潘繼釗 黃海深 朱苑霞 張朝棟

廣東省東莞市黃江醫(yī)院，廣東東莞 523750

探討三種EB病毒抗體檢測在鼻咽癌篩查中的臨床價值

潘繼釗 黃海深 朱苑霞 張朝棟

廣東省東莞市黃江醫(yī)院，廣東東莞 523750

目的研究探討三種EB病毒抗體檢測在鼻咽癌篩查中的臨床價值。方法抽取2014年9月～2015年9月我院耳鼻喉科收集的經(jīng)病理診斷確診為鼻咽癌的患者100例作為研究對象，并以同期合并鼻咽部癥狀到我院就診的非鼻咽癌患者500例、接受健康體檢的正常人1000例作為對照，采用酶聯(lián)免疫吸附法分別對三組受檢者的三種EB病毒抗體進(jìn)行測定，比較三組受檢者的檢出陽性率，同時對不同EB病毒抗體單獨或聯(lián)合診斷鼻咽癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值等進(jìn)行計算。結(jié)果三組不同受檢者的VCA-IgA、EA-IgA以及Rta-IgG檢測陽性率比較有鼻咽癌組患者＞對照Ⅰ組患者＞對照Ⅱ組正常人的情況，且鼻咽癌組患者各項指標(biāo)的檢測結(jié)果與其他兩組對照組的比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。不同EB病毒的檢測結(jié)果比較，則有鼻咽癌組VCA-IgA和Rta-IgG顯著高于EA-IgA，而對照組受檢者VCAIgAG顯著高于EA-IgA和Rta-IgG的情況，比較差異顯著。三種EB病毒診斷鼻咽癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值比較均有聯(lián)合診斷結(jié)果均高于每種EB病毒單獨診斷時的結(jié)果，除陽性預(yù)測值略低外（但聯(lián)合診斷的提升效果最為顯著），均達(dá)到95%以上。結(jié)論聯(lián)合三種EB病毒抗體的血清學(xué)診斷有利于鼻咽癌的有效篩查，頗具臨床應(yīng)用價值。

EB病毒抗體；鼻咽癌；篩查；應(yīng)用價值

鼻咽癌是我國南方地區(qū)比較常見的一種惡性腫瘤，其源于鼻咽部上皮組織，具有起病隱匿、早期無典型癥狀的特點[1-3]，而且在青壯年男性群體中有較高的發(fā)病率。調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，患者不僅有較高的誤漏診率，而且五年生存率僅為34%～50%[4]，死亡率也比較高，早期正確診斷具有十分重要的意義[5-6]。本研究抽取2014年9月～2015年9月我院耳鼻喉科收集的經(jīng)病理診斷確診為鼻咽癌的患者100例作為研究對象，旨在通過對三種不同的EB病毒抗體（VCA-IgA、EA-IgA以及Rta-IgG）檢測結(jié)果進(jìn)行測定，分析其在鼻咽癌篩查中的臨床價值。具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽取2014年9月～2015年9月我院耳鼻喉科收集的經(jīng)病理診斷確診為鼻咽癌的患者100例作為研究對象，其中，男69例，女31例，患者年齡18～79歲，平均為（49.4±5.2）歲。

以同期合并鼻咽部癥狀到我院就診的非鼻咽癌患者500例、接受健康體檢的正常人1000例作為對照，分別設(shè)為對照Ⅰ組和對照Ⅱ組。對照Ⅰ組中，男293例，女207例，患者年齡18～81歲，平均為（50.4±4.5）歲；對照Ⅱ組中，男612例，女388例，受檢者年齡18～80歲，平均為（50.1±5.4）歲。

三組受檢者的性別、年齡等一般資料的比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

標(biāo)本采集與處理：在清晨空腹條件下，采集所有受檢者的靜脈血液標(biāo)本4～5mL，將其常規(guī)靜置30min，待血液凝固后，行離心處理，離心速度為3000r/min，離心時間為10min，將獲得的上層血清保存在-20℃ 的冰箱中，待檢。

三種EB病毒抗體的檢測均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），VCA-IgA、EA-IgA均購自德國歐蒙公司生產(chǎn)、Rta-IgG檢測試劑盒購自北京同昕生物技術(shù)有限公司、檢測儀器為熱電公司生產(chǎn)的MK 3型酶標(biāo)儀，操作需要嚴(yán)格按照試劑盒說明書的要求進(jìn)行。在450nm波長下對不同抗體的吸光度值進(jìn)行測定，其中，當(dāng)VCA-IgA、EA-IgA的相對吸光度值（rOD=標(biāo)本OD/校準(zhǔn)品OD）在1.1及以上時視為陽性，當(dāng)Rta-IgG的吸光度值（標(biāo)本OD值）在0.11及以上時視為陽性[7-8]。

比較三組受檢者三種不同EB病毒抗體的檢出陽性率，同時對不同EB病毒抗體單獨或聯(lián)合診斷鼻咽癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值等進(jìn)行計算。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

本實驗數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以率（%）表示，對比采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別受檢者的EB病毒抗體檢測陽性率比較

對三組不同受檢者的VCA-IgA、EA-IgA以及Rta-IgG檢測陽性率分別進(jìn)行計算，結(jié)果均有鼻咽癌組患者＞對照Ⅰ組患者＞對照Ⅱ組正常人的情況，且鼻咽癌組患者各項指標(biāo)的檢測結(jié)果與其他兩組對照組的比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。不同EB病毒的檢測結(jié)果比較，則有鼻咽癌組VCAIgA和Rta-IgG顯著高于EA-IgA，而對照組受檢者VCA-IgAG顯著高于EA-IgA和Rta-IgG的情況，比較差異顯著。見表1。

表1 不同組別受檢者的三種EB病毒抗體檢測陽性率比較

2.2 不同組別受檢者的EB病毒抗體分布情況統(tǒng)計

表2為對三組不同受檢者的VCA-IgA、EAIgA以及Rta-IgG的分布情況，據(jù)此計算三種EB病毒診斷鼻咽癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值，可見聯(lián)合診斷結(jié)果均高于每種EB病毒單獨診斷時的結(jié)果，除陽性預(yù)測值略低外（但聯(lián)合診斷的提升效果最為顯著），均達(dá)到95%以上。見表3。

3 討論

目前鼻咽癌的發(fā)病機制尚不十分明確，一般認(rèn)為有三個最主要的因素可能參與鼻咽癌的發(fā)生過程，包括：（1）遺傳因素，如不正常的人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因；（2）病毒因素，研究認(rèn)為EB病毒早期感染和長期反復(fù)感染會導(dǎo)致鼻咽部上皮永生化，并使其進(jìn)一步惡化；（3）環(huán)境因素，體外實驗研究認(rèn)為，香煙煙霧提取物促進(jìn)EBV的復(fù)制，吸煙不僅可以增加個人鼻咽癌患病率而且可以在健康男性的血清中參與EBV的激活。其中，EB病毒感染在鼻咽癌的發(fā)生于發(fā)展過程中發(fā)揮這十分重要的作用已經(jīng)得到大量研究的證實，在鼻咽癌患者的血清中均可以檢測得到抗EB病毒抗體，且抗體譜較廣[9-11]，人群中比較常見EB病毒抗體包括了針對EBV早期抗原的抗體EA-IgA、針對衣殼抗原的抗體的VCA-IgA、針對Rta蛋白的抗體ZRta-IgG、針對ZTA蛋白的抗體Zta-IgA、針對核抗原的抗體NA1-IgA等，其多屬于分泌型抗體[12-13]，有研究認(rèn)為這些EB病毒抗體與鼻黏膜的免疫功能息息相關(guān)[14-16]。

表2 不同組別受檢者的EB病毒抗體分布比較

表3 三種EB病毒診斷鼻咽癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值統(tǒng)計比較[%（n/n）]

本研究對100例鼻咽癌患者和1500例非鼻咽癌受檢者的三種EB病毒抗體進(jìn)行了測定，結(jié)果均有鼻咽癌患者檢測陽性率高于非鼻咽癌患者的情況，特別是VCA-IgA和Rta-IgG，在檢測靈敏度上，均在90%上下，與EA-IgA相比明顯提高。但在非鼻咽癌受檢者中，又存在合并鼻咽部癥狀的非鼻咽癌患者VCA-IgA檢出率顯著高于健康志愿者的情況，則在檢出特異性的比較上，VCA-IgA的效果不如EA-IgA和Rta-IgG。提示，不同檢測指標(biāo)在鼻咽癌篩查過程中各有優(yōu)缺點，特別是每項指標(biāo)單獨診斷時，其陽性預(yù)測值都不是很高（VCA-IgA、EAIgA、Rta-IgG分別為20.96%、36.30%、43.37%），均不達(dá)50%，而當(dāng)三項指標(biāo)聯(lián)合診斷時，陽性預(yù)測值可升高至82.61%，提高效果十分明顯，而靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度及陰性預(yù)測值等四項指標(biāo)更是均達(dá)到95%以上，提示聯(lián)合診斷對鼻咽癌的篩查具有顯著優(yōu)勢，這與張曉琍等[17]的研究結(jié)果基本一致，其還通過繪制ROC曲線對三種EB病毒抗體診斷鼻咽癌的效能進(jìn)行了分析，結(jié)果可見VCA-IgA、Rta-IgG的ROC曲線下面積分別為0.933、0.908，效能相當(dāng)，而EA-IgA的ROC曲線下面積僅為0.816，相對較低。張啟飛等[18]的研究則對NA1-IgA、VCAIgA和Zta-IgA等三項指標(biāo)診斷鼻咽癌的效果進(jìn)行了分析，結(jié)果也有聯(lián)合診斷效果優(yōu)于單獨診斷的情況，且其對對鼻咽癌組患者加行EA-IgA、Rta-IgG指標(biāo)檢測，并行綜合分析后，也得出VCA-IgA、EAIgA與Rta-IgG 聯(lián)合檢測法可以作為鼻咽癌首選篩查方法的結(jié)論，提示這三種EB病毒抗體在鼻咽癌篩查中的重要性。連仕鋒等[1]的研究還對EB病毒血清學(xué)篩查鼻咽癌高、中危人群的隨訪結(jié)果進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鼻咽癌高危人群主要在首次EB病毒篩查及隨訪中有較高的檢出率，無論是篩查組還是隨訪組，鼻咽癌的早診率都較高，但篩查組患者的原發(fā)腫瘤中T1期的可占80%，提示可以通過對鼻咽癌高危人群的重點篩查及時發(fā)現(xiàn)并診治，改善患者的預(yù)后。

總之，通過對不同EB病毒抗體進(jìn)行血清學(xué)診斷有利于鼻咽癌的有效篩查，且不同抗體檢測的靈敏度特異性有一定差異，通過聯(lián)合診斷可以彌補單項抗體指標(biāo)無法兼顧靈敏度、特異性的缺點，為鼻咽癌的準(zhǔn)確診斷提供可靠依據(jù)，頗具臨床應(yīng)用價值。

[1] 連仕鋒，季明芳，吳標(biāo)華，等.EB病毒血清學(xué)篩查鼻咽癌高、中危人群的隨訪研究[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2015，49（1）：26-30.

[2] 伍玉，高向陽，張曉陽，等.EB病毒6項抗體聯(lián)合檢測在臨床診斷中的應(yīng)用[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（5）：683-684，685.

[3] 矯德馨，龔智強，賈鑑慧，等.同期放化療對晚期鼻咽癌患者血漿 EB 病毒 DNA 水平的影響[J].實用癌癥雜志，2015，13（3）：362-364.

[4] 李仕偉，林艷麗，瞿衛(wèi)，等.探討EB病毒抗體對鼻咽癌篩查和療效的臨床價值[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，23（1）：113-114.

[5] 李璐，王建紅，黃輝，等.EB病毒miR-BART4*和miRBART18-3p在鼻咽癌中的表達(dá)及意義[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，50（9）：1267-1270.

[6] 郭俊英，陳艷，陳燕，等.福州市體檢人群EB病毒VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG調(diào)查分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2015，22（12）：1200-1203..

[7] Ou Chunlin，Sun Zhenqiang，ZhangHan，et al.SPLUNC1 reduces the inflammatory response of nasopharyngeal carcinoma cells infected with the EB virus by inhibiting the TLR9/NF-kappa B pathway[J].Oncology Reports，2015，33（6）：2779-2788.

[8] 熊偉明，范才文，黃輝，等.EB病毒微小RNA在鼻咽癌中的表達(dá)及意義[J].廣西師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2015，33（1）：134-138.

[9] 蔣成義，李多杰，汪洪濤，等.5-氟尿嘧啶對老年鼻咽癌患者血漿EB病毒DNA水平的影響及臨床療效[J].中國老年學(xué)雜志，2015，21（14）：3924-3925.

[10] Yang CF，Peng LX，Huang TJ, et al.Cancer stem-like cell characteristics induced by EB virus-encoded LMP1 contribute to radioresistance in nasopharyngeal carcinoma by suppressing the p53-mediated apoptosis pathway[J]. Cancer Letters，2014，344（2）：260-271.

[11] 婁雪菡.檢測血清EB病毒抗體對鼻咽癌的診斷價值[J].河南外科學(xué)雜志，2016，22（1）：54-55.

[12] 黎騁，鄭裕明，郭俊宇，等.鼻咽癌組織中多聚免疫球蛋白受體的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥，2015，12（46）：72-74.

[13] 李林芳，曾秋耀，梁柱銘，等.國產(chǎn)和進(jìn)口試劑盒 EB病毒 VCA-IgA 檢測結(jié)果比較分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（6）：831-832.

[14] 龔梁，陳建強，魯杰，等.EB病毒潛伏膜蛋白1在鼻咽癌組織中的表達(dá)及診斷意義[J].浙江實用醫(yī)學(xué)，2015，20（6）：395-397.

[15] 杜滿興，王偉佳.聯(lián)合檢測 Rta-IgG、EBNA1-IgA 和VCA-IgA 抗體對中山地區(qū)鼻咽癌的診斷價值研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2015，（13）：1856-1857，1860.

[16] 劉百祥，肖旭平，嚴(yán)文輝，等.薯蕷丸加減方對鼻咽癌放療患者EB病毒的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015，35（9）：58-61.

[17] 張曉琍，周建林，曹穎平.鼻咽癌篩查中三種EB病毒抗體檢測的應(yīng)用[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2015，38（2）：111-113.

[18] 張啟飛，張曉琍，林光華，等.進(jìn)行EB病毒抗體檢測在診斷鼻咽癌方面的臨床價值分析[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2015，13（20）：57-59.

Clinical value of three kinds of EB virus antibody detection in screening of nasopharyngeal carcinoma

PAN Jizhao HUANG Haishen ZHU Yuanxia ZHANG Zhaodong
Huangjiang Hospital, Dongguan 523750, China

ObjectiveTo study the clinical value of three kinds of EB virus antibody detection in screening of nasopharyngeal carcinoma.Methods100 cases of nasopharyngeal carcinoma diagnosed by pathological diagnosis in our hospital from September 2014 to September 2015 were selected as the research objects, 500 cases of nonnasopharyngeal carcinoma patients with nasopharyngeal symptoms and 1000 cases of healthy people in the same period were selected as control. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) were used to respectively test the three groups of subjects three EB virus antibody. The positive detection rate among the three groups was compared, and the sensitivity, specificity, accuracy, negative prediction value and positive predictive value of different EB virus antibody alone or in combination with diagnosis of nasopharyngeal carcinoma(NPC) were calculated.ResultsThe comparison of VCA IgA, EA and RTA IgG detection positive rate of the three groups was patients with nasopharyngeal carcinoma＞patients in control group I＞Normal persons in control group II. And the detection results of patients with nasopharyngeal carcinoma group and the other two groups were statistically significant difference(P＜0.05).The detection results of different EB virus were the following, the VCA-IgA and Rta-IgG of nasopharyngeal carcinoma group were significantly higher than the EA-IgA, while the EA-IgA of control group was significantly higher than the EA-IgA and Rta-IgG, the difference was significant. Three kinds of EB virus in nasopharyngeal cancer diagnosis sensitivity, specificity, accuracy, negative predicted value, and positive predictive value comparison were combined diagnosis results, and were all higher than those of each kind of Epstein Barr virus alone diagnosis results, in addition to the positive predictive value was slightly lower (but the promotion effect of combined diagnosis is the most remarkable), all of which reached more than 95%.ConclusionThe serological diagnosis of three kinds of EB virus antibody is beneficial to the effective screening of nasopharyngeal carcinoma, and it has great clinical application value.

EB virus antibody; Nasopharyngeal carcinoma; Screening; Application value

R739.6

B

2095-0616（2016）19-225-04

2016-06-24）