王銳，曲炳楠，楊婧（黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，哈爾濱150040）

載siRNA的納米制劑研究進展Δ

王銳＊，曲炳楠，楊婧#（黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，哈爾濱150040）

目的：為小干擾RNA（siRNA）納米制劑遞送的研究提供參考。方法：以“基因治療”“RNA干擾”“小干擾RNA”“載體系統(tǒng)”“siRNA”“Gene therapy”“RNA interference”“Protamine”等為關(guān)鍵詞，組合查詢1996－2016年在PubMed、中國知網(wǎng)、萬方、維普等數(shù)據(jù)庫中的相關(guān)文獻，對載siRNA的納米制劑的導入方法、載體類型及影響遞送過程的主要因素進行綜述。結(jié)果：共檢索到相關(guān)文獻500余篇，其中有效文獻40篇。載siRNA的納米制劑導入方法主要分為物理化學法和載體介導法。在載體介導法中的非病毒載體，不僅克服了siRNA半衰期短、生物利用度低等缺點，而且在一定程度上提高了siRNA的遞送效率，是現(xiàn)代藥劑學研究的一個熱點。常用非病毒載體包括陽離子脂質(zhì)體、二元復合物納米載體、三元復合物納米載體。載體靶向性修飾、粒徑與表面電荷是遞送siRNA納米載體主要影響因素。siRNA的高效遞送依賴于新的高效、低免疫原性載體的開發(fā)以及納米制劑遞送系統(tǒng)的優(yōu)化。因此，可載siRNA的高效、低免疫原性納米制劑的研究任重而道遠。

基因治療；RNA干擾；小干擾RNA；載體系統(tǒng)

基因治療（Gene therapy）是指將外源正常基因?qū)氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，從而達到治療目的[1]。基因治療利用生物或非生物的方法，將特定基因封閉抑制或者激活來達到治療目的，可以從根源上修正引起疾病的異?；?，使治療手段從傳統(tǒng)的手術(shù)、放療以及化療擴大到分子水平?；蛑委熆梢赃x擇性地治療多種嚴重威脅人類健康的疾病，尤其在遺傳病、惡性腫瘤以及心血管疾病等方面取得了可喜的治療效果。其中，運用RNA干擾（RNA interference，RNAi）技術(shù)所研發(fā)的制劑更是受到醫(yī)藥專業(yè)研究人員的高度重視，被公認為在基因治療中具有巨大的研究潛力。而小干擾RNA（Small interfering RNA，siRNA）在RNAi技術(shù)中起到核心作用，但如何將siRNA運送到靶細胞則是研究的重點和難點。筆者以“基因治療”“RNA干擾”“小干擾RNA”“載體系統(tǒng)”“siRNA”“Gene therapy”“RNA interference”“Protamine”等為關(guān)鍵詞，組合查詢1996－2016年在PubMed、中國知網(wǎng)、萬方、維普等數(shù)據(jù)庫中的相關(guān)文獻。結(jié)果，共檢索到相關(guān)文獻500余篇，其中有效文獻40篇?，F(xiàn)對載siRNA的納米制劑的導入方法、載體類型及影響遞送過程的主要因素進行綜述，以期為siRNA納米制劑遞送的研究提供參考。

1 siRNA的定義與作用機制

基因沉默（Gene silencing）是指生物體中特定基因由于種種原因不表達或者是表達減少的現(xiàn)象。在生物體內(nèi)，正?；蚧顒訋缀醪划a(chǎn)生雙鏈RNA（Double-stranded RNA，dsRNA），而異常基因活動常常伴有dsRNA的出現(xiàn)。近年來，研究表明真核生物利用遺產(chǎn)基因活動產(chǎn)生的dsRNA為模版，抑制與異?；騞sRNA有同源性的基因表達，產(chǎn)生特異性的基因沉默，這種由dsRNA誘導產(chǎn)生的特異性基因沉默稱為dsRNA介導的基因干擾，簡稱RNAi。而siRNA則以專一性的方式，通過介導哺乳動物細胞的RNAi過程來沉默特定連接的靶基因的表達。

siRNA是由內(nèi)源性或者外源性dsRNA進入細胞后，在細胞質(zhì)中被Dicer酶加工而成的由21～23個核苷酸組成的短鏈RNA[2]。siRNA與細胞內(nèi)特定的蛋白質(zhì)形成RNA誘導沉默復合物（RNA-induced silencing complex，RISC），繼而siRNA解旋，并以RISC上的siRNA序列為向?qū)ВY(jié)合特定序列的mRNA，對mRNA進行酶切。酶切后的mRNA片段通過細胞質(zhì)內(nèi)核酸酶的非特異性降解，使特定的基因片段無法表達，從而實現(xiàn)基因沉默[3]。因為不同疾病的致病基因序列不同，所以siRNA針對不同疾病起治療作用時的基因序列也不同。

2 siRNA的研究現(xiàn)狀

siRNA的發(fā)現(xiàn)使分子生物學、醫(yī)學、藥學等在研究方法上有了突破，與此同時，發(fā)展和完善藥物制劑、藥物吸收、轉(zhuǎn)運機制以及給藥系統(tǒng)等研究成為最熱門的研究點。但是由于裸siRNA生物半衰期短、細胞靶向性差，且在血液、組織或者細胞質(zhì)中存在時容易被酶類所降解，生物利用度低；并且在生理情況下，其是帶有較強負電性的高度親水的大分子物質(zhì)，若直接導入機體內(nèi)難以穿透細胞膜作用于靶細胞[4-5]，所以還需特定的方法將治療基因有效地導入靶細胞中。因此，尋找可載siRNA的高效、低免疫原性的納米制劑載體，成為研究的前提和基礎(chǔ)，是一個亟待突破的研究領(lǐng)域。

3 載siRNA的納米制劑的導入方法

目前，基因?qū)胫饕譃槲锢砘瘜W導入法和載體介導導入法。

3.1 物理化學法

物理化學導入法包括DNA直接注射法、基因槍法、電穿孔法、顆粒轟擊法等，這些方法都各存在其優(yōu)勢和局限性。例如，DNA直接注射法雖然操作簡單，但注入數(shù)量有限，且腫瘤細胞轉(zhuǎn)化率低，一般需局部多點注射給藥；磷酸鈣共沉淀法會對細胞產(chǎn)生毒性作用；顯微注射法每次只能轉(zhuǎn)染一個細胞，費時、費力，只適用于轉(zhuǎn)染受精卵或早期胚胎細胞，而不能用于轉(zhuǎn)染大量細胞。

3.2 載體介導法

載體介導法是將目的基因以病毒或非病毒為載體遞送于靶組織或靶細胞的方法，按照載體來源可分為病毒載體和非病毒載體兩類[6]。

3.2.1 病毒載體病毒載體常用的載體病毒類型較多，如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、單純皰疹病毒等[7]。病毒載體最大的優(yōu)勢在于其遞送效率高，但是同時也面臨著在體內(nèi)容易發(fā)生嚴重的機體免疫反應(yīng)的副作用，而且生產(chǎn)成本過高、載體組裝困難、應(yīng)用范圍有限、可控性差等缺點，限制了其應(yīng)用[8]。例如，以腺病毒為載體的p53基因轉(zhuǎn)移治療惡性腫瘤的方案中，只能將腺病毒注射到腫瘤局部；若靜脈注射，病毒顆粒將很快被清除，能到達腫瘤組織的很少，難以達到治療效果，甚至會增加副作用[9]。而且，針對遺傳性疾病的基因治療方案大多采用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，其插入或整合到染色體的位置是隨機的，有引起插入突變及細胞惡性轉(zhuǎn)化的潛在危險[10]。因此，研究一種可操控的、低免疫原性、穩(wěn)定性好、生產(chǎn)方便且高轉(zhuǎn)染率的載體刻不容緩。

3.2.2 非病毒載體以脂質(zhì)體和陽離子聚合物為代表的新型非病毒載體，因其在體內(nèi)的穩(wěn)定性得到改善，且具有較好的靶向性和包封效果，降低了免疫刺激等優(yōu)點，得到廣泛的認可和深入的研究?，F(xiàn)就幾種常用非病毒載體進行介紹。

（1）陽離子脂質(zhì)體。陽離子脂質(zhì)體是典型的非病毒載體[11]，具有可重復轉(zhuǎn)染、無免疫原性、可自然降解、制備方法較成熟等[12]優(yōu)點，是目前研究者關(guān)注的熱點[13]。將siRNA遞送到靶細胞中誘導基因沉默，雖然裸siRNA不能通過細胞膜進入靶細胞，但可以通過陽離子脂質(zhì)體的遞送來實現(xiàn)[14-16]。臧新龍等[17]制備可裝載逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥功能的siRNA陽離子脂質(zhì)體，通過載體的有效傳遞，抑制腫瘤耐藥性，增強腫瘤對化療藥物的敏感性，且包封率高，具有良好的陰離子抵御能力，實現(xiàn)了最佳治療效果。

脂質(zhì)體是一種人工合成的磷脂載體[18]，根據(jù)磷脂的不同將脂質(zhì)體分成中性脂質(zhì)體、正電性脂質(zhì)體和負電性脂質(zhì)體。正電荷磷脂主要有N-[1-（2，3-二油酰氯）丙基]-N，N，N-氯化三甲銨、（2，3-二油氧基丙基）三甲基氯化銨、十八烷基二甲基溴化銨等[19]。陽離子脂質(zhì)體由1個陽離子兩親化合物（又稱作細胞轉(zhuǎn)染素）和1個輔助脂質(zhì)構(gòu)成的。陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染率與輔助脂質(zhì)成分的組合密切相關(guān)。由于單獨用細胞轉(zhuǎn)染素形成的脂質(zhì)體的穩(wěn)定性、膜融合性、轉(zhuǎn)染率均較差，所以需要添加中性或者兼性的輔助脂質(zhì)與之結(jié)合。其中，使用二油酰基磷脂酰乙醇胺比使用二油?；字Ｄ憠A、膽固醇所制得的脂質(zhì)融合性和轉(zhuǎn)染率更高。但研究發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)染過程中陽離子脂質(zhì)體仍然含有一定的細胞毒性[20]，且陽離子脂質(zhì)體的細胞毒性主要與陽離子磷脂的性質(zhì)有關(guān)。Zhao Y等[21]通過合理的化學修飾，用肽頭部取代季銨鹽頭部，不僅增強了生物相容性，更降低了細胞毒性。陽離子脂質(zhì)體頭部結(jié)構(gòu)的修飾，不僅使其能運載不同種類的藥物或基因，而且已經(jīng)實現(xiàn)了其在診斷和診療學中的應(yīng)用。

在轉(zhuǎn)染過程中，陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染復合物表面帶有正電荷，細胞表面帶有負電荷，二者通過靜電作用而相互附著，通過內(nèi)涵體內(nèi)吞作用進入細胞。在內(nèi)涵體中，陽離子脂質(zhì)體與帶有負電荷的膜脂質(zhì)發(fā)生靜電作用，帶有負電荷的膜脂質(zhì)由內(nèi)涵體的腔外翻轉(zhuǎn)，與正電荷脂質(zhì)形成中性離子對，基因治療藥物脫離陽離子脂質(zhì)體后進入細胞核，進行轉(zhuǎn)錄翻譯表達成蛋白質(zhì)[22]。

（2）二元復合物納米載體。將陽離子脂質(zhì)體與DNA構(gòu)建在一起，組成陽離子脂質(zhì)體-DNA復合物（Cationic liposome-DNA complexes，CLDC）。與單獨使用陽離子脂質(zhì)體比較，CLDC除具有陽離子脂質(zhì)體的優(yōu)點外，還可以運載大小不同的重組基因，提高了基因的運載量，具有良好的生物相容性，有效地克服了體內(nèi)核酸酶的降解，從而達到延緩基因降解的效果[23]。在CLDC中，核酸或短的單鏈寡核苷酸被囊泡覆蓋。由于DNA是高度帶電分子，故可附著在帶正電荷的脂質(zhì)體表面或被脂質(zhì)體囊泡包封形成復合物。陽離子脂質(zhì)體與DNA的自組裝可以產(chǎn)生多種納米結(jié)構(gòu)和形態(tài)，多層復合物由相對脂雙層之間的DNA插層制成。因此，準確地掌握復合物的結(jié)構(gòu)和形態(tài)在生物學的研究過程中（例如基因遞送）是非常重要的[24]。另一種使DNA與脂質(zhì)體融合的方法是在帶負電荷的含水的脂質(zhì)體內(nèi)捕捉DNA，這在低溫時偶爾可使脂質(zhì)體膜不穩(wěn)定。據(jù)此，脂質(zhì)體可分為兩種類型：①帶正電荷的陽離子脂質(zhì)體；②帶負電荷的陽離子脂質(zhì)體。當脂質(zhì)帶正電荷時，容易與帶負電荷的細胞表面結(jié)合，具有較高的轉(zhuǎn)染率。

CLDC納米載體轉(zhuǎn)染機制主要分為三步：首先，在脂質(zhì)與細胞融合時，帶正電的陽離子脂質(zhì)體與帶負電荷的DNA或RNA通過靜電作用相互結(jié)合，形成脂質(zhì)-基因復合物。其次，表面過剩的正電荷與帶負電的細胞膜通過靜電作用而相互吸附[25]，由于脂質(zhì)體本身具有親脂性，使得脂質(zhì)-基因復合物可通過細胞內(nèi)吞或細胞膜融合作用進入細胞內(nèi)形成內(nèi)涵體。最后，脂質(zhì)-基因復合物進入細胞后，在細胞質(zhì)中或進一步傳遞到細胞核內(nèi)釋放基因，完成細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄和翻譯，脂質(zhì)體被降解為磷脂，其降解產(chǎn)物可被細胞生物膜再利用[26]。

（3）三元復合物納米載體。脂質(zhì)體-魚精蛋白-DNA復合納米粒（Liposome-protamine-DNA nanoparticle，LPD-NP）是近年來在CLDC的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的又一新型非病毒載體。與CLDC比較，LPD-NP的優(yōu)點在于能更有效地縮合DNA，顯著提高細胞的轉(zhuǎn)染率，同時減弱核酸酶對DNA的酶解作用。經(jīng)典的LPD-NP載體系統(tǒng)的聚陽離子是多聚賴氨酸。近年來，魚精蛋白已被美國FDA認證可以作為聚陽離子供臨床使用。魚精蛋白是一種高正電荷的肽，充當DNA縮合劑，通過增加魚精蛋白濃度，提高制劑的遞送率。但魚精蛋白的濃度過高，會改變魚精蛋白-DNA復合物的電荷，干擾其與陽離子脂質(zhì)體的相互作用，反而降低所得制劑的遞送效率。Mukherjee S等[27]在對LPD-NP復合物納米載體系統(tǒng)進行研究時發(fā)現(xiàn)，質(zhì)粒DNA中含有CpG基因序列，使所得制劑存在高度免疫原性[27]。透明質(zhì)酸（HA）是在脊椎動物上皮、神經(jīng)和結(jié)締組織的細胞外基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的多糖聚陰離子，其不僅提供了多價電荷，而且不含免疫刺激的CpG基序，可降低免疫毒性和改善納米顆粒的形成[28]。此外，HA是毒性相對較低的聚合物，并被美國FAD認證用于注射劑，所以脂質(zhì)體-魚精蛋白-透明質(zhì)酸復合納米粒（Liposome-protamine-hyaluronic acid nanoparticle，LPH-NP）成為新型非病毒載體而備受關(guān)注。Chono S等[29]已經(jīng)開發(fā)了LPH-NP制劑并將siRNA成功輸送至轉(zhuǎn)移性腫瘤細胞中，靶向性的LPH-NP同非靶向性的LPDNP比較，雖然均表現(xiàn)出相似的特征和基因沉默，但靶向性的LPH-NP治療窗顯著擴大至少2.7倍。

在LPH-NP復合納米載體組裝過程中，HA與siRNA通過化學連接形成HA-siRNA軛合物[30]。HA-siRNA軛合物整體帶負電，再與帶正電的魚精蛋白通過電荷作用自組裝原理相連接。調(diào)整魚精蛋白和軛合物的用量，使之形成帶負電的絡(luò)合物，最后與空白的陽離子脂質(zhì)體混合均勻，即完成了LPH-NP載體組裝過程。Park K等[31]分別合成可分解的和不可分解的HA-siRNA納米復合物（HA-siRNA/LPEI），平均粒徑為250 nm，表面呈負電性或中性?？煞纸獾腍A-siRNA/LPEI體外基因沉默效果明顯優(yōu)于不可分解的HA-siRNA/LPEI復合物。同時制得載有干擾載脂蛋白B（siApoB）的HA-siApoB/LPEI，能靶向遞送于肝，對載脂蛋白B的mRNA沉默呈劑量依賴性。

4 影響siRNA納米載體遞送的主要因素

4.1 載體靶向性修飾

在正常細胞與癌細胞之間，維生素、生長因子的受體表達存在差異性。因此，配體可將主動靶向的脂質(zhì)體特異性傳遞到相應(yīng)受體過表達的細胞、組織或者器官。Sigma受體是一類對于抗精神病藥具有較高親和力的膜結(jié)合蛋白，在正常組織中有表達，在黑色素瘤、前列腺癌和非小細胞肺癌的腫瘤組織中過表達。通過表面吸附、半抗原捆綁、免疫球蛋白共價結(jié)合以及聚乙二醇（PEG）接枝等方法將單克隆抗體連接到脂質(zhì)體上，可調(diào)節(jié)藥物在體內(nèi)的分布及細胞靶向的作用。Banerjee R等[32]首次證明了使用靶向性Sigma配體-茴香酰胺可以有效地介導脂溶性藥物遞送于Sigma受體過表達的前列腺癌細胞。

雖然脂質(zhì)體/核酸復合物表面的配體可以增加對帶有相應(yīng)受體的細胞的轉(zhuǎn)染，但配體阻止復合物與大多數(shù)非靶細胞的反應(yīng)，所以將PEG接枝到復合物表面可形成一個PEG的立體屏障，可有效地改善陽離子脂質(zhì)體與血清蛋白之間的非特異性吸附[33]，能抑制巨噬細胞的吞飲和賦予復合物較長的循環(huán)時間，提高生物利用度和陽離子脂質(zhì)體復合物的被動靶向性。然而這種方法的局限性在于，PEG立體屏障會阻礙藥物的傳遞，從而抑制其活性[34]。Li SD等[35-36]將茴香酰胺與PEG2000用化學方法合成DSPE-PEG2000-茴香酰胺，并用其對LPD-NP表面進行修飾。經(jīng)表面修飾的LPH-NP可將siRNA選擇性遞送至Sigma受體陽性細胞，發(fā)揮顯著誘導RNAi效應(yīng)而產(chǎn)生抗腫瘤作用。經(jīng)過修飾的脂質(zhì)體，既可將目的基因靶向?qū)塍w內(nèi)的預期位點，也可直接引導藥物遠離那些對毒性作用特別敏感的體內(nèi)位點，以增強藥物的療效。

4.2 粒徑與表面電荷

靶向性是脂質(zhì)體作為藥物載體的一個重要特征，粒徑和表面電荷是影響脂質(zhì)體在體內(nèi)被動靶向的重要理化因素。脂質(zhì)體進入體內(nèi)血液循環(huán)，通過被動靶向作用聚集于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)比較豐富的器官。在體內(nèi)，無論何種給藥過程，納米給藥系統(tǒng)都要經(jīng)歷跨越極性上皮細胞的過程，上皮細胞所構(gòu)成的單層細胞一般是納米載體能否順利到達靶部位的第一道屏障[37]。研究表明，粒子在100 nm內(nèi)具有高透膜性，在100～200 nm內(nèi)具有較高的透膜性，納米粒的透膜性隨粒徑的增加而減小[38]。Zeta電位是脂質(zhì)體作為藥物載體的另一重要的物理性質(zhì)。隨著Zeta電位的增大，陽離子脂質(zhì)體的毒性也可能隨之增加。因此，載體的Zeta電位必須控制在一定的范圍內(nèi)[39-40]。

5 結(jié)語

作為一種新型治療手段，siRNA不僅被廣泛用作功能基因組學研究的工具，更在引起基因異常表達或突變疾病的生物醫(yī)學治療領(lǐng)域表現(xiàn)出極大的潛力，為RNAi在生物醫(yī)學方面的應(yīng)用帶來了革命性的變化。但在對siRNA與RNAi的研究過程中，仍有很多問題難以攻克，如在藥物遞送方面如何管理siRNA高效作用于體內(nèi)靶組織或細胞中，是siRNA廣泛使用的主要障礙。

在臨床應(yīng)用方面，除了考慮藥物的有效性之外，基因治療的安全性也是首要考慮的問題。采用基因治療患者所承擔的風險性并不比其他試驗性治療低，包括藥物工業(yè)化生產(chǎn)難易程度、藥物穩(wěn)定性、質(zhì)檢問題以及臨床應(yīng)用方面藥物的給藥途徑等都是無法回避的問題。因此，siRNA的高效遞送依賴于新的高效、低免疫原性載體的開發(fā)及納米制劑遞送系統(tǒng)的優(yōu)化?？裳b載siRNA的高效、低免疫原性納米制劑的研究任重而道遠。

[1] 李巖.基因治療中基因權(quán)利的法律保護[D].濟南：山東大學，2013.

[2] Lee DJ，He D，Kessel E，et al.Tumoral gene silencing by receptor-targeted combinatorial siRNA polyplexes[J].J Control Release，2016，244（Part B）：280-291.

[3] 楊飛飛，黃偉，李云飛，等.siRNA非病毒遞送載體的研究現(xiàn)狀[J].藥學學報，2011，46（12）：1436-1443.

[4] 李鳳燕，歐瑜，李謙.siRNA作為小分子藥物的研究進展[J].藥物生物技術(shù)，2014，21（4）：381-384.

[5] 趙云春，張麗，鄭彩虹.siRNA體內(nèi)遞送的研究現(xiàn)狀[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學，2013，30（12）：1366-1373.

[6] 李澤豪，任小元，王世兵，等.介導siRNA傳遞的非病毒載體及其研究進展[J].生命科學，2014，26（4）：392-399.

[7] Choudhury SR，Hudry E，Maguire CA，et al.Viral vectors for therapy of neurologic diseases[J].Neuropharmacology，2016，doi：10.1016/j.neuropharm.2016.02.013.

[8] 陳麗紅，賈振宇.精準醫(yī)療：腫瘤基因治療研究關(guān)注的問題[J].實用腫瘤雜志，2015，30（6）：501-505.

[9] 王瑜.陽離子/非離子表面活性劑自組裝及其與DNA的相互作用[D].廣州：華南理工大學，2012.

[10] Falsini S，Ristori S.Lipoplexes from non-viral cationic vectors：dotap-dope liposomes and gemini micelles[J].Methods Mol Biol，2016，doi：10.1007/978-1-4939-3718-9_3.

[11] Semple SC，Akinc A，Chen J，et al.Rational design of cationic lipids for siRNA delivery[J].Nat Biotechnol，2010，28（2）：172-176.

[12] 高惠靜，安惠霞，陳蓓，等.與納米脂質(zhì)體制備方法相關(guān)的中國發(fā)明專利[J].中國藥房，2016，27（7）：976-978.

[13] 李婉迪，趙振民.非病毒載體在基因治療中的研究進展[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報，2016，33（8）：731-734.

[14] Safinya CR，Ewert KK，Majzoub RN，et al.Cationic liposome-nucleic acid complexes for gene delivery and gene silencing[J].New J Chem，2014，38（11）：5164-5172.

[15] Peng Z，Wang C，F(xiàn)ang E，et al.Co-delivery of doxorubicin and SATB1 shRNA by thermosensitive magnetic cationic liposomes for gastric cancer therapy[J].PLoS One，2014，9（3）：e92924.

[16] Khatri N，Baradia D，Vhora I，et al.Development and characterization of siRNA lipoplexes：effect of different lipids，in vitro evaluation in cancerous cell lines and in vivo toxicity study[J].AAPS Pharm Sci Tech，2014，15（6）：1630-1643.

[17] 臧新龍，李季，李曉巍，等.載siRNA陽離子脂質(zhì)體的制備[J].沈陽藥科大學學報，2015，32（7）：510-514.

[18] 李大偉，武玉敏，劉正平，等.肺部吸入納米制劑治療肺癌的研究進展[J].中國藥房，2016，27（31）：4460-4462.

[19] Cui SH，Zhi DF，Zhao YN，et al.Cationic liposomes with folic acid as targeting ligand for gene delivery[J].Bioorg Med Chem Lett，2016，26（16）：4025-4029.

[20] 林梟，崔韶暉，趙軼男，等.陽離子脂質(zhì)體的細胞毒性[J].生命的化學，2016，36（1）：50-56.

[21] Zhao Y，Zhang S，Zhang Y，et al.Tri-peptide cationic lipids for gene delivery[J].J Mater Chem B Mater Biol Med，2015，3（1）：119-126.

[22] Liang Y，Liu Z，Shuai X，et al.Delivery of cationic polymersiRNA nanoparticles for gene therapier in neural regeneration[J].Biochem Biophys Res Commun，2012，421（4）：690-695.

[23] Wang Y，Li Z，Han Y，et al.Nanoparticle-based delivery system for application of siRNA in vivo[J].Current Drug Metabolism，2010，11（2）：182-196.

[24] Amenitsch H，Caracciolo G，F(xiàn)oglia P，et al.Existence of hybrid structures in cationic liposome/DNA complexes revealed by their interaction with plasma proteins[J].Colloid Surface B，2011，82（1）：141-146.

[25] Hoekstra D，Rejman J，Wasungu L，et al.Gene delivery by cationic lipids：in and out of an endosome[J].Biochem Soc Trans，2007，35（1）：68-71.

[26] Caracciolo G，Amenitsch H.Cationic liposome/DNA complexes：from structure to interactions with cellular membranes[J].Eur Biophys J，2012，41（10）：815-829.

[27] Mukherjee S，Siddiqui MA，Dayal S，et al.Epigallocatechin-3-gallate suppresses proinflammatory cytokines and chemokines induced by Toll-like receptor 9 agonists in prostate cancer cells[J].J Inflamm Res，2014，7（1）：89-101.

[28] Sze JH，Brownlie JC，Love CA.Biotechnological production of hyaluronic acid：a mini review[J].Biotech，2016，6（1）：67.

[29] Chono S，Li SD，Conwell CC，et al.An efficient and low immunostimulatory nanoparticle formulation for systemic siRNA delivery to the tumor[J].J Control Release，2008，131（1）：64-69.

[30] 王天琪，張娜.透明質(zhì)酸在腫瘤治療中的應(yīng)用[J].生命的化學，2014，34（5）：690-695.

[31] Park K，Yang JA，Lee MY，et al.Reducible hyaluronic acidsiRNA conjugate for target specific gene silencing[J].Bioconjug Chem，2013，24（7）：1201-1209.

[32] Banerjee R，Tyagi P，Li S，et al.Anisamide-targeted steal-th liposomes：a potent carrier for targeting doxorubicin to human prostate cancer cells[J].Int J Cancer，2004，112（4）：693-700.

[33] Chan CL，Majzoub RN，Shirazi RS，et al.Endosomal escape and transfection efficiency of PEGylated cationic lipid-DNA complexes prepared with an acid-labile PEG-lipid[J].Biomaterials，2012，33（19）：4928-4935.

[34] Majzoub RN，Chan CL，Ewert KK，et al.Uptake and transfection efficiency of PEGylated cationic liposome-DNA complexes with and without RGD-tagging[J].Biomaterials，2014，35（18）：4996-5005.

[35] Li SD，Chen YC，Hackett MJ，et al.Tumor-targeted delivery of siRNA by self-assembled nanoparticles[J].Mol Ther，2008，16（1）：163-169.

[36] Li SD，Chono S，Huang L.Efficient gene silencing in metastatic tumor by siRNA formulated in surface-modified nanoparticles[J].J Control Release，2008，126（1）：77-84.

[37] Des RA，F(xiàn)ievez V，Théate I，et al.An improved in vitro model of human intestinal follicle-associated epithelium to study nanoparticle transport by M cells[J].Eur J Pharm Sci，2007，30（5）：380-391.

[38] Desai MP，Labhasetwar V，Amidon GL，et al.Gastrointestinal uptake of biodegradable microparticles：effect of particle size[J].Pharm Res，1996，13（12）：1838-1845.

[39] 陳濤，王汝濤，王昭，等.非特異靶向荷正電高分子磷脂脂質(zhì)體的構(gòu)建和體外評價[J].藥學學報，2010，45（3）：359-364.

[40] 巨佳.基于膽固醇的陽離子脂質(zhì)材料的設(shè)計合成及其在基因轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用研究[D].西安：第四軍醫(yī)大學，2015.

R944.9

A

1001-0408（2017）31-4452-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.31.34

國家自然科學基金資助項目（No.81603418）；哈爾濱市應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)項目（No.2016RAQXJ197）

＊副教授，碩士生導師，博士。研究方向：新藥及新劑型。電話：0451-87266893。E-mail：wrdx@sina.com

#通信作者：副教授，碩士生導師，博士。研究方向：新藥開發(fā)。電話：0451-82195940。E-mail：yangjingdx@sina.com

2017-02-17

2017-04-13）

（編輯：余慶華）