叢賈囡,宋占晨,曲 忻*

(1.長春市中心醫(yī)院 眼科,吉林 長春130061；2.白城市醫(yī)院 耳鼻咽喉科)

脂多糖促進人結(jié)膜上皮細胞IL-6的表達

叢賈囡1,宋占晨2,曲 忻1*

(1.長春市中心醫(yī)院 眼科,吉林 長春130061；2.白城市醫(yī)院 耳鼻咽喉科)

脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分，當細菌死亡溶解釋放出來，可引起微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素釋放及血管內(nèi)凝血等。本研究擬探討脂多糖能否促進人結(jié)膜上皮細胞IL-6的表達與釋放從而放大結(jié)膜炎性反應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 材料和來源

原代培養(yǎng)的人結(jié)膜上皮細胞均來自于長春市中心醫(yī)院眼科手術(shù)中獲得的結(jié)膜組織分離培養(yǎng)。

1.2 結(jié)膜上皮細胞的培養(yǎng)處理

獲得原代培養(yǎng)的人結(jié)膜上皮細胞培養(yǎng)到3-4代。在24孔板內(nèi)培養(yǎng)細胞至單層細胞融合。用PBS緩沖液洗滌細胞，加入0.25%的胰蛋白酶及0.06%的EDTA液以消化貼壁結(jié)膜細胞。用倒置顯微鏡觀察細胞。加入終止液終止消化。調(diào)整結(jié)膜上皮細胞濃度為5×104/ml[1]。

1.3 LPS對人結(jié)膜上皮細胞的刺激

取上述培養(yǎng)好的人結(jié)膜上皮細胞，加入LPS至濃度為1 μg/ml，10 μg/ml及100 μg/ml，對照組加入PBS緩沖液。分別于12 h及24 h后，利用分光光度計檢測培養(yǎng)液吸光度。然后離心培養(yǎng)液，獲得上清液，用以檢測IL-6的濃度。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗對IL-6的檢測

采用ELISA方法檢測上清液中IL-6的水平，方法按試劑盒要求執(zhí)行。試劑盒為武漢博士德公司產(chǎn)品。

1.5 統(tǒng)計學方法

實驗結(jié)果用均數(shù)±標準差表示。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。采用單因素方差分析不同濃度LPS對IL-6水平的影響。

2 結(jié)果

不同濃度LPS作用12及24小時后對人結(jié)膜上皮細胞分泌IL-6水平的結(jié)果見表1。加入LPS后12及24小時，對照組光吸收值無明顯差異(P>0.05)，證明細胞數(shù)沒有差異。兩個時間點各濃度實驗組IL-6水平明顯高于對照組,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3 討論

急性結(jié)膜炎臨床表現(xiàn)為突發(fā)結(jié)膜充血，燒灼感、癢、分泌物多，要確定結(jié)膜炎的病源需作分泌物涂片進行細菌和細胞學檢查。LPS是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的重要成分。其被證實參與對小膠質(zhì)細胞在內(nèi)多種細胞的促炎作用，提高作用細胞分泌一氧化氮及IL-6等炎癥因子的表達[2]。還有研究發(fā)現(xiàn)，積雪草酸能夠抑制人結(jié)膜上皮細胞在炎癥信號刺激下出現(xiàn)一系列細胞因子的變化[3],包括NF-kappaB及p-ERK等細胞信號途徑會被激活，這均可能參與到IL-6的表達調(diào)節(jié)過程[4]。本研究結(jié)果表明，12及24小時兩個時間點各濃度實驗組IL-6水平明顯高于對照組，且與LPS濃度及作用時間具有相關(guān)性。提示脂多糖能夠誘導的人結(jié)膜上皮細胞炎癥因子IL-6的分泌,其對結(jié)膜上皮細胞有直接促炎作用。

[1]鄭健樑，盧 蓉，張 潔， 等.人結(jié)膜上皮細胞的培養(yǎng)鑒定及液氮凍存[J].眼科學報,2000,16(2):135.

[2]趙建云，鄧展進，劉瑞珍.HU308對脂多糖誘導小膠質(zhì)細胞分泌NO及IL-6的影響[J].中國醫(yī)藥科學，2014,4(5):36.

[3]Hua XM,Ze BC,Wang B,et al.The anti-inflammatory effects of asiatic acid in lipopolysaccharide-stimulated human corneal epithelial cells[J].Int J Ophthalmol,2017,10(2):179.

[4]Park JY,Chung TW,Jeong YJ,et al.Ascofuranone inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory response via NF-kappaB and AP-1,p-ERK,TNF-α,IL-6 and IL-1β in RAW 264.7 macrophages[J].PLoS One,2017 ,12(2):e0171322.

*通訊作者

1007-4287(2017)09-1403-01

2016-04-14)