高敬雨，潘 靜，徐 妍，東 琴，劉潤峰

(北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 100085)

32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑的高效液相色譜分析

高敬雨，潘 靜，徐 妍，東 琴，劉潤峰

(北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 100085)

采用高效液相色譜法測定32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑中精甲霜靈和噁霉靈的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。以乙腈+水為流動相，使用ZORBAX SB-C18為填充物，對噁霉靈和甲霜靈進(jìn)行定量分析，以正己烷+異丙醇為流動相，CHIRALCEL OD-H為填充物，對甲霜靈R-對映體(精甲霜靈)比例進(jìn)行測定。結(jié)果表明，精甲霜靈和噁霉靈的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.11、0.24；變異系數(shù)分別為2.63%、0.85%；平均回收率分別為98.89%、99.68%。該法具有較高的準(zhǔn)確性和精密度，簡便、快速，分離效果好。

精甲霜靈；噁霉靈；高效液相色譜；分析

精甲霜靈(metalaxyl-m)是先正達(dá)公司開發(fā)的酰胺類殺菌劑，也叫高效甲霜靈，具有預(yù)防和治療功效，對霜霉病菌、疫霉病菌、腐霉病菌等所致的蔬菜、果樹、煙草、棉花等作物病害具有良好的防治效果。此物質(zhì)在土壤中的降解速度快，持效期長施藥次數(shù)少，對使用者安全性，與環(huán)境相容性好[1-2]。噁霉靈(hymexazol)是1930年由三井公司開發(fā)的一種內(nèi)吸殺菌劑，對土壤病原真菌等有強(qiáng)烈的殺滅作用，能通過植物根部吸收，在植物體內(nèi)代謝產(chǎn)生糖苷，促進(jìn)作物根的生長和吸收，提高種苗的存活率。噁霉靈對由土傳病菌引起的各種作物立枯病、猝倒病、枯黃萎病、根腐病、莖枯病、莖腐病等防治效果顯著[3]。目前用于防治土傳病害的藥劑較少。對現(xiàn)有殺菌劑進(jìn)行復(fù)配，可以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生，提高防效，擴(kuò)大殺菌譜及降低用藥成本[4]。

有關(guān)精甲霜靈、噁霉靈單劑的檢測已有很多報(bào)道，梁有[5]等采用反相液相色譜法測定煙葉中精甲霜靈殘留。譚智勇[6]采用氣相色譜法對稻谷中噁霉靈的殘留進(jìn)行檢測。關(guān)于兩者復(fù)配劑，崔林燕[7]等研究了甲霜·噁霉靈水劑的氣相液譜分析法，但液相色譜同條件分析方法目前尚未見報(bào)道。本文建立了同一液相色譜條件下測定精甲霜靈和噁霉靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)的方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法操作簡便，分離效果好，精密度、準(zhǔn)確度較高。

1 材料與方法

1.1 甲霜靈、噁霉靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定

1.1.1 儀器和試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1260，具可變波長紫外檢測器；色譜數(shù)據(jù)處理工作站。

乙腈：色譜純；水：新蒸2次蒸餾水；甲霜靈標(biāo)樣(≥98.0%)，噁霉靈標(biāo)樣(≥99.0%)(兩者均由北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司提供)；32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑(4%精甲霜靈+28%噁霉靈，北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司研制)。

1.1.2 色譜操作條件

色譜柱：150 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C18填充物，粒徑5 μm；檢測波長：210 nm；流動相：乙腈︰水=45︰55(體積比)；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：25 ℃。

上述操作條件，系典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對給定的操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。保留時間：噁霉靈約1.8 min，甲霜靈約5.9 min。典型的甲霜靈、噁霉靈液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 標(biāo)樣液相色譜圖(1-噁霉靈、2-甲霜靈)

圖2 試樣液相色譜圖(1-噁霉靈、2-甲霜靈)

1.1.3 溶液配制

1.1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取甲霜靈標(biāo)樣約30 mg、噁霉靈標(biāo)樣約210 mg (精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中,用乙腈溶解、定容，搖勻后吸取2 mL至10 mL容量瓶中，再用乙腈定容，搖勻后備用。

1.1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約148 mg(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解、定容，搖勻、過濾后備用。

1.1.4 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針甲霜靈(噁霉靈)響應(yīng)值相對變化小于1.5%時，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.1.5 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的甲霜靈(噁霉靈)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中甲霜靈(噁霉靈)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1(%)按式(1)計(jì)算：

式中：A1——標(biāo)樣溶液中，甲霜靈(噁霉靈)峰面積的平均值；A2——試樣溶液中，甲霜靈(噁霉靈)峰面積的平均值；m1——甲霜靈(噁霉靈)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2——試樣的質(zhì)量，g；P——標(biāo)樣中甲霜靈(噁霉靈)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；5——稀釋因子。

1.2 甲霜靈R-對映體(精甲霜靈)比例的測定

1.2.1 儀器和試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1260，具可變波長紫外檢測器；色譜數(shù)據(jù)處理工作站。

正己烷：色譜純；異丙醇：色譜純；水：新蒸2次蒸餾水；精甲霜靈標(biāo)樣(≥98.0%)(北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司提供)；32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑(4%精甲霜靈+28%噁霉靈，北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司研制)。

1.2.2 色譜操作條件

色譜柱：250 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼手性柱，內(nèi)裝CHIRALCEL OD-H填充物，粒徑5 μm；檢測波長：225 nm；流動相：正己烷︰異丙醇=70︰30(體積比)；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：25 ℃。

上述操作條件，系典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對給定的操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。保留時間：S-對映體約7.2 min，R-對映體(精甲霜靈)約16.3 min。典型的精甲霜靈液相色譜圖見圖3、圖4。

1.2.3 溶液配制

1.2.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取精甲霜靈標(biāo)樣約10 mg(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用流動相溶解、定容，搖勻后備用。

圖3 精甲霜靈標(biāo)樣液相色譜圖(1-S-對映體、2-R-對映體)

圖4 精甲霜靈樣品液相色譜圖(1-S-對映體、2-R-對映體)

1.2.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約含精甲霜靈10 mg(精確至0.000 2 g)于50 mL容量瓶中，用流動相溶解、定容，搖勻后備用。

1.2.4 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針甲霜靈S-對映體、R-對映體響應(yīng)值相對變化小于1.5%時，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.2.5 計(jì)算

試樣中甲霜靈R-對映體的比例K，按式(2)計(jì)算：

式中：AR——試樣溶液中甲霜靈R-對映體峰面積的平均值；AS——試樣溶液中甲霜靈S-對映體峰面積的平均值。

試樣中精甲霜靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)X2(%)按式(3)計(jì)算：

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

波長直接影響吸收峰面積的大小。對精甲霜靈、噁霉靈和甲霜靈標(biāo)樣溶液分別進(jìn)行紫外掃描(如圖5、圖6、圖7)，從圖中可以看出精甲霜靈、噁霉靈和甲霜靈的最大吸收波長分別在195 nm、205 nm和195 nm處。通過對比影響值，發(fā)現(xiàn)在甲霜靈、噁霉靈質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定中選擇210 nm作為檢測波長比較適宜。在此波長噁霉靈和甲霜靈均具有較強(qiáng)吸收峰，同時雜質(zhì)影響值小，流動相無吸收。綜合考慮多種因素，最終選定210 nm作為同時檢測噁霉靈和甲霜靈的波長。同時發(fā)現(xiàn)甲霜靈S-對映體、R-對映體在225 nm處均具有較強(qiáng)吸收峰，同時雜質(zhì)影響值小，流動相無吸收；綜合考慮多種因素，最終選定225 nm作為S-對映體和R-對映體的檢測波長。

圖5 精甲霜靈的紫外吸收圖

圖6 噁霉靈的紫外吸收圖

圖7 甲霜靈的紫外吸收圖

2.2 流動相的選擇

在甲霜靈、噁霉靈的檢測中，分別采用不同比例的乙腈＋水作為流動相對試樣進(jìn)行分離檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈和水的體積比為45︰55時分離效果好，出峰時間短，且色譜峰尖銳，工作效率高。綜合以上因素，最終選定乙腈＋水(體積比為45︰55)作為流動相。

在精甲霜靈的檢測中，分別采用不同比例的正己烷+異丙醇作為流動相對試樣進(jìn)行分離檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，正己烷和異丙醇的體積比為70︰30時分離效果好，出峰時間短，且色譜峰尖銳，工作效率高。綜合以上因素，最終選定正己烷+異丙醇(體積比為70︰30)作為流動相。

2.3 分析方法的線性曲線

配制5份不同濃度的精甲霜靈(噁霉靈)標(biāo)樣溶液，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析。以精甲霜靈(噁霉靈)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得精甲霜靈線性方程y=19.212 5x+31.050 5，其線性關(guān)系系數(shù)R2=0.999 3，表明線性關(guān)系良好(表1、圖8)；得噁霉靈線性方程y=18.383 1x+10.651 7，其線性關(guān)系系數(shù)R2=0.999 5，表明線性關(guān)系良好(表1、圖9)。

表1 分析方法的線性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

圖8 精甲霜靈線性關(guān)系圖

2.4 分析方法的精密度

在上述色譜條件下對同一個樣品進(jìn)行5次平行測定，計(jì)算精甲霜靈、噁霉靈的標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)(表2)。

圖9 噁霉靈線性關(guān)系圖

表2 32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑精密度測定

由表2看出，此方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)都較小，精密度較高。

2.5 分析方法的回收率

為檢測分析方法的準(zhǔn)確度，測定產(chǎn)品的回收率。在已知含量的32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑中分別加入一定量的精甲霜靈、噁霉靈標(biāo)樣，在上述色譜條件下，對各試樣中精甲霜靈、噁霉靈進(jìn)行分析，重復(fù)5次，計(jì)算回收率(表3)。

表3 32%精甲霜靈·噁霉靈種子處理液劑高效液相色譜測定法準(zhǔn)確度

由表3看出，此方法平均回收率在99.5%以上，準(zhǔn)確度較高，方法可行。

3 結(jié) 論

本文中提出的32%精甲霜靈?噁霉靈種子處理液劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的分析方法具有可行性，準(zhǔn)確度和精密度較高，且簡便、快速。

[1] 劉長令. 世界農(nóng)藥大全：殺菌劑卷[M]. 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社, 2006：84－86.

[2] 劉西莉, 馬安捷, 林吉柏, 等. 精甲霜靈與外消旋體甲霜靈對掘氏新煙堿類殺蟲劑殘留[J]. 煙草化學(xué), 2011, 12： 52—55.

[7] 呂岱竹, 羅金輝, 王明月, 等. 超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定含硫蔬菜中煙堿類農(nóng)藥殘留[J]. 農(nóng)藥, 2011, 50(5)： 359—361.

[8] 莊乾坤, 鄭和輝, 卞戰(zhàn)強(qiáng), 等. 我國常用三類化學(xué)農(nóng)藥的色譜檢測方法研究進(jìn)展[J]. 環(huán)境健康雜志, 2015, 32(3)： 272—275.

[9] 黃慶, 歐曉明, 歐陽承虎, 等. 新煙堿類農(nóng)藥在環(huán)境介質(zhì)中的殘留檢測方法研究概況[J]. 世界農(nóng)藥, 2013, 35(2)： 37—42.

[10] NY/T 761-2008. 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定[S]. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社，2008.疫霉菌的抑菌活性比較[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào), 2003, (3)： 45－49.

[3] 孫娟, 呂承德. 殺菌劑噁霉靈現(xiàn)狀和發(fā)展前景[J]. 中國農(nóng)藥, 2009, (9)： 22－25.

[4] 朱衛(wèi)剛, 胡偉群, 陳杰. 精甲霜靈和噁霉靈復(fù)配對辣椒猝倒病的聯(lián)合毒力[J]. 農(nóng)藥, 2010, (12)： 920－921.

[5] 梁有, 趙金堯, 周恩榮, 等. 反相液相色譜法測定煙葉中精甲霜靈殘留[J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥, 2013, (1)： 40－43.

[6] 譚智勇, 郭正元. 稻谷中噁霉靈殘留氣相色譜檢測方法研究[J]. 農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2011, (4)： 29－31.

[7] 崔林燕. 3%甲霜?噁霉靈水劑的氣相色譜分析[J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥, 2012, (4)： 37－39.

Analysis of Metalaxyl-m and Hymexazol 32% LS by HPLC

GAO Jing-yu，Pan Jing，XU Yan，MA Chao，DONG Qin，LIU Run-feng
(Beijing MindleaderAgroscience Co., Ltd., Beijing 100085, China)

A method was developed for the determination of metalaxyl-m·hymexazol 32% LS by HPLC in this paper. Quantitative analysis of hymexazol and metalaxyl was carried out using acetonitrile and water as mobile phases using ZORBAX SB-C18as filler. The ratio of metalaxyl R-enantiomer (mefenoxam) was performed using n-hexane and isopropanol as mobile phase and CHIRALCEL OD-H as filler. The results showed that the standard deviations, coefficients of variationand average recovery ratesofmetalaxyl-m and hymexazol were 0.11, 2.63%, 98.89% and 0.24, 0.85%, 99.68%, respectively. This method has the advantages of high precision and accuracy, simple, fast, good separation.

metalaxyl-m; hymexazol; HPLC; analysis

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2016.06.11

TQ450.7

：A

1009-6485(2016)06-0047-04

高敬雨(1993—)，男，河北省邯鄲市人，工程師，主要從事農(nóng)藥制劑加工研究工作。Tel： 010-62975002，E-mail： gaojingyu@mdldagro.com。

2016-11-17。