商慶花 趙嶺嶺 劉俊芳 吳春平 李景光 劉艷彩

(1.衡水市第四人民醫(yī)院病理科；2.衡水市第五人民醫(yī)院病理科，河北 衡水 053000)

C-erB-2、ER、PR在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義

商慶花1趙嶺嶺1劉俊芳2吳春平1李景光1劉艷彩1

(1.衡水市第四人民醫(yī)院病理科；2.衡水市第五人民醫(yī)院病理科，河北 衡水 053000)

目的 探討雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)及第二人體表皮生長因子受體(C-erB-2)在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義。方法 應(yīng)用免疫組化SP法檢測三者在30例正常子宮內(nèi)膜、30例子宮內(nèi)膜息肉及86例子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平，分析其臨床意義及相關(guān)性，并將其與子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病理分期、組織細(xì)胞學(xué)分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等高危因素進(jìn)行分析。結(jié)果 (1)C-erB-2、ER及PR在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜息肉和子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率組與組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)C-erB-2陽性表達(dá)與手術(shù)病理分期、組織細(xì)胞學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05);ER陽性表達(dá)與手術(shù)病理分期、組織細(xì)胞學(xué)分級及肌層浸潤相關(guān)(P<0.05);PR與組織細(xì)胞學(xué)分級、肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。(3)C-erB-2 與 ER的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.247，P<0.05)， ER與PR的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.756，P<0.05)。結(jié)論 在子宮內(nèi)膜癌中，C-erB-2、ER及PR聯(lián)合檢測可作為早期診斷、指導(dǎo)內(nèi)分泌治療及判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。

子宮內(nèi)膜腺癌； 第二人體表皮生長因子受體； 雌激素受體； 孕激素受體； 免疫組化

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖道常見三大惡性腫瘤之一，是一種激素依賴性腫瘤， 其腫瘤細(xì)胞中存在雌激素受體(ER)及孕激素受體(PR)，且第二人體表皮生長因子受體(C-erB-2)在細(xì)胞的生長、增殖以及分化過程中起重要作用，故C-erB-2的過度表達(dá)與腫瘤的惡性程度有一定相關(guān)性。有研究[1]發(fā)現(xiàn)，在絕經(jīng)婦女子宮內(nèi)膜息肉組織中C-erB-2蛋白過度表達(dá)，C-erB-2作為促進(jìn)細(xì)胞增殖的基因，使子宮內(nèi)膜息肉在低雌激素的狀態(tài)下也能正常生長，這與絕經(jīng)后子宮內(nèi)膜息肉的高惡變率相關(guān)。近來在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率有上升趨勢，具有年輕化趨勢且多數(shù)研究認(rèn)為子宮內(nèi)膜息肉與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病密切相關(guān)。對子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后有顯著影響的因素較多，如病理類型、癌瘤生物學(xué)惡性程度等，它們常同時(shí)存在或相互影響[2]。本研究檢測C-erB-2、ER、PR在子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜息肉及正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)，以探討子宮內(nèi)膜腺癌可能的發(fā)病機(jī)制和影響預(yù)后的因素。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2008年10月至2015年1月子宮內(nèi)膜癌患者86例，年齡31～68歲，平均51．5歲；術(shù)前未行放、化療及激素治療；手術(shù)病理分期采用 2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO )標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期44例、Ⅱ期30例、Ⅲ+Ⅵ期12例；G1級30例、G2級27例、G3級29例；無浸潤 6 例，浸及淺肌層(<1/2)52 例，深肌層和漿膜浸潤(≥1/2)28例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例；另取子宮內(nèi)膜息肉30例患者，年齡37～69歲；正常子宮內(nèi)膜30例患者，年齡36～70歲。

1.2 主要試劑及方法 鼠抗人 C-erB-2單克隆抗體、兔抗人 ER 單克隆抗體、兔抗人 PR 單克隆抗體、免疫組化 SP 染色試劑盒、DAB 酶底物顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。采用免疫組化SP 法檢測C-erB-2、ER、PR的表達(dá)，各步驟操作按說明書。進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 判斷結(jié)果 在顯微鏡下觀察細(xì)胞著色的程度，C-erB-2 以胞漿和胞膜呈棕黃色為陽性，ER、PR均以細(xì)胞核內(nèi)存在棕黃色顆粒為陽性，標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)≤5%陰性(-)，6%～ 25%弱陽性(+)，26%～50%中度陽性(++)，>50%強(qiáng)陽性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，C-erB-2、ER、PR 均為計(jì)數(shù)資料，采用χ2、四格表資料確切概率法及 Spearman 秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 C-erB-2蛋白免疫組化結(jié)果 (1)著色部位：C-erB-2蛋白主要分布于細(xì)胞漿，少量分布于細(xì)胞膜(圖1a)。(2)C-erB-2在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜息肉、子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率，3組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。(3)C-erB-2陽性表達(dá)在手術(shù)病理Ⅰ、Ⅱ期與Ⅳ期；組織細(xì)胞分級Ⅰ級與Ⅲ級；淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C-erB-2蛋白陽性與肌層浸潤深度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

2.2 ER、PR蛋白免疫組化結(jié)果 (1)著色部位：ER 、PR蛋白分布在細(xì)胞核(圖1b，c)。(2)ER 、PR在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜息肉組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率呈下降趨勢，且子宮內(nèi)膜癌組與正常子宮內(nèi)膜組及子宮內(nèi)膜息肉組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，正常子宮內(nèi)膜組及子宮內(nèi)膜息肉組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。(3)ER的陽性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05)；PR陽性表達(dá)率隨臨床分期增高而降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而其陽性表達(dá)率隨組織細(xì)胞學(xué)分級增高、肌層浸潤深度加深及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率增加而下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05) 。見表2。

C-erB-2 與 ER的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.247，P<0.05)， ER與PR的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.756，P<0.05)，其它因子間相關(guān)性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 C-erB-2、EP、PR蛋白免疫組化結(jié)果

組別nC?erB?2陽性陰性P值ER陽性陰性P值PR陽性陰性P值正常子宮內(nèi)膜組302(6．67)28(93．33)<0．05?29(96．67)1(3．33)<0．05?28(93．33)2(6．67)<0．05?子宮內(nèi)膜息肉組308(26．67)22(73．33)<0．05??25(83．33)5(16．67)<0．05??23(76．67)7(23．33)<0．05??子宮內(nèi)膜癌組8652(61．21)34(38．79)<0．05???57(67．06)29(32．94)<0．05???55(64．71)31(35．29)<0．05???

注：*正常子宮內(nèi)膜組與子宮內(nèi)膜息肉組比較；**子宮內(nèi)膜息肉組與子宮內(nèi)膜癌組比較；***正常子宮內(nèi)膜組與子宮內(nèi)膜癌組比較。

表2 C-erB-2、ER、PR的表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系

注：*P>0.05。

3 討 論

C-erB-2基因?qū)儆谏L因子受體家族，存在于細(xì)胞膜且可跨越細(xì)胞膜內(nèi)外雙側(cè)，具有酪氨酸蛋白激酶活性，可激活信使系統(tǒng)，將外界信號傳遞至細(xì)胞內(nèi)。研究[3]發(fā)現(xiàn)，在正常的子宮內(nèi)膜組織中C-erB-2呈無表達(dá)或低表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度僅呈弱陽性，而從子宮內(nèi)膜息肉到子宮內(nèi)膜癌，其組織細(xì)胞中C-erB-2的陽性表達(dá)率則呈逐漸增高的趨勢[4]。Lambropoulou等[5]研究發(fā)現(xiàn)，42.7%的子宮內(nèi)膜癌患者有C-erB-2蛋白的過度表達(dá)。本研究中C-erB-2在子宮內(nèi)膜癌中陽性表達(dá)率顯著高于正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜息肉，提示在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生中C-erB-2可能起一定作用，C-erB-2基因與子宮內(nèi)膜癌的早期發(fā)生有關(guān)，如發(fā)現(xiàn)其過度表達(dá)則需動態(tài)觀察、早期干預(yù)、積極治療，如其在短期內(nèi)急劇升高，極有可能發(fā)展成內(nèi)膜癌。當(dāng)C-erB-2發(fā)生擴(kuò)增或異常過度表達(dá)時(shí)，可出現(xiàn)細(xì)胞生長失控，產(chǎn)生侵襲性腫瘤細(xì)胞， 并阻止腫瘤細(xì)胞凋亡，甚至促進(jìn)其生長，從而導(dǎo)致細(xì)胞對激素治療和化療藥物的抵抗力增強(qiáng)[6]。 本研究發(fā)現(xiàn)C-erB-2的陽性表達(dá)率隨手術(shù)病理分期增加、組織細(xì)胞學(xué)分級增高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增加，提示C-erB-2的過度表達(dá)及擴(kuò)增與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移、惡性程度及預(yù)后有一定相關(guān)性，說明C-erB-2癌基因在某些致癌因子的作用下被激活，而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的增殖失控，呈活躍增殖狀態(tài)。C-erB-2定位于細(xì)胞表面， 使其成為抗腫瘤治療的理想靶位點(diǎn)。

ER和PR主要是在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)。ER導(dǎo)致內(nèi)膜增生，對子宮內(nèi)膜的影響表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜的增生和血管增殖，形成息肉[7]。PR的作用則是使子宮內(nèi)膜從增生期轉(zhuǎn)為分泌期，從而拮抗內(nèi)膜發(fā)生癌變。ER、PR均存在于靶細(xì)胞核內(nèi)，引起基因活化、轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)啟動，在新mRNA 引導(dǎo)下合成新的蛋白質(zhì)，以其特殊的生物學(xué)活性調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和代謝。當(dāng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞發(fā)生癌變后，ER、PR生物學(xué)活性開始喪失，這可能是由于癌基因的激活或抑癌基因的突變阻礙了正?；虻谋磉_(dá)及酶的功能，使受體失去活性。目前國內(nèi)外關(guān)于 ER、PR與子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的研究甚多，Jongen 等[8]發(fā)現(xiàn)就早期子宮內(nèi)膜癌患者無病生存期而言，PR的缺乏是獨(dú)立的預(yù)后因素，而ER陽性患者其整體生存期較好。本研究結(jié)果顯示，ER、PR 在正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜息肉組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率呈下降趨勢，且子宮內(nèi)膜癌組與正常子宮內(nèi)膜組及子宮內(nèi)膜息肉組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，從而提示子宮內(nèi)膜ER、PR的進(jìn)一步丟失與增加細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變有關(guān)，且在子宮內(nèi)膜發(fā)生病變的過程中，可能會逐步失去 ER、PR 的表達(dá)。隨著組織細(xì)胞學(xué)分級、肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率的增加，ER、PR的陽性表達(dá)率呈下降趨勢，且與組織細(xì)胞學(xué)分級及肌層浸潤深度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，但與手術(shù)病理分期關(guān)系差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示子宮內(nèi)膜癌中的 ER、PR 的含量可在一定程度上反映腫瘤的分化程度，而腫瘤的發(fā)展則會逐步失去 ER、PR 的表達(dá)，說明 ER、PR的缺失與細(xì)胞惡性程度上升、侵襲性增加及向非激素依賴型腫瘤轉(zhuǎn)化有關(guān)。ER、PR的存在提示腫瘤細(xì)胞對激素的刺激有一定的反應(yīng)能力，是內(nèi)分泌抗雌激素治療的理論基礎(chǔ)，同時(shí)其失表達(dá)會導(dǎo)致腫瘤對激素治療的效果差，預(yù)后不良。

多數(shù)研究顯示ER、PR成正相關(guān)，李惠[9]研究發(fā)現(xiàn)C-erB-2 與 ER、PR 表達(dá)相關(guān)。本結(jié)果顯示，C-erB-2 與ER的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，ER與PR的表達(dá)呈正相關(guān)，說明在子宮內(nèi)膜癌變過程中，C-erB-2、ER及 PR之間可能存在著極其復(fù)雜的關(guān)系，C-erB-2的表達(dá)可破壞抗雌激素活性，從而導(dǎo)致ER、PR的下調(diào)甚至缺失以及侵襲性表型的獲得。本研究提示C-erB-2、ER及PR的異常表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，對良惡性腫瘤的鑒別診斷有一定臨床意義，因此推測C-erB-2、ER及PR可能是一個免疫因子組合，其聯(lián)合檢測可作為子宮內(nèi)膜癌早期診斷及預(yù)后評估的重要指標(biāo)。

[1] Ben-Arie A , Goldchmit C, Laviv Y, et al. The malignant potential of endometrial polyps[J]. Eur Obstet Gynecol Reprod Biol, 2004,11(5):206-210.

[2] 曹澤毅.中華婦產(chǎn)科學(xué)[M]. 2版．北京:人民衛(wèi)生出版社,2004: 2120-2140.

[3] Mariani A, Sebo TJ, Katzmann JA, et a1.Endometrial cancer: can nodal status be predicted with curettage[J]. Gynecol Oncol,2005,19(6):594-600.

[4] Lin Jia, Yongjuan Liu, Xiaofang Yi, et al.Endometrial glandular dysplasia with frequent P53 gene mutation: a genetic evidence supporting its precacer nature for endometrial serous carcinoma[J].Clin CancerRes,2008,14(8):2263-2269.

[5] Lambropoulou M, Stefanou D, Alexiadis G, et a1.Cytoplasmic expression of c-er-B2 in endometrial carcinomas[J].Onkologie，2007,30(10):495-500.

[6] 朱婷,汪希鵬,馬慶良.Ⅰ和Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物研究進(jìn)展[J].國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志,2008,35(1):34-38.

[7] Thomas W, Guillermo Toxtolew,Lunaanais Malpica, et a1. Endometrial hyperplasia and endometrial cancer[J].Gynecologic Cancer Prevention，1996,23(2):411-454．

[8] Jongen V, Bri?t J, Dejong R, et al. Expression of estrogen receptoral pha and-beta and progesterone receptor-A and-B in a large cohort of patients with endometrioid endometrial cancer[J].Gynecol Oncol,2009,112(3):537-542.

[9] 李惠.癌基因蛋白 C-erB-2 在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)[J].貴州醫(yī)藥,2003,24(4):302-303.

·實(shí)驗(yàn)研究·

Expression and clinical significance of C-erbB-2, ER and PR in adenocarcinoma of endometriuin

ShangQinghua1,ZhaoLingling1,LiuJunfang2,WuChunping1,LiJingguang1,LiuYancai1.

1.DepartmentofPathology,theFourthHospitalofHengshuiCity,Hengshui053000,China. 2.DepartmentofPathology,theFifthHospitalofHengshuiCity,Hengshui053000,China.

Objective To explore the expression of human epidermal-growth factor receptor 2 (C-erB-2), estrogen receptor (ER) and progesterone receptor(PR) in endometrial carcinoma and their relationship．Methods Immunohistochemical analyses of ER、PR and C-erB-2 were performed in 30 cases of normal endometrium, 30 cases of endometrial polyps and 86 cases of ndometrial carcinoma cases．The relationship between expression rate and stage of pathology，histoogical grade，myometrial invasion，lymph node metastasis was analyzed．Results There were statistical significantly differences that the positive expression rate between in the groups for the C-erB-2 in normal endometrium, endometrial polyps and endometrial carcinoma were significant differences among them (P<0.05). There were significant correlation compared with the positive expression of C-erB-2, stage of surgical-pathologic, grade of histocytology, and lymph node metastasis(P<0.05). The positive expression of ER was significant correlated with stage of surgical-pathologic, grade of histocytology, and degree of myometrial invasion (P<0.05). The positive expression of PR was significant correlation with histocytology, and degree of myometrial invasion (P<0.05). The expression of C-erB-2 was negatively correlated with the expression of ER in endometrial carcinoma (r=-0.247，P<0.05)； The expression of ER was positively correlated with the expression of PR in endometrial carcinoma (r=0.756，P<0.05)．Conclusion The abnormal expression of C-erB-2、ER and PR plays an important role in the occurrence and development of endometrial carcinomas. Both of them may be used as the important index of early diagnosis, guiding therapy of endocrine and judgment of the prognosis of endometrial carcinoma.

Endometrial carcinoma； C-erB-2； Estrogen receptor； Progesterone receptor； Immunohistochemistry

R737.33

A

1000-744X(2016)04-0362-03

2015-08-20)