魯永蘭 楊文秀

(貴州醫(yī)科大學(xué)病理教研室，貴州 貴陽 550004)

PAX5表達(dá)對神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤臨床病理特征和預(yù)后的影響研究

魯永蘭 楊文秀△

(貴州醫(yī)科大學(xué)病理教研室，貴州 貴陽 550004)

目的 探討PAX5表達(dá)與神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。方法 收集神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病例的臨床資料和石蠟包埋的檔案腫瘤組織，用免疫組化染色檢測PAX5的表達(dá)，隨訪研究病例，分析PAX5表達(dá)與神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 PAX5的總陽性表達(dá)率為50%；PAX5表達(dá)在不同部位的NEN中有明顯差異，以肺NEN的陽性表達(dá)率最高(68.2%)；PAX5表達(dá)在神經(jīng)內(nèi)分泌癌(NEC)與神經(jīng)內(nèi)分泌瘤(NET)病例之間、早期(Ⅰ期和Ⅱ期)與晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)病例之間、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無轉(zhuǎn)移病例之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在晚期臨床分期、NEC病例和伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NEN中PAX5表達(dá)明顯增多。生存分析：NENs的獲訪率98.2%(55/56),多因素Cox-Regression分析發(fā)現(xiàn)腫瘤分級(jí)(P=0.003)、分期(P=0.049)、部位(P=0.000)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.014)、PAX5(P=0.015)是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。PAX5陽性與陰性表達(dá)的NEN病例的生存狀況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，陽性表達(dá)病例的生存狀況較差。結(jié)論 PAX5陽性表達(dá)對NENs的臨床病理特征有一定影響，可能是NEN不良預(yù)后的相關(guān)因子。

PAX5; 神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤； 預(yù)后

神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(neuroendocrine neoplasm，NEN)是一類起源于肽能神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的異質(zhì)性腫瘤。NEN最常見的發(fā)病部位是消化系統(tǒng)和肺，但是近年來研究[1]表明，其可發(fā)生于全身多個(gè)器官和組織。PAX5又名B細(xì)胞特異性激活蛋白(B cell-specific activator protein, BSAP)，在正常B細(xì)胞的增殖、同型轉(zhuǎn)換、免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)錄[2]、細(xì)胞分化過程起到重要調(diào)控活化作用，因此既往PAX5主要用于標(biāo)記大多數(shù)B細(xì)胞淋巴瘤(如慢性淋巴細(xì)胞白血病,套細(xì)胞白血病、濾泡淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤等)。而近來有研究[3]表明，PAX5可在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中表達(dá)，尤其用于評估上呼吸道和胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤[4]，但在身體其他部位神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的研究較少，對于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者預(yù)后的影響更少見報(bào)道。我們收集了一組不同部位的NEN 病例，采用免疫組化檢測腫瘤細(xì)胞中PAX5的表達(dá)，收集其臨床資料并隨訪。分析PAX5表達(dá)與神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤臨床病理特征及生存狀況的關(guān)系，為發(fā)現(xiàn)NEN預(yù)后的相關(guān)因子提供相關(guān)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集安順市人民醫(yī)院2009年1月至2013年7月經(jīng)病理證實(shí)為神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的標(biāo)本56例,并收集相關(guān)的臨床和病理資料。NEN 分級(jí)[5]：第一級(jí)(G1)，核分裂<2/ 10 高倍視野和(或)Ki67 指數(shù)≤2%；第二級(jí)(G2)，核分裂2～20/10 高倍視野 和(或) Ki67指數(shù)3%～20%；第三級(jí)(G3)： 核分裂 >20/10高倍視野 和/(或)Ki67指數(shù)>20%。G1和G2統(tǒng)稱神經(jīng)內(nèi)分泌瘤，G3稱為神經(jīng)內(nèi)分泌癌。

1.2 研究方法 采用Sp法，以高壓方法進(jìn)行抗原修復(fù)，切4 μm厚打膠白片，經(jīng)烘烤、脫蠟、抗原修復(fù)、血清封閉后，加入一抗(PAX5稀釋度1∶25，Ki67稀釋度1∶100，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司) 4 ℃孵育過夜，pH7.2、0.01M的PBS清洗，加入二抗37 ℃孵育30 min，PBS清洗，DAB染色，自來水沖洗、脫水透明、封片。以pH7.2、0.01M的PBS代替一抗做空白對照，以組織中的淋巴細(xì)胞做PAX5內(nèi)對照。結(jié)果判讀：PAX5陽性染色為細(xì)胞內(nèi)具有清晰可見和定位準(zhǔn)確的棕黃色顆粒。主要采用電話隨訪或信訪，以病人初次入院確診為隨訪開始時(shí)間，2015年7月31日為隨訪結(jié)束時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 本研究中涉及的數(shù)據(jù)都采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)數(shù)資料之間的比較采用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。部分項(xiàng)目統(tǒng)計(jì)采用秩和檢驗(yàn)方法。生存分析比較采用了多因素Cox-Regression分析，單因素分析采用Log-rank檢驗(yàn)，用Kaplan-meier方法繪制生存曲線。

2 結(jié) 果

2.1 臨床病理資料 56例NEN病例中男性37例，女性19例；年齡20～86歲，中位年齡52歲。發(fā)生部位：胃10例、腸8例、肺22例、宮頸3例、卵巢2例、食道2例、鼻咽3例、皮膚4例、膀胱1例、胰腺1例。

2.2 PAX5表達(dá)與神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤臨床病理特征的關(guān)系 56例神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞來源的腫瘤中28例表達(dá)PAX5，見圖1、圖2，陽性表達(dá)率為50%(28/56)。PAX5表達(dá)與NENs部分臨床病理特征的關(guān)系見表1。

表1 PAX5與NEN部分臨床病理特征的關(guān)系

比較參數(shù)nPAX5表達(dá)陽性陰性χ2P部位胃腸1899肺2215711．680．02其它16412淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有3223913．270．00無24519分期Ⅰ和Ⅱ期195146．450．01Ⅲ和Ⅳ期372314分級(jí)Ⅰ303Ⅱ11386．090．01Ⅲ422517

不同部位的NENs中PAX5陽性表達(dá)有明顯差異，肺NEN中PAX5陽性表達(dá)率最高，高達(dá)68.2%(15/22)；神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞中PAX5的表達(dá)率在早期(Ⅰ期和Ⅱ期)與晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)病例之間、神經(jīng)內(nèi)分泌癌與神經(jīng)內(nèi)分泌瘤病例之間、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移病例之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PAX5在神經(jīng)內(nèi)分泌癌中的陽性表達(dá)為59.5%(25/42)高于神經(jīng)內(nèi)分泌瘤的21.4%(3/14)；在晚期病例中的表達(dá)為62.2%(23/37)高于早期病例的26.3%(5/19)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中PAX5的表達(dá)為71.9%(23/32)高于無轉(zhuǎn)移病例的20.8%(5/24)。

2.3 生存分析 56例NEN中，55例獲隨訪，獲訪率98.2%,隨訪時(shí)間24～78個(gè)月?；颊咧形簧鏁r(shí)間18.0個(gè)月。治療上36例接受了手術(shù)治療，12例手術(shù)后進(jìn)一步化療和免疫治療，3例采用非手術(shù)治療，1例治療方法不詳。55例獲訪病例采用多因素Cox-Regression分析，分析了PAX5表達(dá)、腫瘤分級(jí)、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、發(fā)生部位與腫瘤生存狀況的關(guān)系，腫瘤分級(jí)(P=0.003)、分期(P=0.049)、部位(P=0.000)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.014)、PAX5(P=0.015)是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。對數(shù)和秩檢驗(yàn)結(jié)果，PAX5陽性患者生存期中位數(shù)為12.8個(gè)月，陰性患者生存期中位數(shù)為28.0個(gè)月，陽性患者生存期比陰性患者明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。根據(jù)PAX5表達(dá)情況繪制生存曲線見圖3。

圖3 PAX5對NEN患者生存時(shí)間的Kaplan-meier生存曲線

3 討 論

作為一種特殊的異質(zhì)性腫瘤，神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(NEN)發(fā)病率較低，但發(fā)病范圍較廣，可發(fā)生于全身多個(gè)器官和組織,且近年來其發(fā)病率呈不斷上升趨勢[6]，故越來越受到關(guān)注。NEN根據(jù)腫瘤細(xì)胞是否具有內(nèi)分泌功能，可以分為功能型和非功能型NEN。兩者臨床表現(xiàn)不盡相同。前者表現(xiàn)為相應(yīng)激素樣物質(zhì)所產(chǎn)生的癥狀，后者表現(xiàn)為局部腫塊和相應(yīng)系統(tǒng)的癥狀。

PAX(the pair box)是一類由9個(gè)基因組成的高度保守的、對哺乳動(dòng)物細(xì)胞分化及腫瘤形成具有重要調(diào)控作用的一組基因控制家族。在某些特定組織細(xì)胞的修復(fù)和再生過程中，PAX基因表現(xiàn)出了很關(guān)鍵的作用，因此，PAX基因可以在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)。PAX5主要對B細(xì)胞特異性結(jié)合蛋白進(jìn)行編碼[7]，是一種B細(xì)胞發(fā)育和分化的重要轉(zhuǎn)移因子。R.Nguyen等[8]檢測了53例來自不同部位的小細(xì)胞癌PAX5蛋白，發(fā)現(xiàn)其陽性率為79.2%。本組病例檢測結(jié)果為50%，這可能是與本研究中選取部位較多，而各部位病例數(shù)偏少有關(guān)。對于PAX5表達(dá)與NENs臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，本研究結(jié)果提示：在NEC中的PAX5的表達(dá)率明顯高于NET中，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例PAX5陽性表達(dá)也明顯升高，這與F.Panzuto等[9]的研究結(jié)果基本一致。本研究主要關(guān)注PAX5與神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤發(fā)病部位和患者存活期的關(guān)系。從研究結(jié)果中可以看出，不同部位的NENs中PAX5的陽性表達(dá)不同。其中肺NEN中PAX5陽性表達(dá)率最高，達(dá)68.2%。這可能對判斷轉(zhuǎn)移性肺NEN有一定參考價(jià)值。生存分析發(fā)現(xiàn)：PAX5陽性表達(dá)病例的生存狀況明顯較陰性表達(dá)病例差，這提示NEN中PAX5表達(dá)可能是NEN不良預(yù)后的預(yù)測相關(guān)因子。故PAX5陽性表達(dá)對NENs的臨床病理特征如分級(jí)、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、發(fā)生部位等有一定影響，可能是NEN不良預(yù)后的相關(guān)因子。

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Impacts of PAX5 expression on the clinicopathological features and prognosis in neuroendocrine tumors

LuYonglan,YangWenxiu.

DepartmentofPathology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,China.

Objective To investigate the correlation between the expression of PAX5 protein and clinicopathological features and prognosis in neuroendocrine tumors. Methods Clinicopathological data and archivistic tumor tissue, which were embedded in paraffin, of neuroendocrine tumors. The expression of PAX5 was detected by immunohistochemistry stain Follow-up and statistical analysis was done. Results It was 50% that positive expression rate for PAX5 in 56 of cases with NENs, and there were statistical significantly differences of PAX5 expression in variant site of the NNEs Lung was the most common site of NENs (68.2%) in all sites. There were statistical significantly differences in PAX5 expression between neuroendocrine carcinoma and neuroendocrine tumors, early-and late-stage, with and without metastasis of lymph node, all P were less than 0.05. PAX5 expression was distinctly increased in the case of neuroendocrine neoplasm with late stage, high grade neuroendocrine neoplasm (neuroendocrine carcinoma), and metastasis of lymph node. Survival analysis: NENs received follow-up rate of 98.2%. Multiple factors Cox-Regression analysis showed that the factors, such as stage (P=0.014), grade (P=0.003), Lymph node metastasis (P=0.014), sites (P=0.000) and PAX5 positive expression (P=0.015), were independent influential factors of NEN's prognosis. Survival has obvious difference between the patients with positive and negative expression of Pax5 (P<0.05), and those with positive expression of PAX5 has a poor survival. Conclusion There was influence of PAX5 positive expression in the clinicopathological features. It may be related to the poor prognosis of NENs.

PAX5； Neuroendocrine neoplasm； Prognosis

R34；R736

A

1000-744X(2016)06-0584-03

2016-03-29)

△通信作者,E-mail:ypq1964@163.com