華付 楊大剛 孫誠誼

(貴陽醫(yī)學院附屬醫(yī)院肝膽外科，貴州 貴陽 550004)

肝膽胰惡性腫瘤患者外周血T淋巴細胞亞群的變化及臨床意義

華付 楊大剛△孫誠誼

(貴陽醫(yī)學院附屬醫(yī)院肝膽外科，貴州 貴陽 550004)

肝膽胰； 惡性腫瘤； 外周血； T淋巴細胞亞群

機體的免疫情況與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著密切的聯(lián)系。當宿主的免疫功能低下或受到抑制時，腫瘤發(fā)生率高；且腫瘤一旦發(fā)生又可通過其產(chǎn)生的免疫抑制因子進一步抑制機體的防御功能。在抗腫瘤免疫中，細胞免疫尤其是T淋巴細胞的作用更為重要。T淋巴細胞參與機體的抗腫瘤免疫應(yīng)答，其亞群的數(shù)量是反應(yīng)機體免疫功能的重要指標。本文應(yīng)用流式細胞儀檢測肝膽胰惡性腫瘤患者外周血T淋巴細胞亞群的數(shù)量，以了解這部分患者的免疫功能情況。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

所選對象均為2011年4-10月在我科住院的患者。腫瘤組31例，男17例，女14例，年齡34～74歲，平均(59.6±11.3)歲。其中肝癌8例、膽管癌9例、膽囊癌2例、壺腹周圍癌5例，胰頭癌7例。病理診斷10例，臨床診斷21例。所有病例均未應(yīng)用化療、放療和其他對免疫功能有影響的藥物。非腫瘤組為35例，男20例，女15例，年齡25～78歲，平均(53.1±15.9)歲。其中膽囊結(jié)石25例，膽囊息肉1例，膽總管結(jié)石6例，膽總管下端狹窄1例，脾血管瘤1例，肝血管瘤1例。所有病例均排除腫瘤相關(guān)疾病及對免疫功能有影響的藥物使用史。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與試劑 BD公司FACSCanto流式細胞儀(美國BD公司)；絕對計數(shù)管(BD True count Tubes)；BD Tritest CD3/4/8抗人熒光試劑；溶血素(BD Simultest IMK-Lymphocyte Lysing Soloution)。

1.2.2 方法 研究對象入院后抽取空腹肘靜脈血2 mL于EDTA-K2(乙二胺四乙酸二鉀)抗凝管中，向True count管中分別加入20 μL抗體和50 μL的抗凝全血，混勻后于室溫暗處孵育15 min。加入FACS(1×)溶血素2 mL，充分混勻后于室溫暗處孵育10 min。1 000r/min離心5 min，棄上清，加2 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)洗1次。1 000r/min再次離心5 min，棄上清，加0.5 mL PBS充分混勻，24 h內(nèi)上流式細胞儀進行分析。應(yīng)用CaliBRITE標準微球、FACSCanto軟件調(diào)節(jié)PMT電壓、熒光補償及靈敏度，應(yīng)用FACS Diva分析軟件對處理好的標本進行CD3+，CD4+，CD8+絕對計數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié) 果

腫瘤組和非腫瘤組年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。腫瘤組T細胞亞群與非腫瘤組比較，腫瘤患者CD3+、CD4+絕對計數(shù)降低，CD8+絕對計數(shù)升高，CD4+/CD8+比值降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 惡性腫瘤組患者T細胞亞群與非腫瘤組比較/(個/μL)

3 討 論

惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)。正常的免疫系統(tǒng)在機體抗腫瘤的免疫監(jiān)視功能中起重要作用。T細胞及其亞群是機體的主要效應(yīng)細胞，在維持機體免疫平衡中起著重要作用。當它們在數(shù)量和功能上發(fā)生改變時，就會導致機體免疫功能紊亂而出現(xiàn)一些病理現(xiàn)象[1-2]。FCM根據(jù)淋巴細胞表面標志的不同可檢測各細胞亞群的數(shù)量和比例，包括T淋巴細胞(CD3+)、B淋巴細胞(CD19+)、NK細胞(CD16+CD56+)，其中T淋巴細胞可進一步測定輔助/誘導T淋巴細胞(CD3+CD4+)、抑制/細胞毒T淋巴細胞(CD3+CD8+)[3]。不同的T細胞亞群有不同的免疫功能，CD3+抗原分子通常分布在成熟T細胞表面，故CD3+T細胞數(shù)量可代表機體總T細胞數(shù)量，反應(yīng)機體總的細胞免疫狀態(tài)。而CD4+T細胞通常代表T輔助細胞，CD4+細胞對抗體的生成、巨噬細胞及細胞毒T淋巴細胞的活化有輔助和放大效應(yīng)，在免疫應(yīng)答中處于中心地位，可識別腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，參與B細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞和細胞毒T細胞的激活，進而發(fā)揮抗腫瘤作用。CD8+T細胞通常代表T抑制細胞，抑制機體免疫應(yīng)答。CD4+/CD8+的比值反應(yīng)了機體細胞免疫功能狀態(tài)是否穩(wěn)定，比值降低代表細胞免疫功能降低[4-6]。本研究結(jié)果顯示：惡性腫瘤患者的CD4+細胞明顯降低，反應(yīng)患者T細胞的輔助功能下調(diào)，在產(chǎn)生抗體、殺傷癌細胞等方面的能力都明顯下降。惡性腫瘤患者CD4+細胞降低，CD8+細胞增高，CD4+/CD8+的比值低于非腫瘤患者。提示肝膽胰惡性腫瘤患者存在細胞免疫功能低下。有研究[7]顯示CD4+/CD8+比值隨著腫瘤分期的提高而明顯降低，提示腫瘤患者T細胞亞群功能的損害與臨床分期有明顯關(guān)系。由此可見通過觀察CD4+/CD8+比值可以對腫瘤患者預(yù)后有初步的判斷。

通過本研究可發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤患者存在T細胞介導的細胞免疫改變和紊亂，因此檢測患者外周血T細胞亞群的變化可直接反應(yīng)機體的免疫功能狀態(tài)。而檢測腫瘤患者T細胞亞群水平對評估他們的細胞免疫功能及為臨床進一步對惡性腫瘤治療效果的評價提供臨床參考依據(jù)，也為腫瘤的免疫增強治療提供了理論依據(jù)。

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2015-06-16)

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