during the germination process ofCicerarietinum.【Method】 Chickpeas germinated at 22 ℃ for 9 days，biochanin A and fermononetin were determined at 0，1，2，3，5，7，9 days，and them in cotyledons，radicals and plumules of germinated chickpea at the 7 day were also determined,then the change rule and distributions in different parts of the two isoflavones were evaluated.【Result】The contents of biochanin A and fermononetin were increased continually during the germination process，the increase speed was faster during 3 d to 7 d，and the increased speed were slower during 7 d to 9 d.The content of two main isoflavones in different parts was in the order of radicals,plumules,cotyledons.【Conclusion】The content of biochanin A and fermononetin were increased continually during the germination process，and they distributed mainly in the radicals and plumules.

chickpea；germination；biochanin A；fermononetin

陳有軍(1979— )，碩士，制藥工程師，研究方向：中藥研發(fā)等。