王淑萍，張靜澤，張志丹， 高文遠(yuǎn)，陳 虹

(1.武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162； 2.武警后勤學(xué)院，天津 300162； 3.天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津 300072)

實(shí)驗(yàn)研究

不同品種大棗對(duì)DNFB誘導(dǎo)小鼠超敏反應(yīng)的抑制作用

王淑萍1，張靜澤2*，張志丹3， 高文遠(yuǎn)3，陳 虹2

(1.武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162； 2.武警后勤學(xué)院，天津 300162； 3.天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津 300072)

目的：研究不同品種大棗對(duì)二硝基苯(DNFB)誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的影響；評(píng)價(jià)不同品種大棗在免疫抑制作用上的差異。方法：將昆明小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、DTH組與不同品種大棗給藥組，通過致敏劑DNFB誘發(fā)DTH模型，檢測(cè)不同品種大棗給藥后模型小鼠耳廓重量的變化，同時(shí)測(cè)定肝指數(shù)、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)表明行唐大棗、山東長(zhǎng)棗、諾羌大棗、寧夏灘棗能夠明顯抑制DNFB引起的超敏反應(yīng)，同時(shí)，還可對(duì)免疫器官胸腺起到保護(hù)作用。結(jié)論：不同產(chǎn)地大棗的免疫活性存在差異。

大棗，DNFB誘導(dǎo)小鼠，超敏反應(yīng)

現(xiàn)代研究表明大棗有多種藥理活性，主要表現(xiàn)在免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老、保肝降脂、抗腫瘤等方面。前期研究對(duì)不同產(chǎn)區(qū)的不同品種大棗進(jìn)行了化學(xué)成分的含量測(cè)定，結(jié)果表明不同產(chǎn)區(qū)不同品種大棗的化學(xué)成分表現(xiàn)出極強(qiáng)的種間差異性，因而其藥理作用也可能會(huì)出現(xiàn)顯著性差異。因此，需進(jìn)一步對(duì)不同品種大棗的藥理藥效作用進(jìn)行測(cè)定，獲得豐富數(shù)據(jù)，一方面從活性方面對(duì)大棗品種品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，豐富大棗資源研究，也為企業(yè)保健品、食品開發(fā)的原料篩選提供依據(jù)；另一方面，結(jié)合化學(xué)成分和活性進(jìn)行關(guān)系探討，以期進(jìn)一步闡明藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。

免疫調(diào)節(jié)作用是大棗的顯著藥理活性之一。研究表明，大棗多糖水提物可以顯著提高大鼠體內(nèi)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能以及促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖[1,2]，此外，大棗提取物還具有抗過敏作用[3, 4]。因此本研究從免疫調(diào)節(jié)作用入手，采用DNFB所致小鼠超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)不同品種大棗的藥理活性[5]。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 免疫調(diào)節(jié)作用所使用實(shí)驗(yàn)材料為大棗ZiziphusjujubaMill的不同地區(qū)樣品，見表1。分別精確取10 g樣品粉末，加50 ml純凈水制成混懸物，給藥。選擇阿歸養(yǎng)血糖漿作為陽(yáng)性對(duì)照藥。

1.2 儀器 Sartorius BS210S分析天平(0.1 mg)，購(gòu)自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；Sartorius CP 225D分析天平(0.01 mg)，購(gòu)自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；754紫外-可見分光光度計(jì)，購(gòu)自天津普瑞斯儀器有限公司；ZDHW型電熱套，購(gòu)自河北黃驊中興儀器有限公司；KQ3200DB型數(shù)控超聲清洗儀，購(gòu)自昆山市超聲儀器有限公司。

表1 6種大棗收集信息

1.3 試藥 實(shí)驗(yàn)所用的主要試劑見表2。

表2 主要試藥

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明小鼠，雌性，體重18～22 g，105只，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)：SCXK-2007-004號(hào)。在溫度20～22 ℃，光照12 h/黑暗12 h條件下飼養(yǎng)，自由飲食、飲水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組及處理 將105只小鼠分別稱重，平均分為15組，每組7只，分別為空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(阿歸補(bǔ)血糖漿)和給藥組(河北低劑量、河北高劑量、山東低劑量、山東高劑量、新疆低劑量、新疆高劑量、寧夏低劑量、寧夏高劑量、甘肅低劑量、甘肅高劑量、陜西高劑量)。每鼠腹部皮膚用硫化鋇脫毛，范圍3 cm×3 cm，用DNFB溶液50 μl均勻涂抹致敏。陽(yáng)性對(duì)照組給予不同劑量阿歸補(bǔ)血糖漿，低劑量灌服5 mg/kg、高劑量灌服7.5 mg/kg；給藥組給予不同品種大棗樣品，致敏后每天灌服大棗粉末水混懸液，低劑量組灌服400 mg/kg，高劑量組灌服800 mg/kg，連續(xù)5 d，1次/d，5 d后用DNFB溶液10 μl均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進(jìn)行攻擊。攻擊后24 h稱體重，頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下8 mm的耳片，稱重。小鼠處死后，解剖取小鼠肝臟、脾臟、胸腺，分別稱重、計(jì)算肝指數(shù)、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)。

2.2 統(tǒng)計(jì)分析 使用SPSS V17.0軟件對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析、顯著性分析、簡(jiǎn)單相關(guān)性分析和偏相關(guān)分析。

3 結(jié)果與討論

結(jié)果如表3所示，從體重差、肝指數(shù)、脾指數(shù)來看，模型組、陽(yáng)性藥以及各給藥組與空白組相比，均不具有顯著性差異，表明DNFB誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)對(duì)小鼠體重、肝、脾不會(huì)產(chǎn)生影響，樣品對(duì)造模后小鼠也無明顯影響。而對(duì)于胸腺指數(shù)，模型組顯著低于空白組，表明DNFB誘導(dǎo)的超敏反應(yīng)會(huì)對(duì)小鼠免疫器官胸腺造成損害，從而抑制胸腺的生長(zhǎng)，但陽(yáng)性藥及各給藥組的胸腺指數(shù)與空白組無明顯差異，表明各品種大棗及陽(yáng)性藥可保護(hù)受損臟器，促進(jìn)胸腺的生長(zhǎng)。對(duì)于此模型的重要指標(biāo)耳腫度，DNFB可引起遲發(fā)型超敏反應(yīng)，造成小鼠耳腫脹。陽(yáng)性藥則能夠抑制DNFB誘導(dǎo)的超敏反應(yīng)。而給藥組各品種除陜西、甘肅產(chǎn)大棗外，均對(duì)此超敏反應(yīng)有抑制作用，特別是行唐大棗、山東長(zhǎng)棗、諾羌大棗高劑量組和寧夏灘棗高劑量組，能夠達(dá)到與陽(yáng)性對(duì)照藥相同的免疫抑制效果。此實(shí)驗(yàn)表明，行唐大棗、山東長(zhǎng)棗、諾羌大棗、寧夏灘棗具有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用。

表3 不同產(chǎn)區(qū)大棗對(duì)DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響

注：顯著性差異比較為任意兩組間的比較，a～d 表示顯著性差異P<0.05，從數(shù)值高的開始標(biāo)a,和兩兩組間比較，有差異的標(biāo)b，沒差異的標(biāo)a；再比較b,有差異的標(biāo)c，無差異的標(biāo)b,以此類推。兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較凡無相同字母者表明具有顯著性差異，有相同字母出現(xiàn)則表明無顯著性差異。

本論文首次采用DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)模型，對(duì)各產(chǎn)區(qū)代表品種大棗進(jìn)行了免疫調(diào)節(jié)作用的研究，結(jié)果表明行唐大棗、山東長(zhǎng)棗、諾羌大棗、寧夏灘棗能夠明顯抑制DNFB引起的超敏反應(yīng)，且能達(dá)到與陽(yáng)性藥相同的抑制效果，同時(shí)，還可對(duì)免疫器官胸腺起到保護(hù)作用，減少其受損。

1 張慶，雷林生，林勤保，等.大棗多糖體外抗補(bǔ)體活性及促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞的增殖作用[J].中藥藥理與臨床，1998，14(5)：19-21

2 張慶，雷林生，楊淑琴，等.大棗中性多糖對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，21(6)：426-428

3 郭乃麗，苗明三.大棗多糖對(duì)氣血雙虛模型小鼠全血細(xì)胞和血清粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子水平的影響[J].中國(guó)臨床康復(fù)，2006，10(15)：146-147

4 顧有方，李衛(wèi)民，李升和，等.大棗多糖對(duì)小鼠四氛化碳誘發(fā)肝損傷防護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2006，13(2)：105-107

5 姚滿林，增要贏，狄靜芳，等.米諾環(huán)素對(duì)DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的抑制作用[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2009，29(2)：134-135

2016-09-18

R967

A

1006-5687(2016)06-0001-03

*通訊作者：張靜澤，E-mail：zhangjingze1977@163.com。