翟青新

(南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院動物實驗中心，南京 210008)

經(jīng)驗交流

小鼠體外寄生蟲的藥浴治療

翟青新

(南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院動物實驗中心，南京 210008)

目的 伊維菌素全群藥浴法治療小鼠體外寄生蟲。方法 近800只自繁自用基因工程保種小鼠，伊維菌素藥浴液濃度為1% (L/L)，每只鼠至少藥浴游泳1 min，中途用漏勺把鼠頭按壓入藥液3～4次。10日齡內(nèi)小鼠需單獨人工輔助藥浴。藥浴后換籠，同時環(huán)境驅(qū)蟲，只藥浴1次。結(jié)果 全群死亡率約2%。隨訪18個月，未再見到體外寄生蟲，鼠群健康，繁殖正常。結(jié)論 伊維菌素注射液全群藥浴法治療小鼠體外寄生蟲切實可行。

小鼠；消滅；體外寄生蟲；伊維菌素；藥浴

2014年11月某實驗動物使用許可單位屏障設(shè)施，共有8間飼養(yǎng)室。其中1間飼養(yǎng)室里的獨立通氣飼養(yǎng)籠架(IVC，individual ventilated cages)共有120籠近800只小鼠，用于轉(zhuǎn)基因或基因敲除小鼠的研究或保種，大多數(shù)都彌足珍貴，已世代繁衍了近10年，期間有從國內(nèi)外購買、引進(jìn)(或被贈予)的，小鼠進(jìn)入屏障時都有生產(chǎn)許可證和該批次實驗動物質(zhì)量檢測證明。但在IVC不銹鋼平板架上，肉眼可見寄生蟲在快速爬行；飼養(yǎng)籠內(nèi)側(cè)面及紙膜蓋內(nèi)側(cè)，肉眼依稀可見似芝麻大小安靜的寄生蟲。寄生蟲可能來源于購入引進(jìn)的鼠或隨科研人員的物品侵入[1]，該室鼠屬于外單位寄養(yǎng)鼠，運行模式是只提供場地和常規(guī)飼養(yǎng)服務(wù)，思想麻痹、管理松懈。按國標(biāo)要求只能全群淘汰或剖腹凈化。肉眼觀察鼠，幾乎正常，沒有癥狀。為了消滅這些寄生蟲，我們采用伊維菌素藥浴的方法[2]，從發(fā)現(xiàn)疫情到全群藥浴完畢共花了約21 d時間，又隨訪了近18個月，證明此方法效果確實，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 動物

自繁殖近10年用于基因工程研究的B6背景的小鼠近800只。

1.2 主要藥品

消毒片(主要有效成分：三氯異氰尿酸)、市售殺蟲氣霧劑(胺菊酯0.3%，氯氰菊酯0.15%，右旋烯丙菊酯0.1%)。伊維菌素注射液(四川恒通動物制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：獸藥字(2013)220382646，批號20131108)，規(guī)格10 mL:10萬單位。雙甲脒(江西博萊大藥廠，批準(zhǔn)文號：獸藥字(2009)140061046，批號20140810，規(guī)格10 mL:12.5%)。

1.3 主要物品

XTS-4A型手術(shù)顯微鏡(鎮(zhèn)江光學(xué)儀器廠，10×)，無菌冷水。衛(wèi)生紙、漏勺、量杯500 mL、尺、熱水；藥浴小桶(高20 cm，桶底直徑14 cm，桶口直徑20 cm)、剪刀、溫度計、不同顏色或做好記號的大桶(分別用來盛熱水、冷水、臟水)；記號筆、時鐘、電吹風(fēng)。以上新進(jìn)入屏障的物品分別按最合適的方法進(jìn)行滅菌或消毒(高壓；消毒液浸泡；紫外線照射。)

1.4 方法

1.4.1 各種水的配置：擦拭消毒：約20℃，2片/L(有效氯濃度1 000 mg/L)。擦拭驅(qū)蟲：1支雙甲脒倒入3 L約40℃ 水。藥?。?瓶伊維菌素倒入3 L約(36～37)℃的藥浴小桶，水深約12 cm，濃度為1% (L/L)。1瓶伊維菌素倒入1 L約(36～37)℃的淺盤，用于人工藥浴10日齡內(nèi)的小鼠。由脈動真空滅菌器(XG1.DME-0.6B)提供無菌熱水，無菌冷水(約20℃)直接在屏障內(nèi)取用。用量杯和溫度計現(xiàn)用現(xiàn)配合適體積和溫度的水，可在桶上畫出體積刻度，便于重復(fù)配置。

1.4.2 藥浴[3]前期準(zhǔn)備：飼養(yǎng)室：噴灑殺蟲氣霧劑重點是墻角的回風(fēng)口，IVC機(jī)箱送風(fēng)口的過濾膜、與房頂相接的排風(fēng)管道、IVC不銹鋼層板。潔儲室：清空、噴灑殺蟲氣霧劑。3 h后，對飼養(yǎng)室和潔儲室清潔、消毒水擦拭30 min后再清潔。潔儲室放入由滅菌器提供的以下無菌物品：飼養(yǎng)籠、刨花墊料、金屬網(wǎng)蓋、飲水瓶、瓶塞、掛鉤、掛牌、紙膜。60Co輻照滅菌的顆粒墊料。提前2 h調(diào)節(jié)屏障設(shè)施的溫度，使室溫達(dá)到(24～26)℃。

1.4.3 伊維菌素藥浴后換籠，每籠鼠與掛牌一致，不能出錯。有孕鼠及乳鼠的，牌上作標(biāo)記，重點觀察：先全部更換新掛牌。把籠A小鼠逐個放入小桶藥浴，掛牌掛在桶邊，確認(rèn)只數(shù)，開始計時，中途用漏勺把鼠頭按壓入藥液3～4次，每只鼠至少藥浴游泳1 min。用漏勺撈出小鼠，放入周轉(zhuǎn)籠T(主要作用是吸水：無菌帶金屬網(wǎng)蓋的飼養(yǎng)籠，其內(nèi)是無菌顆粒墊料或衛(wèi)生紙)，掛牌掛在籠T邊。助手用電吹風(fēng)(恒溫檔)隔著金屬網(wǎng)蓋輕吹鼠毛。開始藥浴籠B，藥浴快結(jié)束時，助手關(guān)電吹風(fēng)，周轉(zhuǎn)籠T騰空，把籠A鼠放入無菌墊料籠A’[ 藥浴前與其接觸的所有的物品(飼養(yǎng)籠、墊料、金屬網(wǎng)蓋、飼料、水瓶、瓶塞、水、紙膜蓋、掛鉤)全部更換]，掛牌同步轉(zhuǎn)移。確認(rèn)只數(shù)?；\A’放入安全處暫不回到原位。依次類推。3 L水可以洗10籠小鼠。浴液變臟、變少、變冷后要及時更換。周轉(zhuǎn)籠內(nèi)的顆粒墊料潮濕要及時更換。10日齡內(nèi)的鼠需單獨人工輔助藥浴。

1.4.4 雙甲脒擦拭、殺蟲氣霧劑噴灑驅(qū)蟲：籠架所有面及縫隙孔洞處仔細(xì)擦拭清潔后再擦拭驅(qū)蟲。一側(cè)60籠的架子清空后再統(tǒng)一插入飼養(yǎng)籠。120籠更換完畢，最后離開時，室內(nèi)噴灑殺蟲氣霧劑。

1.5 長期療效觀察

小鼠全群藥浴后，在不同天數(shù)進(jìn)行肉眼觀察和鏡檢。

2 結(jié)果

2.1 耗時

120籠藥浴共耗時3 h。

2.2 死亡率

全群死亡率約2%。藥浴時無意外溺亡。分別在藥浴24 h、48 h后，逐籠排查尸體。48 h內(nèi)，3日齡內(nèi)的5窩共40只，死亡6只； 4～10日齡內(nèi)的5窩共40只，死亡3只；接近12月齡的年長鼠20只，死亡5只。48 h后死亡只數(shù)未見增加。

2.3 孕鼠的繁殖

藥浴48 h后觀察，肉眼能識別的10只孕鼠，有2只已正常生產(chǎn)哺乳帶仔，另外8只孕鼠正常。

2.4 環(huán)境中肉眼可見寄生蟲

藥浴換籠結(jié)束后，按常規(guī)每7 d換籠1次。18個月來，仔細(xì)肉眼觀察籠內(nèi)壁、紙膜蓋內(nèi)側(cè)、籠架表面的寄生蟲，均未見到。

2.5 鼠體表寄生蟲

根據(jù)經(jīng)典的方法[4]，每3個月隨機(jī)抽檢 20 只，18個月來，均為陰性。

2.6 鼠群繁衍

18個月來，一切正常。

3 討論

3.1 蜱是暫時寄生，外界環(huán)境的滅蟲工作更重要，要群防群控

從分類學(xué)的角度，節(jié)肢動物門蛛形綱蜱螨亞綱的進(jìn)一步細(xì)分值得研究[5]。但從治療的角度可分成蜱和螨：一般來說肉眼可見是蜱，螨肉眼不可見[6]。蜱嗅覺敏銳，依靠化學(xué)感覺尋找宿主，15米外就能感受到宿主[5，7]。因本次事件主要任務(wù)是消滅肉眼可見的體外寄生蟲，故推測肉眼可見物是蜱。因B6鼠高發(fā)(黑皮黑毛)、老齡鼠高發(fā)[8]，而基因工程所用的皆為B6鼠，也會有接近12月齡的年長鼠，但其表型與是否感染寄生蟲不一定一致。蜱的發(fā)育經(jīng)過卵、若蟲、幼蟲、成蟲4個階段。硬蜱和軟蜱生物學(xué)特性略有差異[5]：硬雌蜱交配后吸飽血離開宿主落地，軟蜱只有在吸血時才在宿主身上，在外界環(huán)境中隱蔽地度過其生活史的大部分時間。由此可見蜱屬于暫時寄生，不是永久寄生。這或許能解釋，為什么外界環(huán)境中肉眼能見蟲時，根據(jù)經(jīng)典的方法[4,5]，依然在鼠身上找不到寄生蟲。這也提示我們，從鼠身上查不到寄生蟲，并不能說明沒有寄生蟲。螨是永久寄生，直接接觸傳播，不太容易全群爆發(fā)。

3.2 藥浴

3.2.1 室溫、水溫及水深：為了讓鼠游泳時不感到太冷，屏障室溫要調(diào)得略高點，人會稍感不適，需要克服。水溫要合適，低了不宜洗澡且影響藥效，過高會引起中毒。水面面積要合適，太大不易兼顧到每只鼠；成年小鼠體長及尾長都在9 cm左右，水深約12 cm，水太淺小鼠會蹦跳，水太深極個別不會游泳，沉底的鼠，不便于打撈搶救。

3.2.2 成年鼠、年長鼠、孕鼠、帶乳母鼠及乳鼠的情況分析[9]：成年鼠正常。年長鼠死亡率較高。孕鼠正常，特別是臨產(chǎn)前仍可以藥浴，對繁育無任何不良影響。乳鼠有一定死亡率。

3.2.3 藥浴1次即可，先小樣本試驗再全群進(jìn)行，其后每周換籠1次[10-12]：因無先例可尋，咨詢信鴿藥浴濃度后，確定濃度，初次試驗100只，觀察21 d，成功后，大規(guī)模藥浴。本次全群藥浴，即刻換籠。2% 死亡率，可能因個體差異及月齡不一，或有過敏(顫抖)、中毒、感冒發(fā)燒，實屬正常。藥浴只進(jìn)行了1次，再也沒發(fā)現(xiàn)體外寄生蟲。觀察1.5年來，對繁育無任何不良影響。說明本方法完全可靠。

3.3 阻斷傳播途徑：

3.3.1 鼠藥浴后，要進(jìn)行換籠：與浴前鼠接觸的物品全部更換。人員分工明確，藥浴前后的鼠由不同的人抓取。擦拭籠架由專人負(fù)責(zé)。臟墊料焚燒。

3.3.2 老式 IVC架比普通籠架或更易傳播體外寄生蟲：從阻斷傳播途徑的角度和蜱對弱光為正反應(yīng)的生物學(xué)特性[5]。普通籠架及其飼養(yǎng)籠(無蓋)構(gòu)造簡單，無死角，通透，便于徹底打掃清潔。已用了10年的老式IVC架子使120籠連成一片，不銹鋼層板底面及與飼養(yǎng)籠配套的紙膜蓋內(nèi)側(cè)光線極暗；平時換籠的時候，不銹鋼板底面特別是送排風(fēng)孔洞的衛(wèi)生容易忽視，大多數(shù)紙膜蓋是破的，紙膜蓋也沒有每次與飼養(yǎng)籠同步更換，與房頂相通的多皺褶排風(fēng)管道也是衛(wèi)生死角。此屏障設(shè)施其他飼養(yǎng)室為普通籠架，且飼養(yǎng)的是實驗周期不超過4個月的實驗鼠，這些飼養(yǎng)室未觀察到體外寄生蟲。

3.3.3 給藥后必須換籠：藥浴、口服(飲水[2]、拌料[13])、皮下注射[14]都可以用來治療寄生蟲。皮下注射給藥血藥濃度較高，吸收更充分，作用時間更長，故對外寄生蟲的藥效強(qiáng)于口服給藥。針對鼠群大小，可采取不同的方法。但都必須換籠，進(jìn)行環(huán)境滅蟲。

3.4 密閉與屏障設(shè)施的送排風(fēng)

屏障的消毒、驅(qū)蟲方式眾多，氣體消毒或噴霧理論上都需要密閉，但一般的屏障設(shè)施送排風(fēng)的控制是“全或無”，不能每室獨立控制。根據(jù)經(jīng)驗，正常的送排風(fēng)對于有密閉要求的處理效果影響不大。

3.5 注意操作細(xì)節(jié)

正確認(rèn)識噴霧滅蟲、清潔、消毒、再清潔、擦拭驅(qū)蟲、再噴霧驅(qū)蟲這6個步驟。消毒前必須清潔到位，消毒后，要再次清潔。防止對金屬的腐蝕、或降低后續(xù)殺蟲劑的作用。

3.6 暴露出的問題

屏障設(shè)施的管理模式是：小鼠離開屏障就不得返回。但實際科研中，有些小鼠需要進(jìn)行影像檢查(X線，CT，彩超)或放療，而這些儀器屏障內(nèi)又沒有，勢必要將鼠帶離屏障，但其后，還要繼續(xù)飼養(yǎng)用于科研。現(xiàn)實情況是：科研人員在自己的實驗室附近會有極小規(guī)模的臨時普通飼養(yǎng)室；在具有使用許可的屏障設(shè)施內(nèi)有個大規(guī)模的飼養(yǎng)室，他們就穿梭在不同級別的飼養(yǎng)室之間。屏障設(shè)施各飼養(yǎng)室一直滿負(fù)荷運轉(zhuǎn)，沒有空舍的時機(jī)，鼠群世代繁衍，不自檢，又從不驅(qū)蟲。普通設(shè)施臨時飼養(yǎng)實驗小鼠這種特殊形式將在一段時間內(nèi)不會消失，只要自然界存在野鼠，寄生蟲防治就是一項長期的艱巨任務(wù)。

3.7 可防可控

加強(qiáng)管理：排查所有穿梭在不同級別飼養(yǎng)室的人員，重點管理，禁止攜帶一切在普通飼養(yǎng)室使用過的物品(特別是紙箱、紙盒、紙包、紙袋、本子、筆)進(jìn)入屏障設(shè)施。鼠必須帶出進(jìn)行實驗的，須提前預(yù)約，由屏障內(nèi)統(tǒng)一提供無菌的含墊料紙箱。因本次大規(guī)模藥浴的成功，積累了足夠的經(jīng)驗。對普通設(shè)施飼養(yǎng)室寄生蟲防治給予科學(xué)指導(dǎo)，把疫病防治消滅在萌芽狀態(tài)。

綜上所述：伊維菌素[15,16]具有廣譜、 高效、 用量小和安全等優(yōu)點，對體內(nèi)外寄生蟲特別是線蟲和節(jié)肢動物均具有高效驅(qū)殺作用。此方法有其積極的實際意義，值得推廣應(yīng)用。

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Medicated bath for eradication of external parasites in mice

ZHAI Qing-xin

(Center of Animal Experiments, Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing University School of Medicine, Nanjing 210008, China )

Objective To report the results of medicated bath with ivermectin for eradication of external parasites in mice. Methods Nearly 800 genetically engineered mice which are self-used were treated with ivermectin medicated bath in concentration of 1% (L/L) to eradicate external parasites. Each mouse swims at least 1 minute, including immersing the head into solution for 3-4 times with a colander. Manual auxiliary medicated bath was needed for less than 10-day ones.All cages and materials were changed after the medicated bath, and environmental disinfection was performed at the same time. Medicated bath was used only once. Results Mortality rate of the mice was about 2%. The mice were followed-up for 18 months, and no reinfection with external parasites was observed. The mice were healthy and reproduction was normal. Conclusions Medicated bath with ivermectin is effective and feasible for eradication of external parasites in laboratory mice.

Mice; External parasites; Eradication;Ivermectin; Medicated bath

翟青新 (1973 - )， 女， 碩士， 高級獸醫(yī)師， 研究方向：實驗動物飼養(yǎng)與科研管理。E- mail: 1508505619@ qq.com。

R-33

A

1671-7856(2017) 02-0070-04

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.02.013

2016-12-01