羅 青 羅宏琴

（安順市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州安順 561000）

春秋季節(jié)集中監(jiān)測(cè)樣品的采集

羅 青 羅宏琴

（安順市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州安順 561000）

樣品的采集作為春秋季集中監(jiān)測(cè)工作的前提和基礎(chǔ)，一般在家禽免疫21d、豬免疫28d、其他家畜免疫21d后采集血樣，進(jìn)行抗體檢測(cè)，根據(jù)病原學(xué)要求進(jìn)行相應(yīng)的具有代表性的樣品采集、保證樣品的保存和運(yùn)輸符合規(guī)定，不出現(xiàn)污染狀況，確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，保證春秋季集中監(jiān)測(cè)樣品采集工作的有效完成。

動(dòng)物疫病 集中監(jiān)測(cè) 樣品采集

為了更好地了解轄區(qū)內(nèi)動(dòng)物疫病存在情況、分布情況、免疫狀況等狀況，安順市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心每年都根據(jù)農(nóng)業(yè)部的要求進(jìn)行春秋兩季集中監(jiān)測(cè)（免疫抗體監(jiān)測(cè)和病原學(xué)檢測(cè)），通過監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，進(jìn)而對(duì)疫病動(dòng)態(tài)、疫病發(fā)生的可能性等情況做出風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，進(jìn)行相應(yīng)的整改方案制定。為了確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，做好樣品采集工作至關(guān)重要。做好樣品采集工作是保證春秋兩季集中監(jiān)測(cè)工作得以有效開展的前提和基礎(chǔ)。

1 根據(jù)不同檢測(cè)目的采集相應(yīng)樣品

春秋季集中監(jiān)測(cè)的樣品采集一般進(jìn)行的是活體采樣，以下樣品采集均是進(jìn)行活體動(dòng)物采樣。

1.1 免疫抗體監(jiān)測(cè)樣品采集

免疫抗體監(jiān)測(cè)需要采集豬、牛、羊、禽的血液制備血清進(jìn)行相應(yīng)的抗體監(jiān)測(cè)。

集中監(jiān)測(cè)中各動(dòng)物采血位置：牛、羊從頸靜脈或尾靜脈采血，豬從前腔靜脈或耳靜脈采血；家禽從翅下靜脈采血。

血清樣品制備：采集的血液在室溫下傾斜放置2～4h（防止暴曬），待血液凝固自然析出血清，或用無(wú)菌剝離針剝離血凝塊，必要時(shí)經(jīng)1500～2000r/min離心5min，分離血清。吸出血清放入2ml滅菌離心管中，密封保存。

1.2 病原學(xué)檢測(cè)樣品采集

1.2.1 禽流感病原學(xué)檢測(cè)樣品采集

禽流感病原學(xué)檢測(cè)需要采集禽雙棉拭子（咽喉拭子和泄殖腔拭子）。尤其以泄殖腔拭子更容易分離到病毒，對(duì)于檢測(cè)結(jié)果更有意義。對(duì)于體積小的禽，用拭子取樣易造成損傷，可以采集新鮮糞便作為樣品。

雙棉拭子采集方法：將同一家禽的咽喉拭子和泄殖腔拭子一并放入同一個(gè)加有1ml PBS（含抗生素）2ml離心管中，蓋上管蓋，用防水記號(hào)筆做好標(biāo)記。

野禽或珍禽采集新鮮糞便樣品（每個(gè)樣品1～2g），置于內(nèi)有1mlPBS（含抗生素）的2ml離心管中，蓋上管蓋，用防水記號(hào)筆做好標(biāo)記。

1.2.2 豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、豬口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)樣品采集

豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、豬口蹄疫樣品采集可相結(jié)合采集，一般采集頜下淋巴結(jié)、扁桃體和血清樣品。

扁桃體的采集方法：先用開口器開口，看到突起的扁桃體后，把采樣鉤放在扁桃體上，快速扣動(dòng)扳機(jī)取出扁桃體放入滅菌離心管中。

1.2.3 羊小反芻獸疫病原學(xué)檢測(cè)樣品采集

采集樣品是口、鼻、眼棉拭子和血清。

1.2.4 牛、羊口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)樣品采集

牛、羊采集食道—咽部分泌物（O-P液）和血清樣品。

牛、羊O-P液的采集方法：將探杯隨動(dòng)物的吞咽動(dòng)作送入食道上部10～15cm出，輕輕來(lái)回移動(dòng)2～3次，然后將探杯拉出。將探杯采集到的O-P液倒出4～6ml移入10ml的放有PBS液的滅菌離心管中，加蓋密封搖勻。

2 樣品標(biāo)記和采樣登記

用防水記號(hào)筆清楚標(biāo)明每份樣品。樣品采集的同時(shí)，應(yīng)填寫采樣單。采樣單登記應(yīng)含有的內(nèi)容：采樣點(diǎn)負(fù)責(zé)人姓名、地址、電話；采樣的動(dòng)物畜種、品種、年齡和性別；樣品的包裝、名稱、數(shù)量以及樣品編號(hào)；樣品采集的動(dòng)物群體健康狀況的描述；樣品采集的動(dòng)物群體免疫狀況的描述；采樣的目的；樣品采集的日期、采樣人與采樣點(diǎn)負(fù)責(zé)人簽字。

3 樣品采集時(shí)間

進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)，合理的樣品采集時(shí)間對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有重要意義。畜禽接種疫苗后，需要一定的時(shí)間才能在體內(nèi)產(chǎn)生抗體并達(dá)到穩(wěn)定水平。一般情況下禽免疫21d后、豬免疫28d后、其他畜免疫21d后，才能采血進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)。

4 樣品采集數(shù)量合理

首先，每種樣品采集的總數(shù)量要能達(dá)到任務(wù)要求；其次每一份樣品的量要充足，有的樣品要進(jìn)行幾項(xiàng)不同的試驗(yàn)或者有復(fù)查的情況出現(xiàn)，所以，每份樣品的量一定要充足；再次，每一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)要根據(jù)存欄量的一定百分比進(jìn)行采樣，存欄量萬(wàn)只以下的畜禽場(chǎng)1%，存欄量萬(wàn)只以上的畜禽場(chǎng)0.5%的比例進(jìn)行采樣，但每個(gè)場(chǎng)每次監(jiān)測(cè)數(shù)量不少于20份。

5 樣品的保存

樣品的保存條件會(huì)直接影響到樣品的質(zhì)量，從而影響到試驗(yàn)結(jié)果。大多數(shù)樣品都怕熱、怕光。一般情況下，能在24h內(nèi)監(jiān)測(cè)或檢測(cè)的樣品可冷藏保存，若需要長(zhǎng)時(shí)間保存的樣品則需置于20℃以下保存，但是盡量避免反復(fù)凍融。

6 樣品的運(yùn)送

所采集好的樣品要以最快最直接的途徑送往實(shí)驗(yàn)室。如果樣品能在采集后24h內(nèi)送抵實(shí)驗(yàn)室，則可放在4℃左右的容器運(yùn)送。只有在24h內(nèi)不能將樣品送往實(shí)驗(yàn)室并不致影響檢驗(yàn)結(jié)果的情況下，才可把樣品冷凍，并以此狀態(tài)運(yùn)動(dòng)。

運(yùn)送樣品，要注意樣品的包裝。每一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)或養(yǎng)殖戶的樣品要單獨(dú)裝在一個(gè)塑封袋里，并在袋子上標(biāo)明送樣的日期、樣品名稱、樣品標(biāo)號(hào)及采樣的地點(diǎn)等信息，保證塑封袋口的密閉性。送樣過程中要防止傾倒、碎裂，避免樣品泄露造成污染。

運(yùn)送樣品時(shí)，要附帶相應(yīng)的采樣單以及樣品匯總單，保障檢測(cè)人對(duì)樣品信息有清楚的了解，檢測(cè)存在意義。

7 生物安全防護(hù)

人畜共患病嚴(yán)重影響人體的健康及生命安全，采樣者與畜禽有密切接觸，必須做好防護(hù)措施。世界上已發(fā)現(xiàn)的人畜共患病有200多種，比如高致病性禽流感、布魯氏菌病、牛結(jié)核病、禽結(jié)核病等對(duì)人體的傷害都很大。在采樣時(shí)，參與的人都應(yīng)該戴手套、口罩、防護(hù)鏡、防護(hù)服等，做好安全防護(hù)措施。

同時(shí)，為了防止污染環(huán)境，要做好環(huán)境消毒和廢棄物處理。

[1] 劉志鋒.動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)中的樣品采集技術(shù)[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2009，（1）：13.

羅青（1990-），女，貴州貴陽(yáng)人，從事動(dòng)物疫病防疫工作。