■高鈺一 萬(wàn)金娟* 黃鴻兵 張美琴 孫建國(guó) 邵俊杰 朱錫和

（1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇南京210017；2.南京帥豐飼料有限公司，江蘇南京211313）

中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）俗稱河蟹，是一種肉質(zhì)鮮美的特種水產(chǎn)品，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在江蘇水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中更是占了舉足輕重的地位，2015年江蘇河蟹養(yǎng)殖面積達(dá)到263.99千公頃，產(chǎn)量達(dá)到了364 534 t，占了全國(guó)產(chǎn)量的45%[1]。但隨著河蟹病害問(wèn)題日益凸顯，如何提高河蟹自身免疫力顯得尤為重要。由于甲殼動(dòng)物缺乏特異性免疫，所以對(duì)其免疫功能的研究主要集中在抗氧化能力方面[2]。越來(lái)越多的飼料添加劑被研究證實(shí)可以有效地提高水產(chǎn)動(dòng)物的抗氧化能力[3-5]，從而提高其免疫力，這其中就包括蝦青素和角黃素[6]。但目前尚未見關(guān)于蝦青素和姜黃素對(duì)中華絨螯蟹抗氧化能力影響的報(bào)道。本試驗(yàn)以中華絨螯蟹幼蟹為研究對(duì)象，在飼料中添加蝦青素和角黃素，考察對(duì)幼蟹生長(zhǎng)、常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分以及肝胰腺抗氧化能力的影響，為二者在中華絨螯蟹配合飼料中的應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)設(shè)計(jì)2組飼料，以某品牌商用蟹料為基礎(chǔ)飼料（D0），在基礎(chǔ)飼料（D0）中添加 50 mg/kg蝦青素+50 mg/kg角黃素制成試驗(yàn)飼料（D1）。試驗(yàn)使用的蝦青素和角黃素均由廣州智特奇生物科技有限公司生產(chǎn)和提供；基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。飼料原料分別粉碎后過(guò)60目篩網(wǎng)，然后進(jìn)行超微粉碎（粒度98%能過(guò)80目），按逐級(jí)擴(kuò)大原則將原料稱重后混勻，再加適量的水混合均勻，用膨化機(jī)制成直徑為1.0 mm的沉性顆粒飼料，在50℃烘干24 h，冷卻后放入密封袋中于-20℃冰柜中保存待用。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平（%）

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

養(yǎng)殖試驗(yàn)在江蘇省淡水水產(chǎn)研究所揚(yáng)中基地進(jìn)行，試驗(yàn)對(duì)象為初始體重為（9.91±0.01）g的中華絨螯蟹幼蟹。試驗(yàn)開始后對(duì)中華絨螯蟹進(jìn)行1周馴養(yǎng)，馴化期間所有蟹均投喂基礎(chǔ)飼料（D0）。隨后隨機(jī)選取1組繼續(xù)投喂D0，另外1組投喂D1，每個(gè)試驗(yàn)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)75只蟹，每天投喂1次（19：00）。采用飽食法投餌，即為蟹體重的2%～3%。并根據(jù)攝食和生長(zhǎng)情況作適當(dāng)調(diào)整，以每次投飼后無(wú)殘餌為宜。試驗(yàn)在水泥池（4 m×4 m×2 m）中進(jìn)行，試驗(yàn)期間采用流水系統(tǒng)，水深30 cm，溶解氧7.45～8.84 mg/l，水溫22～33 ℃，pH值為7.6～8.7，氨氮0.03～0.09 mg/l，硫化氫＜0.005 mg/l。正式養(yǎng)殖70 d后，蟹稱重、采樣等。

1.3 樣品采集與分析測(cè)定方法

70 d養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)試驗(yàn)蟹饑餓24 h，統(tǒng)計(jì)數(shù)量并稱重。隨后每個(gè)水泥池隨機(jī)抽取3只蟹，解剖取肝胰腺，用于抗氧化指標(biāo)測(cè)定，隨后取這3只蟹的肌肉，同時(shí)另取3只全蟹，二者用于常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定；所有樣品置于-80℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

分別計(jì)算各組的增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)、存活率。相關(guān)計(jì)算公式如下：

式中：W0和Wt——分別為試驗(yàn)初始和終末時(shí)蟹的平均體質(zhì)量（鮮質(zhì)量，g）；

T——試驗(yàn)天數(shù)（d）；

F——每只蟹平均攝食飼料質(zhì)量（風(fēng)干基礎(chǔ)）（g）；N0和Nt——分別為試驗(yàn)初始和終末時(shí)蟹的數(shù)量（只）。

全蟹、肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定：將全蟹和肌肉樣品稱重后置于已烘干的培養(yǎng)皿中，先在65℃烘箱中制成風(fēng)干樣，再在105℃烘箱中烘至恒重得到水分含量。粗蛋白（N×6.25）含量采用全自動(dòng)凱氏定氮儀（FOSS KT260，瑞士）測(cè)定；粗脂肪含量采用索氏抽提法測(cè)定；粗灰分含量采用高溫灰化法測(cè)定[7]。

肝胰腺抗氧化指標(biāo)的測(cè)定：總抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、過(guò)氧化氫酶（（Catalase，CAT）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）活性測(cè)定均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒，按照使用說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，用SPSS19.0軟件進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)、方差分析和LSD多重比較，以P＜0.05表示有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 蝦青素和角黃素的配伍對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響（見表2）

表2 蝦青素和角黃素的配伍對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

從表2可見：蝦青素和角黃素配伍添加組相比對(duì)照組在增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)和存活率上均有所提高，但是差異并沒(méi)有達(dá)到顯著性水平（P＞0.05）。

2.2 蝦青素和角黃素的配伍對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響（見表3）

表3 蝦青素和角黃素的配伍對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肌肉成分的影響（%）

由表3可知，蝦青素和角黃素添加組，幼蟹的肌肉水分、粗脂肪、粗灰分含量略低于對(duì)照組，粗蛋白含量略高于對(duì)照組，但是均沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）。

2.3 蝦青素和角黃素的配伍對(duì)中華絨螯蟹幼蟹全蟹常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響（見表4）

表4 蝦青素和角黃素的配伍對(duì)中華絨螯蟹幼蟹體成分的影響（%）

由表4可知，蝦青素和角黃素添加組，幼蟹的體水分含量略低于對(duì)照組，體粗蛋白、粗脂肪、粗灰分含量略高于對(duì)照組，但是均沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）。

2.4 蝦青素和角黃素的配伍對(duì)中華絨螯蟹幼蟹抗氧化能力的影響（見表5）

表5 蝦青素和角黃素的配伍對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化能力的影響

從表5可見，飼料中添加蝦青素和角黃素后，肝胰腺總抗氧化能力和超氧化物歧化酶活性顯著提高（P＜0.05），丙二醛的水平顯著降低（P＜0.05）；兩組間過(guò)氧化氫酶的水平無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

蝦青素和角黃素都屬于類胡蘿卜素中含氮的葉黃素類，肝臟是類胡蘿卜素代謝的主要器官[7]。所有水生動(dòng)物均不具備合成蝦青素和角黃素的能力，必須從餌料中攝取[8]。在實(shí)際生產(chǎn)中，類胡蘿卜素（包括β-胡蘿卜素、蝦青素和角黃素等）在水生動(dòng)物體內(nèi)不僅能促進(jìn)養(yǎng)殖對(duì)象的生長(zhǎng)、存活和著色，還具有很強(qiáng)的抗氧化、抗應(yīng)激和增強(qiáng)免疫的生理功能[9-10]，以提高養(yǎng)殖對(duì)象對(duì)環(huán)境脅迫的適應(yīng)能力，改善養(yǎng)殖對(duì)象的抗氧化性能，對(duì)保護(hù)水生動(dòng)物健康狀況具有重要的作用。

崔惟東等[6]以添加蝦青素和角黃素的混合物（1∶1）飼料投喂虹鱒后，發(fā)現(xiàn)對(duì)虹鱒增重率、飼料系數(shù)、存活率均無(wú)顯著影響；Baker等[11]將蝦青素和角黃素不同比例混合添加于飼料中，結(jié)果均未顯著影響虹鱒的生長(zhǎng)和飼料系數(shù)；Thompson等[12]研究指出蝦青素的添加對(duì)虹鱒的特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)、體成分無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)在添加蝦青素、角黃素混合物后也未觀察到對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果同時(shí)顯示兩組幼蟹的肌肉和全蟹常規(guī)成分之間無(wú)顯著差異；Spinelli等[13]對(duì)銀大麻哈魚、Thompson等[12]對(duì)虹鱒的研究也支持這一觀點(diǎn)。但Geneviève等[14]在日本對(duì)蝦餌料中分別添加100 mg/kg的蝦青素、100 mg/kg角黃素和蝦青素、角黃素的混合物（50 mg/kg+50 mg/kg），結(jié)果發(fā)現(xiàn)各試驗(yàn)組的成活率均有提高，并且添加蝦青素和角黃素混合物（50 mg/kg+50 mg/kg）試驗(yàn)組的成活率最高。其原因有待進(jìn)一步研究探索。

抗氧化系統(tǒng)（Antioxidant Defense System）是存在于所有需氧生物體內(nèi)的一系列抗氧化酶和非酶抗氧化劑的總稱，主要功能是清除體內(nèi)過(guò)剩的氧自由基，保護(hù)機(jī)體免受損傷[15]。該防御系統(tǒng)由酶促和非酶促組成，酶促體系包括SOD、CAT等，非酶促反應(yīng)體系包括蝦青素、維生素、氨基酸等?？偪寡趸芰κ怯糜诤饬繖C(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)[6]。當(dāng)機(jī)體受到刺激時(shí)會(huì)驟然產(chǎn)生大量活性氧自由基，進(jìn)而引起動(dòng)物體內(nèi)總抗氧化防御體系的反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷。

類胡蘿卜素的抗氧化作用有效地捕殺動(dòng)物體內(nèi)過(guò)量的活性氧和自由基，保護(hù)白細(xì)胞免受損傷，從而提高動(dòng)物的非特異性免疫機(jī)能，特別是蝦青素在促進(jìn)抗體的產(chǎn)生、氧化、消除自由基方面的能力均強(qiáng)于β-胡蘿卜素，是水產(chǎn)動(dòng)物的強(qiáng)抗氧化劑和脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制劑[16]。眾多學(xué)者都在體外試驗(yàn)研究認(rèn)為，蝦青素強(qiáng)大的抗氧化活性可能是因?yàn)槠淠芊€(wěn)定膜的結(jié)構(gòu)，降低膜通透性，限制過(guò)氧化物啟動(dòng)子如H202，叔丁基過(guò)氧化氫、抗壞血酸等進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，保護(hù)細(xì)胞內(nèi)重要分子免受氧化損傷[17]。本研究表明，中華絨螯蟹幼蟹在投喂含有蝦青素和角黃素飼料后，蝦青素和角黃素作為非酶促反應(yīng)體系成分在蟹體內(nèi)積累，清除自由基，提高了總抗氧化能力、超氧化物歧化酶的活性，降低了丙二醛的含量，使蟹的抗氧化能力顯著增強(qiáng)。這與Pan等[18]對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦、裴素蕊等[19]對(duì)凡納濱對(duì)蝦以及Chien等[20]對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦研究發(fā)現(xiàn)蝦青素的抗氧化作用研究結(jié)果相似。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，飼料中添加蝦青素和角黃素的混合物（50 mg/kg蝦青素+50 mg/kg角黃素）提高了中華絨螯蟹幼蟹的肝胰腺抗氧化能力。