王玉平

包頭醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院檢驗中心，內蒙古包頭 013030

mNAP表達在全身炎癥反應綜合征患者血流細菌感染診斷中的應用價值

王玉平

包頭醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院檢驗中心，內蒙古包頭 013030

目的研究中性粒細胞膜堿性磷酸酶（mNAP）表達在全身炎癥反應綜合征（SIRS）患者血流細菌感染診斷中的應用價值。方法138例SIRS患者依據(jù)血培養(yǎng)結果分組：SIRS血培養(yǎng)陽性組55例（其中革蘭氏陰性菌感染39例，革蘭氏陽性菌感染16例）、SIRS血培養(yǎng)陰性組83例（局部感染41例，非感染42例）。應用流式細胞技術定量檢測mNAP，散射免疫比濁法測定C-反應蛋白（CRP），電化學發(fā)光法測定降鈣素原（PCT）；比較mNAP與CRP、PCT的相關性，并分析它們對SIRS患者血流細菌感染的預測價值。結果SIRS血培養(yǎng)陽性組mNAP、CRP、PCT均顯著高于SIRS血培養(yǎng)陰性組（Z=10.133、4.555、9.130，P＜0.05），對血流感染的診斷特異性和敏感性分別是97.1%和96.0%，陰性、陽性預測率分別是94.1%和97.9%，均明顯高于CRP和PCT。革蘭氏陰性菌感染患者mNAP水平明顯高于革蘭氏陽性菌感染患者（Z=3.279，P＜0.05）。結論采用流式細胞技術定量測定mNAP是可行的，并首次將其應用于SIRS患者的血流細菌感染的預測，靈敏度高、特異性好，臨床應用前景廣闊。

全身炎癥反應綜合征；細菌感染；中性粒細胞膜堿性磷酸酶；C-反應蛋白；降鈣素原

全身炎癥反應綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）是當機體遭受感染性或非感染性因素刺激時產(chǎn)生的一種失控的自我持續(xù)放大、破壞的全身炎癥反應的統(tǒng)稱[1]。SIRS患者發(fā)生血流細菌感染時，無明顯毒血癥狀，若不能及時發(fā)現(xiàn)并采取積極抗感染治療干預，可迅速進展至高危的膿毒癥或多器官功能衰竭等[2-4]。因此，及時檢出SIRS患者是否發(fā)生血流細菌感染對降低SIRS病死率具有十分重要的意義[5]。目前，診斷血流感染的金標準還是血培養(yǎng)[6]，但血培養(yǎng)通常需要幾天時間，耗時較長且敏感性低，使得血流細菌感染早期診斷較為困難[7]。中性粒細胞膜堿性磷酸酶（alkaline phosphatase on the neutrophils membrane surface，mNAP）是成熟中性粒細胞的標志酶之一，臨床上主要用于鑒別細菌感染和病毒感染[8]，因受限于方法學，其單獨用于預測細菌感染或病毒感染的研究鮮見報道。本研究擬應用流式細胞技術對mNAP進行定量檢測，并探討其在SIRS患者血流細菌感染診斷中的應用價值。

表1 各組SIRS患者mNAP及CRP、PCT檢測結果比較[M（P25，P75）]

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年6月～2015年12月我院收治的確診為SIRS并進行血培養(yǎng)的患者138例，診斷標準參照美國胸科醫(yī)師學會和危重病醫(yī)學會共識會議的診斷標準。其中男42例、女96例；年齡21～76歲，中位年齡56歲。依據(jù)血培養(yǎng)結果分組：SIRS血培養(yǎng)陽性組55例（其中革蘭氏陰性菌感染39例，革蘭氏陽性菌感染16例）、SIRS血培養(yǎng)陰性組83例（局部感染41例，非感染42例）。排除標準：（1）年齡＜16歲或＞85歲者；（2）進行本研究前曾服用過抗菌藥物者；（3）甲狀腺疾病；（4）妊娠；（5）慢性疾病終末期患者；（6）血液系統(tǒng)疾病的患者。本研究獲得患者知情同意并取得我院倫理委員會的支持。

1.2 方法

SIRS患者在使用抗菌藥物前采集兩側肘正中靜脈血各10mL，EDTA-K2抗凝，分別送血培養(yǎng)、血常規(guī)以及其他指標檢測。mNAP采用FACS CantoⅡ流式細胞儀進行檢測。QuantibriteTM PE（包含有定值的標準微球）用于評估單個細胞所能結合的抗體數(shù)目，通過QuantibriteTM PE和ALP抗體1∶1比例建立標準曲線對抗體數(shù)目進行計算，以間接反映mNAP的表達量。檢測結果采用熒光強度的幾何均值進行表示，然后將這個幾何均值的lg值代入線性方程計算出mNAP的表達量。散射免疫比濁法測定C-反應蛋白（CRP），電化學發(fā)光法測定降鈣素原（PCT）。

1.3 統(tǒng)計學處理

均采用SPSS18. 0統(tǒng)計學軟件進行分析，Shapiro-Wilk檢驗判斷所得研究數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布，若符合則以（）形式表示，偏態(tài)分布數(shù)據(jù)以中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，采用Mann-Whitney U檢驗。用受試者工作特征（ROC）曲線評價mNAP及CRP、PCT對SIRS患者發(fā)生細菌感染的診斷價值。各指標相關性使用Spearman分析。P＜0.05為具有統(tǒng)計學差異。

2 結果

2.1 各組SIRS患者mNAP及CRP、PCT檢測結果比較

SIRS血培養(yǎng)陽性組mNAP、CRP、PCT均顯著高于SIRS血培養(yǎng)陰性組（P＜0.05），相關性分析結果顯示，mNAP、與CRP、PCT均呈現(xiàn)正相關（r=0.512，P＜0.05；r=431，P＜0.05）。見表1。

2.2 革蘭氏陰性菌感染與革蘭氏陽性菌感染患者mNAP水平比較

革蘭氏陰性菌感染39例患者mNAP水平為15 543（5172～24 920），革蘭氏陽性菌感染16例患者mNAP水平為9607（3069～18 105），兩組比較，差異具有統(tǒng)計學意義（Z=3.279，P＜0.05）。

2.3 mNAP及CRP、PCT對SIRS患者血流細菌感染的價值分析

通過ROC曲線（圖1，表2）分析可知，mNAP預測SIRS患者血流細菌感染，無論是敏感度還是特異性，都要優(yōu)于CRP和PCT。

圖1 mNAP及CRP、PCT診斷SIRS患者血流細菌感染的ROC曲線

表2 mNAP及CRP、PCT診斷SIRS患者血流感染的價值分析

3 討論

SIRS患者的血流感染通常由感染性或非感染性因素引起[9]，明確是否發(fā)生感染及其原因是治療血流感染的基礎，若不能及時發(fā)現(xiàn)并采取積極抗感染治療干預，可迅速進展至高危的膿毒癥或多器官功能衰竭等[10]。體液細菌培養(yǎng)仍是當前診斷血流感染的金標準，但結果需數(shù)日后知道，延誤病情。臨床上需借助一些炎性反應標記物進行血流感染的早期診斷[11]，但診斷的敏感性和特異性通常不高，易導致漏診或誤診。

mNAP是成熟的中性粒細胞的標志酶[12]，大部分表達于中性粒細胞胞質中囊泡的腔側，小部分存在于細胞膜表面[13]。中性粒細胞遭受外界病原微生物等的刺激后，粒細胞集落刺激因子在體液中迅速升高，促進ALP轉移到膜表面和上調ALP基因轉錄，進而增加mNAP的表達[14-16]。臨床上，mNAP主要用于鑒別細菌感染和病毒感染，其傳統(tǒng)的檢測方法是細胞化學染色法[17]，方法受人為因素影響較大，無明確判斷界值，檢測方法的局限性導致其臨床應用不廣[18]。近年來，吳惠毅等[19]首次建立流式細胞術對mNAP進行定量檢測的方法，能定量分析待測樣品的熒光強度，由此計算出細胞熒光素分子數(shù)，進而間接反映mNAP的表達量。本研究結果顯示，SIRS血培養(yǎng)陽性組mNAP、CRP、PCT均顯著高于SIRS血培養(yǎng)陰性組（P＜0.05）；mNAP對血流感染的診斷特異性和敏感性分別是97.1%和96.0%，陰性、陽性預測率分別是94.1%和97.9%，均明顯高于CRP和PCT，提示mNAP對SIRS患者有著更高的診斷效能。該研究結果還顯示，革蘭氏陰性菌感染患者mNAP水平明顯高于革蘭氏陽性菌感染患者（P＜0.05），究其原因可能與革蘭氏陰性菌的細胞壁上有著更多的脂多糖有關。

綜上所述，本研究證實了應用流式細胞技術定量測定mNAP是可行的，突破了傳統(tǒng)檢測方法不足的束縛，首次將其應用于SIRS患者的血流細菌感染的預測，取得了滿意效果。但本研究不足之處在于入選的研究病例相對較少，未能就革蘭氏陽、陰性菌感染診斷效能作進一步的分析。

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The application value of mNAP expression in the diagnosis of bloodstream infections in patients with systemic inflammatory response syndrome

WANG Yuping
Department of Inspection Center, the Second Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Inner Mongolia, Baotou 013030, China

ObjectiveTo study the application value of alkaline phosphatase on the neutrophils membrane surface (mNAP) expression in the diagnosis of bloodstream infections in patients with systemic inflammatory response syndrome (SIRS).MethodsAccording to the results of blood culture group, 138 cases of SIRS patients were divided into： SIRS blood culture positive group (55 cases), including 39 cases of gram-negative bacterium infection, 16 cases of gram-positive bacteria infection; SIRS blood culture negative group (83 cases), including 41 cases of local infection, 42 cases of non-infection). Application of flow cytometry technology quantitative detection of mNAP, scattering immune turbidimetric method for the determination of C-reactive protein (CRP), electrochemical luminescence spectrometry determination of calcitonin original (PCT).ResultsThe level of mNAP, CRP and PCT in blood culture positive group were significantly higher than blood culture negative groups (Z=10.133, 4.555, 9.130,P＜ 0.05). Specificity and sensitivity of mNAP to the diagnosis of blood stream infection were 97.1% and 96.0%, respectively, the negative and positive predictive rate were 94.1% and 97.9%, respectively, were significantly higher than that of PCT and CRP. mNAP level of gram-negative bacteria infection was significantly higher in patients with gram positive bacteria infection (Z=3.279,P＜ 0.279) in patients.ConclusionThe quantitative determination of mNAP by flow cytometry technique is feasible, and the first time applied to predict bloodstream infections in patients with SIRS.Its high sensitivity, good specificity, have a prospect clinical application.

Systemic inflammatory response syndrome; Bloodstream infections; Alkaline phosphatase on the neutrophils membrane surface; C-reactive protein; Calcitonin

R363

B

2095-0616（2016）19-171-04

2016-07-08）