于佳民，謝全喜，徐 輝，亓秀曄，陳 振，徐海燕，谷 巍

（山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司，山東泰安271000）

添加劑

中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)肉雞腸道菌群和肝臟功能的影響

于佳民，謝全喜，徐 輝，亓秀曄，陳 振，徐海燕，谷 巍

（山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司，山東泰安271000）

為研究中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑（CHCP）對(duì)肉雞腸道菌群和肝臟的保護(hù)作用，試驗(yàn)選用120只1日齡健康白羽肉雛雞，隨機(jī)分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧的同時(shí)分別飲水添加1‰CHCP、2‰CHCP。結(jié)果表明：在28、42日齡，Ⅰ組肉雞盲腸乳桿菌數(shù)量在一定程度上高于陰性對(duì)照組3.15%、3.52%（P＞0.05），直腸乳酸桿菌數(shù)量高于陰性對(duì)照組8.6%、6.78%（P＜0.05）；14、28、42日齡，1‰CHCP組肉雞盲腸、直腸大腸桿菌數(shù)量均低于陰性對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05）。28、42日齡，1‰CHCP組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平低于陰性對(duì)照組41.05%（P＜0.05）、33.26%（P＜0.05）；42日齡時(shí)，1‰CHCP組血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平低于陰性對(duì)照組37.11%（P＜0.05）；28、35、42日齡，1‰CHCP組總膽紅素水平分別比陰性對(duì)照組低19.7%（P＞0.05）、27%（P＜0.05）、20.1%（P＞0.05）；35日齡時(shí)，1‰CHCP組內(nèi)毒素水平比陰性對(duì)照組低45.1%（P＜0.01）。由此可見(jiàn)，該CHCP按1‰飲水添加可以促進(jìn)肉雞盲腸、直腸乳酸菌繁殖，降低肉雞盲腸、直腸大腸桿菌的數(shù)量，起到調(diào)節(jié)腸道菌群，維護(hù)腸道健康的作用，且該CHCP按1‰飲水添加可降低肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶活性、總膽紅素和內(nèi)毒素水平，對(duì)肉雞肝臟具有一定的保護(hù)作用。

中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑；腸道菌群；肝臟功能；肉雞

在我國(guó)畜禽養(yǎng)殖過(guò)程中，濫用飼用抗生素的現(xiàn)象普遍存在，藥物殘留導(dǎo)致家禽肝臟損傷，肝臟損傷后會(huì)造成激素、蛋白質(zhì)的代謝異常，進(jìn)而導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降，引起家禽死亡，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。益生菌作為飼料添加劑，主要通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體腸道菌群平衡，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，起到預(yù)防疾病的作用（謝全喜等，2015）。腸道微生態(tài)平衡后，有害菌受到抑制或被殺滅，血漿內(nèi)毒素降低，肝臟得到保護(hù)。中草藥飼料添加劑因其療效好、無(wú)副作用、無(wú)殘留等特點(diǎn)被廣泛用于畜禽生產(chǎn)中。益生菌與中草藥二者具有協(xié)同作用，益生菌可以促進(jìn)中草藥的吸收和利用，中草藥能夠促進(jìn)益生菌增殖（左風(fēng)等，2002）。本試驗(yàn)將植物乳桿菌、糞腸球菌及中草藥復(fù)配制成中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑（CHCP），通過(guò)驗(yàn)證CHCP對(duì)肉雞肝臟的保護(hù)作用，以探索CHCP在家禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 益生菌由植物乳酸桿菌（CCTCC M 2010150）、糞腸球菌（CCTCCM 2010046）及其代謝產(chǎn)物組成，植物乳酸桿菌含量1.0×109cfu/mL，糞腸球菌含量2.2×109cfu/mL。試驗(yàn)用中草藥（茵陳10～20份，五味子10～15份，白芍5～8份，板藍(lán)根10～20份，珍珠草2～4份，垂盆草3～5份等）均購(gòu)自永春堂大藥房，經(jīng)鑒定符合中國(guó)藥典2005年版的各項(xiàng)要求。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽紅素（TB）、內(nèi)毒素（LPS）試劑盒均購(gòu)自上?？迫A生物工程股份有限公司。主要儀器有卓越330全自動(dòng)生化分析儀（上?？迫A生物工程股份有限公司）。

1.2 CHCP制備 稱取中草藥，混合，加入10倍重量的水，浸泡30min，加熱至沸騰，第1次煎煮時(shí)間為60min，過(guò)濾，濾渣中再加入10倍重量的水進(jìn)行第2次煎煮，煎煮時(shí)間為50min；過(guò)濾，濾渣中再加入8倍重量的水進(jìn)行第3次煎煮，煎煮時(shí)間為30 min，合并濾液，濃縮至濾液濃度為1 g/mL；向濃縮后的濾液中加入益生菌菌粉，混合均勻，即得CHCP。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)肉雞購(gòu)自泰安大禹種禽場(chǎng)，按重復(fù)分籠飼養(yǎng)，自由采食和飲水。舍內(nèi)光照、溫度和濕度嚴(yán)格按照常規(guī)飼養(yǎng)管理要求控制，按常規(guī)免疫程序?qū)﹄r雞進(jìn)行新城疫及法氏囊免疫。每日換食換水前進(jìn)行食槽和飲水器殺菌消毒。試驗(yàn)期間詳細(xì)記錄各組飼料消耗及試驗(yàn)雞的健康狀況。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 120只1日齡健康白羽肉雛雞，隨機(jī)分為4組，試驗(yàn)Ⅰ組（1‰ CHCP）、試驗(yàn)Ⅱ組（2‰ CHCP）、試驗(yàn)Ⅲ組（陰性對(duì)照組）、試驗(yàn)Ⅳ組（空白對(duì)照組），每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞?？瞻讓?duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組在飼喂基礎(chǔ)日糧的同時(shí)，第8天起白天飲水使用CHCP，12日齡攻毒大腸桿菌菌懸液（109cfu/mL，1mL/只）；陰性對(duì)照組在飼喂基礎(chǔ)日糧的同時(shí)，僅在12日齡攻毒大腸桿菌菌懸液（109cfu/mL，1mL/只）。

1.5 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.5.1 腸道菌群數(shù)量測(cè)定 分別于14、28、42日齡從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)抽取3只肉雞稱重，采用心臟注入空氣法處死雞只，無(wú)菌操作取盲腸、直腸內(nèi)容物，在滅菌生理鹽水中搖勻，用平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)腸道乳酸桿菌和大腸桿菌，其中乳酸桿菌接種于乳酸菌選擇性培養(yǎng)基（LBS）上培養(yǎng)，在37℃生化培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)48 h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)；大腸桿菌則接種于伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在37℃生化培養(yǎng)箱中有氧培養(yǎng)24 h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)；菌群數(shù)量以每克腸道內(nèi)容物所含細(xì)菌群落總數(shù)的對(duì)數(shù)（lg cfu/g）表示。

1.5.2 血清生化指標(biāo) 在試驗(yàn)肉雞14、28、42日齡時(shí)，分別從各組中選擇9只雞宰殺采血，然后分離血清，由全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血ALT、AST、TB的含量，ELISA試劑盒檢測(cè)血清LPS。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用one-way ANOVA進(jìn)行方差分析，采用LSD法進(jìn)行組間多重比較，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 CHCP對(duì)肉雞腸道菌群的影響 由表1可知，在28、42日齡，Ⅰ組肉雞盲腸乳酸桿菌數(shù)量高于陰性對(duì)照組3.15%、3.52%（P＞0.05）；在28、42日齡，Ⅰ組肉雞直腸乳酸桿菌數(shù)量高于陰性對(duì)照組8.6%、6.78%（P＜0.05）。表明當(dāng)肉雞遭遇病原菌感染時(shí)，該CHCP按1‰添加可以促進(jìn)肉雞盲腸、直腸乳酸菌繁殖。在14、28、42日齡，Ⅰ組肉雞盲腸、直腸大腸桿菌數(shù)量均低于陰性對(duì)照組（P＞0.05）。表明，當(dāng)肉雞遭遇病原菌感染時(shí)，該CHCP 按1‰添加可以降低肉雞盲腸、直腸大腸桿菌的數(shù)量，起到調(diào)節(jié)腸道、維護(hù)腸道健康的作用。

2.2 CHCP對(duì)肉雞肝臟保護(hù)的影響

2.2.1 CHCP對(duì)肉雞血清中ALT水平的影響 由表2可知，14、21日齡，Ⅰ組ALT水平分別低于Ⅲ組1.68%、2.18%（P＞0.05）；28日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組ALT水平分別低于Ⅲ組41.05%（P＜0.01）、25.2% （P＞0.05），接近于空白組；42日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組ALT水平分別低于Ⅲ組33.26%（P＜0.05）、35.7% （P＜0.05）?？傮w來(lái)看，Ⅰ組即添加1‰CHCP對(duì)降低肉雞血清ALT的作用效果較好。

表1 CHCP對(duì)肉雞盲腸、直腸內(nèi)容物中乳酸桿菌、大腸桿菌數(shù)量的影響lg cfu/g

表2 CHCP對(duì)肉雞血清中ALT水平的影響U/L

2.2.2 CHCP對(duì)肉雞血清中AST水平的影響 由表3可知，14日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組AST水平分別低于Ⅲ組 36.9%、36.93%（P＜0.05）；21、28、35日齡時(shí)，Ⅰ組AST水平分別低于Ⅲ組9.9%、4.37%、6.36%（P＞0.05）；42日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組AST水平分別低于Ⅲ組 37.11%（P＜0.05）、30.27%（P＜0.05）?？傮w來(lái)看，Ⅰ組即添加1‰CHCP對(duì)降低肉雞血清AST的作用效果較好。

表3 CHCP對(duì)肉雞血清中AST水平的影響U/L

2.2.3 CHCP對(duì)肉雞血清中TB水平的影響 由表4可知，21日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組總膽紅素水平分別比Ⅲ組低31.65%、37.36%（P＜0.05）；28日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組總膽紅素水平分別比Ⅲ組低19.7%、 18.54%（P＞0.05），接近于空白組；35日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組總膽紅素水平分別比Ⅲ組低 27%（P＜0.05）、8.27%（P＞0.05）；42日齡時(shí)，Ⅰ組總膽紅素水平比Ⅲ組低20.01%（P＞0.05）?？傮w來(lái)看，Ⅰ組即添加1‰CHCP對(duì)降低肉雞血清TB的作用效果較好。

表4 CHCP對(duì)肉雞血清中TB水平的影響U/L

2.2.4 CHCP對(duì)肉雞血清中LPS水平的影響 由表5可知，28日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組內(nèi)毒素水平分別比Ⅲ組低22.3%、10.02%；35日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組內(nèi)毒素水平分別比Ⅲ組低45.1%（P＜0.01）、27.9%；42日齡時(shí)，Ⅰ、Ⅱ組內(nèi)毒素水平分別比Ⅲ組低23.41%、25.99%。表明該復(fù)合中草藥微生態(tài)制劑可以降低血清內(nèi)毒素水平。

表5 CHCP對(duì)肉雞血清中LPS水平的影響U/L

3 討論

3.1 中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)肉雞腸道菌群的影響 Park等（2014）研究表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌可以顯著降低腸道沙門氏菌的數(shù)量。Li等（2014）研究表明，微生態(tài)制劑可以顯著提高肉雞腸道乳酸桿菌的數(shù)量。Zhang等（2014）研究發(fā)現(xiàn)，飼喂復(fù)合微生態(tài)制劑后，肉雞盲腸乳酸桿菌的數(shù)量顯著升高，致病性大腸桿菌的數(shù)量顯著降低。董秀梅等（2004）的研究顯示，與對(duì)照組相比，復(fù)合微生態(tài)制劑組顯著增加了腸道內(nèi)乳酸桿菌、腸球菌的數(shù)量，同時(shí)顯著降低了腸道內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量。張日俊等（2005）試驗(yàn)表明，益生菌能不同程度地降低仔雞直腸、十二指腸和回腸等不同腸段的pH，進(jìn)而調(diào)整腸道菌群達(dá)到正常狀態(tài)。門文卉等（2016）研究表明，中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑可顯著降低腸道pH值，并且使腸道益生菌的比例增加20.2%。中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑中的益生菌通過(guò)生物奪氧，降低腸道內(nèi)的氧化還原電勢(shì)，創(chuàng)造有利于厭氧菌生長(zhǎng)的環(huán)境，扶植腸道內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌群，抑制大腸桿菌的數(shù)量，使失調(diào)的腸道菌群結(jié)構(gòu)調(diào)整恢復(fù)到正常狀態(tài)，改善腸道健康。本試驗(yàn)中，當(dāng)肉雞遭遇病原菌感染時(shí)，該CHCP按1‰、2‰飲水添加均可以促進(jìn)肉雞盲腸、直腸乳酸桿菌繁殖，降低肉雞盲腸、直腸大腸桿菌的數(shù)量，起到調(diào)節(jié)腸道菌群，維護(hù)腸道健康的作用。

3.2 中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)肉雞肝臟功能的影響 雷明霞等 （2013）研究表明，植物乳桿菌F22可以降低肉雞肝臟中黃曲霉毒素的殘留，進(jìn)而對(duì)肝臟起到一定保護(hù)作用。門文卉等（2016）研究表明，中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑可通過(guò)提高血液中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶、超氧化物歧化酶的活性來(lái)顯著增強(qiáng)機(jī)體抗氧化水平。羅建杰等（2013）研究表明，屎腸球菌可能促使肉仔雞加強(qiáng)肝臟對(duì)維生素的代謝速率，調(diào)節(jié)肝臟關(guān)鍵蛋白的豐度，減少免疫和抗氧化能量支出，從而提高生產(chǎn)性能和免疫機(jī)能。本試驗(yàn)中，當(dāng)肉雞遭遇病原菌感染時(shí)，該CHCP按1‰飲水添加可降低肉雞血清轉(zhuǎn)氨酶活性、總膽紅素及內(nèi)毒素水平，對(duì)肉雞肝臟具有一定的保護(hù)作用。

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[5]門文卉，胡志銘，林連兵，等.復(fù)合微生態(tài)制劑在黃羽烏骨仔雞中的應(yīng)用研究［J］.中山大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，55（3）：139～144.

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The experimentwas conducted to investigate the effect of Chinese herbal compound probiotics（CHCP）on intestinalmicroflora and liver function of broiler chickens.A total of 120 1-day-old broiler chickens were randomly allocated to 4 treatments with 3 replicates of 10 each.The control group were fed basal diet，the chickens inⅠ，Ⅱgroups were fed basal diet and 1‰，2‰CHCPby water respectively.The results showed that，at 28，42 days，the quantity of cecal Lactobacillus in 1‰CHCP group were 3.15%，3.52%higher than that of the negative control group（P＞0.05）；the number of rectal Lactobacilli were 8.6%，6.78%higher than that of the negative control group significantly（P＜0.05）.The number of E.coli in cecum，rectum contens in 1‰ CHCP group were lower than that of the negative control group at 14，28，42 days（P＞0.05）.The Alanine aminotransferase levels in 1‰CHCP group were 41.05%（P＜0.05），33.26%（P＜0.05）lower than that of the negative control group at 28、42 days respectively.The Aspartate aminotransferase levels in 1‰CHCP group were 37.11%（P＜0.05）lower than that of the negative control group at 42 days.Total bilirubin content in 1‰CHCP group were 19.7%，27%，20.1%（P＞0.05）lower than that of the negative control group respectively.The serum endotoxin levels in 1‰ CHCP group were 45.1%（P＜0.01）lower than that of the negative control group.The results suggested that 1‰ CHCP were fed by water could promote the Lactic acid bacteria in broilers cecum，rectum contens，reduce the number of E.coli in broilers cecum，rectum contens，modulate the intestinal flora，maintain intestinal health，and 1‰CHCP fed by water could reduce serum transaminase activity，total bilirubin and endotoxin levels，thus had a protective effecton broiler liver.

chinese herbal compound probiotics；intestinalmicroflora；liver function；broilers

S816.7

A

1004-3314（2016）21-0026-04

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20162107

863課題“新型抗感染功能型微生態(tài)制劑研制與應(yīng)用”（2013AA102806）