張麗萍 段晉琦 龔疏影

（臨汾市公安局刑事技術(shù)處，山西 臨汾 041000）

接觸性生物物證法醫(yī)DNA檢驗(yàn)的影響因素分析

張麗萍 段晉琦 龔疏影

（臨汾市公安局刑事技術(shù)處，山西 臨汾 041000）

本文首先對(duì)法醫(yī)DNA檢驗(yàn)現(xiàn)狀進(jìn)行詳細(xì)分析，其次闡述接觸性生物物證DNA檢驗(yàn)常見方法，最后通過對(duì)接觸性生物物證法醫(yī)DNA檢驗(yàn)影響因素的探討，意在表述接觸性DNA檢驗(yàn)的價(jià)值。

接觸性生物；物證；法醫(yī)DNA檢驗(yàn)；影響因素

犯罪行為的出現(xiàn)，其現(xiàn)場(chǎng)物證具有微量化和多樣化的特點(diǎn)，而接觸性物證比例越大，方可有效提升法醫(yī)接觸性DNA檢驗(yàn)準(zhǔn)確率，從而為公安部調(diào)查工作的開展奠定有利基礎(chǔ)。雖然接觸性生物物證DNA模板量相對(duì)較低，加之檢驗(yàn)分型穩(wěn)定性缺失的問題，促使法醫(yī)接觸性DNA檢驗(yàn)工作面臨嚴(yán)峻阻礙，但基于DNA檢驗(yàn)水平提升、試劑盒與檢驗(yàn)設(shè)備的研發(fā)，推進(jìn)接觸性DNA檢出率得以快速提高。

1 法醫(yī)DNA檢驗(yàn)現(xiàn)狀

1.1 DNA：脫氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid，DNA）屬于遺傳指令、生物發(fā)育、功能運(yùn)作的組成引導(dǎo)分子，具有信息長期儲(chǔ)存的優(yōu)勢(shì)。DNA通過核苷酸組成長鏈聚合物，而其內(nèi)部堿基以DNA長鏈為基準(zhǔn)呈現(xiàn)序列排布，利用遺傳密碼判斷蛋白質(zhì)氨基酸是否合成。依據(jù)DNA結(jié)構(gòu)類別的差異，將其分為單鏈DNA（single-stranded DNA）、閉環(huán)DNA（closed circular DNA）、連接DNA（Linker DNA）、模板DNA（Template DNA）、互補(bǔ)DNA（cDNA，complementary DNA）。

1.2 法醫(yī)DNA檢驗(yàn)現(xiàn)狀：1985年，我國首次開展關(guān)于DNA指紋技術(shù)在法醫(yī)鑒定中應(yīng)用的研究工作，促使國內(nèi)DNA檢驗(yàn)技術(shù)逐漸走向國際化、成熟化；“七五”時(shí)期，辦案審計(jì)中對(duì)DNA檢驗(yàn)技術(shù)予以全面利用，推進(jìn)國內(nèi)法醫(yī)DNA檢測(cè)領(lǐng)域的新紀(jì)元；“八五”階段，我國緊跟國外研究腳步，利用DNA片段多態(tài)性、線粒體序列性原則，促使關(guān)于DNA檢驗(yàn)技術(shù)的研究工作得以深化；“九五”時(shí)期，商品化試劑盒、自動(dòng)檢驗(yàn)儀的衍生，促使16個(gè)位點(diǎn)DNA多態(tài)性檢驗(yàn)工作即可同步完成，從而提升DNA檢驗(yàn)識(shí)別率；“十五”階段，公安部物證鑒定中心，首次完成自主DNA熒光劑試劑盒研制工作，使之在國內(nèi)公安DNA鑒定領(lǐng)域得以全面普及；“十一五”期間，更是通過疑難檢驗(yàn)、技術(shù)與試劑提取研究工作的開展，保證法醫(yī)DNA檢測(cè)技術(shù)的合理應(yīng)用。

2 接觸性生物物證DNA檢驗(yàn)常見方法

2.1 磁珠純化法：磁珠純化法具體檢驗(yàn)流程為：通過細(xì)胞裂解液的使用，對(duì)細(xì)胞實(shí)施裂解，使其內(nèi)部DNA得以釋放，再添加適量磁性顆粒，將細(xì)胞內(nèi)游離態(tài)DNA分子予以吸附，而細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、血紅蛋白等雜質(zhì)無法被磁性顆粒所吸附，從而余留于細(xì)胞裂解液內(nèi)。隨后，磁場(chǎng)條件下，可實(shí)現(xiàn)液體、磁性顆粒間有效分離，通過對(duì)磁性顆粒的回收，加之純水、TE液的作用完成DNA洗脫和收集工作。從整體上來看，利用磁珠純化法對(duì)DNA實(shí)施檢驗(yàn)，具有操作簡(jiǎn)易、回收率高、模板純凈、自動(dòng)化收集的優(yōu)勢(shì)，當(dāng)前行業(yè)領(lǐng)域已存在商品化磁珠DNA試劑提取盒，但因耗時(shí)長和成本高、耗材貴以及手工操作繁瑣等缺陷，使之磁珠純化法應(yīng)用范圍受到局限。

2.2 過濾柱法：過濾柱DNA提取原理和磁珠純化法等同，僅利用硅膠旋轉(zhuǎn)柱對(duì)磁性顆粒實(shí)施替換，即選擇超濾膜對(duì)其DNA分子予以截取，對(duì)其他雜質(zhì)實(shí)施過濾。目前市場(chǎng)也存在該類型商品化試劑提取盒，其不僅具有操作簡(jiǎn)便、回收率高的優(yōu)勢(shì)，又涉及大分子污染物殘留、DNA檢出率低、過濾柱成本高的缺陷，促使法醫(yī)在針對(duì)接觸性生物物證DNA檢驗(yàn)中，應(yīng)充分結(jié)合當(dāng)前環(huán)境與檢驗(yàn)中心資金成本，對(duì)DNA檢測(cè)法進(jìn)行合理選擇。

3 接觸性生物物證法醫(yī)DNA檢驗(yàn)影響因素分析

通過對(duì)接觸性生物物證法醫(yī)DNA檢驗(yàn)結(jié)果的分析，可知其主要為提取時(shí)間、提取環(huán)境兩項(xiàng)影響因素，使之DNA檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差，影響法醫(yī)正確判斷，延誤公安部最佳辦案時(shí)機(jī)[1]。

3.1 提取時(shí)間：因表皮細(xì)胞立體后其機(jī)體功能、溶酶體均會(huì)受到較大影響，如機(jī)體功能活性降低、溶酶體大量釋出，其中溶酶體分為蛋白酶、水解酶，通過對(duì)高分子物質(zhì)（核酸、蛋白）、復(fù)合物（核蛋白、糖脂）實(shí)施逐層降解，該過程屬于表皮細(xì)胞自溶現(xiàn)象。而在表皮細(xì)胞出現(xiàn)自溶后，核染色體作為DNA載體呈現(xiàn)固縮或碎裂，使之DNA得以溶解。在此環(huán)節(jié)，DNA自溶、降解具有相應(yīng)的規(guī)律，一般在72 h內(nèi)自溶和降解速率影響因素較小，而超過該期限則會(huì)加快溶解速率。

3.2 提取環(huán)境：首先，外界環(huán)境。接觸性生物DNA檢驗(yàn)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，若選擇自然環(huán)境作為DNA提取空間，則會(huì)受到光源和潮濕、高溫與灰塵、昆蟲以及細(xì)菌等因素的影響，促使DNA提取階段面臨以下問題[2]：DNA提取率過低，無法完成其分析工作；對(duì)溶液內(nèi)抑制劑予以并存提取，從而抑制DNA酶反應(yīng)；對(duì)DNA活性產(chǎn)生損壞，使之降解速率得以全面提升，對(duì)DNA提取與分析質(zhì)量產(chǎn)生威脅。

其次，載體環(huán)境。筆者以多年DNA檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)為參照，表面粗糙、密度低載體空間，如石塊和木塊、針織品等載體，其表皮細(xì)胞脫落DNA檢出率較高；而表層光滑、密度高載體空間，如橡膠或金屬等，DNA檢出率明顯有所降低，其原因在于：載體細(xì)胞易于從載體表層脫落，從而降低DNA提取模量[3]。此外，載體污染程度也是影響DNA降解速率的主要因素，例如：地毯或織物表層存在食物殘?jiān)?，但因其具有較強(qiáng)的吸濕性，可使脫落細(xì)胞在潮濕環(huán)境下出現(xiàn)干燥難度大的問題，導(dǎo)致DNA發(fā)生降解，其中食物中富含大量蛋白質(zhì)，屬于細(xì)胞繁殖有機(jī)載體，更易促進(jìn)DNA降解。

最后，人源性污染。對(duì)于接觸性生物物證而言，其DNA含量普遍偏低，若被常量DNA載體所覆蓋，如血跡或唾液等，結(jié)合STR檢驗(yàn)可有效實(shí)現(xiàn)DNA模量擴(kuò)增的目的，但會(huì)對(duì)接觸性DNA檢出率產(chǎn)生影響；若接觸性生物檢材多樣，則會(huì)呈現(xiàn)交叉污染問題，從而使之DNA檢出工作呈現(xiàn)混合分型模式，不利于后期公安部調(diào)查工作的開展[4]。

4 結(jié)束語

總結(jié)上文，法醫(yī)在針對(duì)接觸性物證DNA檢驗(yàn)中，為促進(jìn)DNA檢出率的提升，應(yīng)做好以下幾點(diǎn)工作：對(duì)現(xiàn)場(chǎng)物證接觸性DNA予以及時(shí)提取并在短時(shí)間內(nèi)完成送檢工作；最大限度上提高脫落細(xì)胞接觸性DNA模量；選擇個(gè)人防護(hù)或單獨(dú)包裝的形式，避免接觸性DNA發(fā)生污染；通過對(duì)接觸性DNA載體清潔度的控制，對(duì)其提取方法進(jìn)行合理選擇。

[1] 胡麗梅,張瑞,鄒軍根.接觸性生物檢材DNA提取方法的比較[J].法醫(yī)學(xué)雜志,2016,32(3):215-216.

[2] 李長征,劉海東,崔文,等.直接擴(kuò)增技術(shù)在接觸性檢材DNA檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,37(5):347-349.

[3] 馬妍,匡金枝,朱巍,等.法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室污染問題分析與對(duì)策[J].中國法醫(yī)學(xué)雜志,2014,29(4):363-364.

[4] 許冰瑩.法醫(yī)DNA序列多態(tài)性分析技術(shù)的研究進(jìn)展[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,35(6):1-3.

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