郭麗霞，蘭競麗，胡兆鵬，許湘萍，王獻花，榮軍

（江西省萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院1.病理科，2.普外科，江西萍鄉(xiāng)337000）

甲狀腺乳頭狀癌中VEGF、S100A4、Survivin的表達及其意義*

郭麗霞1，蘭競麗1，胡兆鵬1，許湘萍1，王獻花1，榮軍2

（江西省萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院1.病理科，2.普外科，江西萍鄉(xiāng)337000）

目的探討血管內皮生長因子（VEGF）、S100A4及Survivin蛋白在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）中的表達及其臨床意義。方法應用免疫組織化學技術檢測52例PTC患者手術病理標本中VEGF、S100A4與Survivin蛋白的表達情況，并根據(jù)臨床分期及有無淋巴結轉移進行分類統(tǒng)計。結果VEGF、S100A4及Survivin在PTC中的陽性表達率分別為80.77%，86.54%和75.00%，與其在正常甲狀腺組織中的陽性表達率相比差異均具有統(tǒng)計學意義（P=0.000）；臨床分期Ⅲ、Ⅳ期組和有淋巴結轉移組中3者的陽性表達率分別顯著高于Ⅰ、Ⅱ期組和無淋巴結轉移組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；3者在有淋巴結轉移組中的表達以陽性和強陽性為主，在無淋巴結轉移組中的表達以弱陽性和陽性為主；而且有淋巴結轉移組中無一例3種蛋白同時弱陽性，無淋巴結轉移組中無一例3種蛋白同時強陽性。結論VEGF、S100A4及Survivin與PTC侵襲轉移密切相關，3者聯(lián)合檢測有助于預測PTC的侵襲轉移傾向。

甲狀腺乳頭狀癌；血管內皮生長因子；S100A4；Survivin

甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲狀腺癌中最常見的病理學類型[1]，具有相對良好的生物學特性，目前手術切除仍是其主要的臨床治療方法。然而即使是治療性腫瘤切除，仍然有不少患者在生活后期會出現(xiàn)腫瘤的復發(fā)或轉移，危害其生命健康。腫瘤的復發(fā)轉移一般都由微浸潤和微轉移灶發(fā)展而來，微浸潤和微轉移灶的存在是影響患者預后和復發(fā)轉移的重要因素。近期研究發(fā)現(xiàn)[2-4]，血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、S100A4及生存素（Survivin）可能在惡性腫瘤的侵襲和轉移中具有重要作用。本研究應用免疫組織化學技術對PTC中VEGF、S100A4與Survivin蛋白的表達進行檢測，分析探討PTC的侵襲轉移及其影響因素，尋找與PTC侵襲轉移有關的有效診斷指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院2011～2015年經(jīng)病理組織學檢查確診的PTC石蠟標本52例。平均年齡約50歲；男性23例，女性29例；有淋巴結轉移者22例，無淋巴結轉移者30例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ期30例，Ⅲ、Ⅳ期22例。對照組標本來自手術時切取甲狀腺良性疾病病灶旁2 cm以上的正常組織，共28例，平均年齡約45歲；男性11例，女性17例。所有病例術前均未經(jīng)放療及化療。

1.2 免疫組織化學染色與結果判定

1.2.1 試劑VEGF兔抗人單克隆抗體、Survivin兔抗人單克隆抗體，S100A4兔抗人多克隆抗體3種試劑均購自中杉（北京）生物科技公司，即用型PV-6000免疫組織化學檢測試劑盒亦購自該公司。

1.2.2 方法病例標本均來源于手術切除標本，均用10%中性緩沖福爾馬林固定液固定24 h，常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋、4μm連續(xù)切片，置于56℃烤箱中烘烤12 h，用于免疫組織化學染色。采用通用型PV-6000免疫組織化學染色法，并結合抗體說明書進行操作。用已知的陽性組織作陽性對照；用PBS液代替一抗作空白對照。

圖1 VEGF、S100A4及Survivin蛋白在PTC癌組織的表達情況（PV6000×200）

1.2.3 結果判定VEGF、S100A4以細胞胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，Survivin以細胞胞漿或胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，結合CHEUNG等[5]介紹的判定方法，每例在顯微鏡下隨機觀察5個高倍（×400）視野：顯色細胞數(shù)<10%為陰性（-）；10%～25%為弱陽性（+）；26%～50%為陽性（++）；>50%為強陽性（+++）。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 VEGF、S100A4及Survivin在正常甲狀腺組織與PTC組織中的表達

VEGF、S100A4及Survivin蛋白在正常甲狀腺組織與PTC組織中的表達情況詳見圖1和表1。統(tǒng)計結果顯示，PTC組與正常對照組中3者的陽性表達率差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 VEGF、S100A4和Survivin的表達與PTC臨床分期及淋巴結轉移的關系

VEGF、S100A4及Survivin在PTC組織的表達情況與臨床分期及有無淋巴結轉移的關系詳見表2。PTC組織中3者陽性表達率均隨著臨床分期的升高而升高（P<0.05）；有淋巴結轉移組PTC組織中3者的陽性表達率均較無淋巴結轉移組升高（P< 0.05）。

表1 兩組VEGF、S100A4及Survivin蛋白的表達%

表2 VEGF、S100A4及Survivin蛋白表達與PTC臨床分期及淋巴結轉移的關系

3 討論

腫瘤侵襲轉移需以有效的血液供應為基礎，新生血管在惡性腫瘤的侵襲轉移中起著非常重要的作用。VEGF是目前已知最強的一種促血管生長因子，其異常高表達與腫瘤的侵襲和轉移密切相關，是決定腫瘤生物學行為的一個重要因素。研究表明，VEGF在乳腺癌、胃癌、結腸癌等惡性腫瘤中均有高表達，其表達水平的高低與腫瘤轉移程度和預后呈正相關[2-6]。本研究中VEGF在PTC組織中的陽性表達率明顯高于正常甲狀腺組織（80.77%∶3.57%），且臨床分期Ⅲ～Ⅳ期組及有淋巴結轉移組的VEGF水平均分別明顯高于Ⅰ、Ⅱ期組及無淋巴結轉移組，與CHANG和GULUBOVA等[7-8]的研究結果相似，提示VEGF與PTC侵襲與轉移密切相關。

S100A4是近年來發(fā)現(xiàn)的新的鈣結合蛋白，可促進血管生成[9]，增強腫瘤細胞的侵襲和活動能力[3]。S100A4蛋白過表達與腸癌、乳腺癌、腎母細胞癌等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關[10-12]，國內也有研究[13-14]表明與甲狀腺癌的侵襲和轉移有關。本研究結果顯示，S100A4在PTC組織中陽性表達率明顯高于正常組織的陽性表達率（86.54%∶7.14%），且臨床分期高組及有淋巴結轉移組的S100A4陽性表達率分別明顯高于臨床分期低組及無淋巴結轉移組的S100A4陽性表達率，提示S100A4蛋白的高表達與PTC的浸潤和轉移密切相關，與上述研究結果基本一致，但S100A4陽性表達率稍高于其他研究者的研究結果，這可能與本研究的標本來源及標本數(shù)量存在差異有關。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員，在多種惡性腫瘤如胃癌、肝癌、乳腺癌等的癌組織中均可檢測到Survivin的高表達[4，15]，而在正常組織幾乎不表達。研究表明[16-18]，Survivin的表達同甲狀腺癌的臨床分期、腫瘤包膜完整情況及頸部淋巴結轉移等具有相關性。本研究結果提示，Survivin蛋白表達在PTC組織中陽性表達率明顯高于正常組織的陽性表達率（75.00%∶14.29%），且與臨床分期高組及有淋巴結轉移組的Survivin蛋白陽性表達率分別明顯高于臨床分期低組及無淋巴結轉移組的Survivin蛋白陽性表達率，提示Survivin與PTC的臨床分期和淋巴結轉移密切相關，與SELEMETJEV[19]等的研究結果基本一致。

甲狀腺癌侵襲轉移研究到目前為止，尚未有一個腫瘤分子標志物能夠達到其理想的敏感性和特異性，多個分子標志物聯(lián)合檢測是提高其理想程度的一種有效方法。本研究中發(fā)現(xiàn)PTC有淋巴結轉移組中VEGF、S100A4與Survivin的表達均以陽性和強陽性為主，無淋巴結轉移組均以弱陽性和陽性為主；而且有淋巴結轉移組中無一例3種蛋白同時弱陽性，而無淋巴結轉移組中無一例3種蛋白均為強陽性；由此推測，對于PTC侵襲轉移的預測，聯(lián)合應用VEGF、S100A4與Survivin 3種蛋白比應用單個蛋白更具有價值，尤其是3種蛋白均為強陽性時，更加支持PTC的高侵襲性和轉移性。基于蛋白水平的時間遲滯性，研究人員將從基因水平進行下一步的研究以更好地完善這一結論。

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（張西倩編輯）

Expression of VEGF,S100A4 and Survivin in papillary thyroid carcinoma and clinical significance*

Li-xia Guo1,Jing-li Lan1,Zhao-peng Hu1,Xiang-ping Xu1,Xian-huaWang1,Jun Rong2
(1.Departmentof pathology,2.General Surgery,Pingxiang people's hospital, Pingxiang,Jiangxi 337000,China)

ObjectiveTo study the expression and clinical significance of VEGF,S100A4 and survivin in papillary thyroid carcinoma(PTC).MethodsThe expressions of VEGF,S100A4 and survivin in normal thyroid tissues from 28 people and in PTC tissues from 52 inpatients were detect by immunohistochcmistrymethod.ResultsCorrelated with normal thyroid tissues,the VEGF,S100A4 and survivin positive rate in PTC(80.77%,86.54%and 75.00%)was increased(P=0.000).And the positive expression rate in PTC was associated with lymph node metastasis and clinical stage(P＜0.05).Expressions of them in lymphoid metastatic group were primarily positive or strongly positive,which were mainly weakly positive or positive in non-metastasis group.And none was weakly positive at the same time in lymphoid metastatic group,and none strongly positive simultaneously in non-metastasis group neither.ConclusionsVEGF,S100A4 and Survivin are closely related to the aggressive and metastatic character of PTC.A combination of them may have significance for predicting the invasion and metastasis of PTC.

papillary thyroid carcinoma;VEGF;S100A4;Survivin

R 736.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.24.014

1005-8982（2016）24-0062-04

2016-02-21

萍鄉(xiāng)市科技局指導性科技計劃項目（No：2015NO17）