曹 慧，鄭軍科，施元旭，王璐璐

(浙江省質(zhì)量檢測(cè)科學(xué)研究院，杭州 310018)

油脂安全

同位素稀釋-GC-MS/MS測(cè)定植物油中鄰苯二甲酸酯

曹 慧，鄭軍科，施元旭，王璐璐

(浙江省質(zhì)量檢測(cè)科學(xué)研究院，杭州 310018)

采用同位素稀釋-氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(GC-MS/MS)技術(shù)同時(shí)測(cè)定植物油中16種鄰苯二甲酸酯類塑化劑。樣品用正己烷飽和的乙腈提取，經(jīng)固相萃取小柱凈化，采用GC-MS/MS測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明：該方法線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)在0.99以上，檢出限和定量限分別為3.0 μg/kg 和10.0 μg/kg；添加10、50、100 μg/kg 3個(gè)水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，植物油中16種鄰苯二甲酸酯的平均回收率在82.3%～104.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.3%～10.8%。該方法靈敏度高、干擾小、定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適合植物油中鄰苯二甲酸酯類塑化劑的檢測(cè)。

同位素稀釋；鄰苯二甲酸酯類；氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜；植物油

鄰苯二甲酸酯類(PAEs)塑化劑是一類有毒的有機(jī)污染物，會(huì)干擾神經(jīng)、免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)的正常調(diào)節(jié)，具有致突變、致癌和致畸性。由于與激素類似并可以模擬雌激素效應(yīng)，又被稱作環(huán)境激素。

目前，鄰苯二甲酸酯類塑化劑的測(cè)定方法主要有氣相色譜[1-3]和氣相色譜-質(zhì)譜法[4-7]、液相色譜[8-10]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[11-13]。因液相系統(tǒng)的管路本底較高，很難準(zhǔn)確定量，所以氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)是主要的檢測(cè)方法[14-16]。由于GB/T 21911—2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》前處理采用GPC技術(shù)，不僅前處理時(shí)間長(zhǎng)，而且GPC管路的本底高，定量困難。因此，本實(shí)驗(yàn)采用固相萃取方式對(duì)植物油樣品進(jìn)行凈化處理，縮短了前處理時(shí)間，降低了背景，并配以串聯(lián)質(zhì)譜的高選擇性反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)，大大提高了靈敏度，實(shí)現(xiàn)了16種鄰苯二甲酸酯類塑化劑二級(jí)質(zhì)譜的快速、準(zhǔn)確分析。由于串聯(lián)質(zhì)譜具有較強(qiáng)的選擇性，在提高靈敏度的同時(shí)避免了假陽(yáng)性的出現(xiàn)，更保證了結(jié)果的可靠性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

16種鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)品：鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)，鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)，鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)，鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)，鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)，鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)，鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)，鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)，鄰苯二甲酸二己酯(DHXP)，鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)，鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)，鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)，鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)，鄰苯二甲酸二苯酯(DPhP)，鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)，鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)，質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，迪馬科技有限公司。上述16種鄰苯二甲酸酯氘代同位素內(nèi)標(biāo)，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer GmbH公司。正己烷、丙酮、乙腈：色譜純。

ProElut PSA GLASS固相萃取小柱(1 g，6 mL)，迪馬科技有限公司。TSQ Quantum GC 氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：吸取液體標(biāo)樣100 μL，用正己烷稀釋定容到10 mL，配制成10 μg/mL的儲(chǔ)備液，密封儲(chǔ)存于4℃冰箱中，備用。使用時(shí)再用正己烷稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)標(biāo)溶液的配制：分別準(zhǔn)確稱取10 mg氘代同位素內(nèi)標(biāo)于10 mL容量瓶中，用丙酮定容，配制成1 mg/mL的儲(chǔ)備內(nèi)標(biāo)液，密封儲(chǔ)存于4℃冰箱中。分別吸取1 mg/mL的儲(chǔ)備內(nèi)標(biāo)液50 μL，用正己烷稀釋定容到10 mL，配制成5 μg/mL的儲(chǔ)備內(nèi)標(biāo)液，密封儲(chǔ)存于4℃冰箱中，備用。

1.2.2 樣品預(yù)處理

1.2.2.1 提取

取0.5 g試樣于玻璃離心管中，加入儲(chǔ)備內(nèi)標(biāo)液后，加入5 mL正己烷飽和的乙腈溶液，渦旋超聲，靜置后在4 000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至潔凈的試管中，40℃下氮?dú)獯抵两?，加? mL正己烷，振蕩混勻，待凈化。

1.2.2.2 凈化

固相萃取小柱依次加入5 mL丙酮和5 mL正己烷，流出液棄去，加入待凈化液，依次加入5 mL正己烷、5 mL 4%丙酮-正己烷，收集流出液，在40℃下氮?dú)獯抵两桑? mL正己烷定容后進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析測(cè)定。

1.2.3 氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析

參照參考文獻(xiàn)[17]對(duì)凈化樣品進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 母離子和子離子的選擇

在EI離子化模式下，通過(guò)全掃描方式找出各種目標(biāo)化合物的碎片離子，根據(jù)豐度比確定母離子。選擇子離子掃描方式，調(diào)節(jié)碰撞能量，選取碰撞后豐度較高的兩個(gè)子離子分別作為定量和定性離子，并確定其最佳碰撞能量的電壓值。表1為最終確定的母離子、子離子和碰撞能量等參數(shù)。

表1 16種鄰苯二甲酸酯的保留時(shí)間、母離子、子離子和碰撞能量

2.2 本底值的控制

由于鄰苯二甲酸酯類化合物容易產(chǎn)生污染，實(shí)驗(yàn)前，將玻璃器皿用超純水淋洗多次，清洗后再將玻璃器皿放入馬弗爐中烘烤2 h，冷卻至室溫后備用。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中避免使用塑料滴管、塑料試管及移液槍頭，試劑盡量使用進(jìn)口色譜純?cè)噭?。每次?shí)驗(yàn)過(guò)程中均進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)，保證空白的本底值小于定量限。

2.3 提取溶劑的優(yōu)化

分別選擇乙腈、甲醇、正己烷、乙酸乙酯作為提取溶劑。由于正己烷和乙酸乙酯為非極性溶劑，與植物油互溶，大量溶解的油脂很難凈化處理。甲醇和乙腈為極性溶劑，與植物油不互溶，且乙腈的提取效率明顯高于甲醇，故采用乙腈作為最佳提取溶劑。由于乙腈能溶解極小部分油脂，為了減少油脂等雜質(zhì)被乙腈提取出來(lái)，本實(shí)驗(yàn)采用正己烷飽和的乙腈溶液作為提取溶劑。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 線性范圍、檢出限和定量限

取質(zhì)量濃度分別為5、10、50、100、250、500、1 000 μg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)試，采用內(nèi)標(biāo)法定量，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線、相應(yīng)的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 16種鄰苯二甲酸酯的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

由表2可知，16種鄰苯二甲酸酯在5～1 000 μg/L的范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r2為0.991 4～0.999 8。分別按3倍信噪比和10倍信噪比計(jì)算得到16種鄰苯二甲酸酯化合物的檢出限和定量限，檢出限為3.0 μg/kg，定量限為10.0 μg/kg。

2.4.2 方法的回收率和精密度

在空白的植物油基質(zhì)中添加10、50、100 μg/kg 3個(gè)水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.2實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行預(yù)處理，進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 16種鄰苯二甲酸酯的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

續(xù)表3

PAEs添加量/(μg/kg)回收率/%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差/%PAEs添加量/(μg/kg)回收率/%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差/%DBP1095．66．95093．47．810090．05．3DHXP1099．69．65095．89．210097．39．3DMEP1089．67．95095．68．210092．35．6DEHP1099．25．95099．65．810099．35．2BMPP10102．39．650104．59．5100100．98．7DPhP1089．110．35088．510．810087．410．2DEEP1082．36．35085．66．810087．67．9DNOP1090．28．45093．67．610098．58．0DPP1088．98．55089．96．910090．25．8DNP1090．28．95090．38．610095．68．1

由表3可知，植物油中16種鄰苯二甲酸酯的回收率為82.3%～104.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%～10.8%，16種鄰苯二甲酸酯的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于15%，說(shuō)明該方法穩(wěn)定、可靠。

2.5 實(shí)際樣品的測(cè)試

采用本實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)實(shí)際植物油樣品進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示在3批大豆油、5批芝麻油樣品和3批花生油中均檢出鄰苯二甲酸二丁酯化合物，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 實(shí)際樣品鄰苯二甲酸酯的測(cè)試結(jié)果

3 結(jié) 論

本研究利用同位素稀釋-氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)植物油中的16種鄰苯二甲酸酯同時(shí)進(jìn)行分析。本方法采用的串聯(lián)質(zhì)譜選擇性強(qiáng)，有效地避免了假陽(yáng)性的可能，保證了定性和定量結(jié)果的可靠性。同時(shí)，串聯(lián)質(zhì)譜的高選擇性反應(yīng)監(jiān)測(cè)的特點(diǎn)，靈敏度高，定量結(jié)果能滿足現(xiàn)有檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。與現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)相比，該方法預(yù)處理簡(jiǎn)單，凈化效果好，回收率穩(wěn)定，一次能實(shí)現(xiàn)16種鄰苯二甲酸的快速分析，適合植物油中鄰苯二甲酸酯的分析測(cè)試。

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Determination of PAEs in vegetable oil by GC-MS/MS with isotope dilution

CAO Hui，ZHENG Junke，SHI Yuanxu，WANG Lulu

(Zhejiang Institute of Quality Inspection Science，Hangzhou 310018，China)

Sixteen phthalate esters(PAEs) were simultaneously determined in vegetable oil using gas chromatography-tandem mass spectrometry (GC-MS/MS) with isotope dilution. The samples were extracted with acetonitrile saturated byn-hexane and cleaned up with solid phase extraction column，then determined by GC-MS/MS using internal standard method for quantitative analysis. The results showed that the method had a good linear relationship with correlation coefficient above 0.99，and the detection limit and quantitation limit were 3.0 μg/kg and 10.0 μg/kg，respectively；adding PAEs mixed standard solution with three levels 10，50，100 μg/kg to vegetable oil，the mean recoveries of sixteen PAEs in vegetable oil were 82.3%-104.5%，and the relative standard deviations were 1.3%-10.8%. The method had high sensitivity，little interference and good precision，which was suitable for the determination of PAEs in vegetable oil.

isotope dilution；phthalate esters；gas chromatography-tandem mass spectrometry；vegetable oil

2016-02-26；

2016-10-27

浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督系統(tǒng)科研計(jì)劃資助(20150204)

曹 慧(1980)，女，高級(jí)工程師，博士，主要從事食品檢測(cè)和科研工作(E-mail)ch_zj_cn@163.com。

TS201.6;O657

A

1003-7969(2017)01-0080-05