■ 陳冠華 張金龍 張 寧 瞿紅俠 韓進(jìn)誠* 王志祥 陳建成 陳村年

（1.商丘師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，河南商丘476000；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州450002；3.河南正本清源科技發(fā)展股份有限公司，河南商丘476000）

磷是家禽日糧配制成本中處于第三位的營養(yǎng)素，日糧中磷含量影響家禽生長和骨骼的發(fā)育和礦化。日糧中磷缺乏時(shí)，動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)生長性能受到抑制和骨骼發(fā)育不良癥狀[1]。玉米-豆粕型日糧中，植酸磷約占總磷的40%～60%，家禽自身對(duì)植酸磷的消化率約為30%[2]。家禽日糧中通常添加植酸酶來促使植酸磷降解，來增加總磷沉積，進(jìn)而減少日糧中非植酸磷添加量[3-4]。飼料工業(yè)中低磷日糧中推薦的植酸酶添加水平一般為 500～1 000 IU/kg[3，5]；研究顯示，家禽日糧中添加高劑量植酸酶幾乎能降解全部的植酸磷[6]。然而關(guān)于肉雞日糧中添加高劑量植酸酶能降低多少非植酸磷添加目前還存在著爭議。

25-羥基維生素D3（25-OH-D3）是維生素D3的同工體，家禽日糧中25-OH-D3生物學(xué)效價(jià)約是維生素D3的2倍[7]。25-OH-D3已被我國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)允許在豬和家禽日糧中使用。肉雞日糧中25-OH-D3單獨(dú)添加或與植酸酶同時(shí)添加能減少排泄物中鈣和磷的含量，提高家禽磷利用率[8-10]。本試驗(yàn)旨在研究含25-OH-D3低磷日糧中添加高劑量植酸酶對(duì)1～42日齡肉雞生長性能、骨骼礦化、血漿生化指標(biāo)和鈣磷沉積率的影響，為低磷日糧中合理添加植酸酶科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選取1日齡健康、體重均勻[（44.88±1.31）g]的羅斯308肉雞公雛250只，隨機(jī)分為5個(gè)處理，每處理5個(gè)重復(fù)，每重復(fù)10只。試驗(yàn)期1～42日齡。肉雞進(jìn)行籠養(yǎng)（200 cm×50 cm×35 cm）。飼喂粉狀配合飼料，自由采食，充足飲水，按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫接種。

1.2 試驗(yàn)日糧與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)采用的基礎(chǔ)日糧營養(yǎng)水平參考NRC（1994）[11]和《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33—2004）[12]中肉雞營養(yǎng)需要推薦值。試驗(yàn)設(shè)計(jì)5種日糧，1個(gè)對(duì)照組中非植酸磷（NPP）含量為0.45%/0.35%；4個(gè)試驗(yàn)組按照2×2因子設(shè)計(jì)試驗(yàn)：2個(gè)NPP含量（1～21日齡，NPP含量分別為0.35%和0.25%；22～42日齡，NPP含量分別為0.25%和0.15%），2個(gè)植酸酶添加水平為1 000 IU/kg和10 000 IU/kg?；A(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平見表1。

25-OH-D3添加劑購自山東海能生物工程有限公司，25-OH-D3添加劑（粉劑）商品純度為1.25%，該公司采用Waters2695高效液相色譜儀器測(cè)定的25-OH-D3含量為5.0×105IU/g（1 μg/kg=40 IU/kg）。

1.3 樣品收集與分析

1.3.1 生長性能測(cè)定

肉雞分別在21日齡和42日齡空腹稱重，每天記錄各重復(fù)肉雞采食量、死亡雞只數(shù)，死亡雞只稱重扣除采食量。統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)期采食量，計(jì)算平均采食量（g）、平均體增重（g/d）、料重比（平均采食量/平均體增重）和死亡率。

1.3.2 代謝試驗(yàn)測(cè)定

分別于11～14日齡和31～34日齡收集全部糞尿排泄物，進(jìn)行鈣磷代謝試驗(yàn)。以每個(gè)重復(fù)籠為試驗(yàn)單元，連續(xù)收集96 h新鮮排泄物，收集的排泄物在剔除毛屑雜物后，立即放入-20℃冰箱冷凍，以備分析排泄物中鈣和磷含量。日糧和排泄物樣品分別采用EDTA滴定法測(cè)定鈣（Ca）含量，鉬黃比色法測(cè)定總磷（TP）含量。Ca和TP沉積率計(jì)算公式為：

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

營養(yǎng)物質(zhì)沉積率（%）=[（食入營養(yǎng)物質(zhì)的量-排出營養(yǎng)物質(zhì)的量）/食入營養(yǎng)物質(zhì)的量]×100。

1.3.3 血漿生化指標(biāo)測(cè)定

21日齡和42日齡時(shí)，在每重復(fù)組隨機(jī)選取接近該重復(fù)平均體重的1只肉雞進(jìn)行屠宰試驗(yàn)。用1 mg/ml肝素鈉溶液潤濕注射器，心臟采血5 ml，3 000 g離心10 min，血漿冷凍保存（-20℃）。用島津CL-8000全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血漿鈣濃度和血漿無機(jī)磷濃度。

1.3.4 骨骼指標(biāo)測(cè)定

屠宰試驗(yàn)中，剝離兩側(cè)股骨、脛骨和跖骨。將骨骼放入樣品袋密封，冷凍保存（-20℃）。將左側(cè)骨骼（股骨、脛骨和跖骨）在沸水中煮3～5 min，去除殘余肌肉、腓骨，剝離干凈后，無水乙醇浸泡36 h，無水乙醚浸泡36 h，除去水分和脂肪。烘箱中105℃烘干24 h，用分析天平稱量骨骼重量。用游標(biāo)卡尺測(cè)定腿部左側(cè)骨骼長度和直徑（骨骼長度1/2處）。將骨骼壓碎，放入坩堝，在茂福爐中600℃灰化36 h，以測(cè)定灰分重量。骨骼樣品分別采用EDTA滴定法測(cè)定鈣（Ca）含量，鉬黃比色法測(cè)定磷（P）含量。用西北農(nóng)林科技大學(xué)數(shù)顯萬能試驗(yàn)機(jī)（CMT-5504，深圳市新三思材料檢測(cè)有限公司）測(cè)定腿部右側(cè)骨骼（股骨、脛骨和跖骨）折斷力（即骨骼強(qiáng)度），參數(shù)設(shè)置：跨度40 mm，單位負(fù)荷50 kg，位移速度10 mm/min。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

以每重復(fù)為試驗(yàn)單元，采用SAS 9.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA分析，Tukey’s法進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞生長性能的影響（見表2）

由表2可知，日糧中NPP含量顯著影響1～42日齡肉雞平均體增重和1～21日齡肉雞平均采食量（P＜0.05）；日糧中植酸酶添加水平顯著影響肉雞平均體增重和平均采食量（P＜0.05），料重比和死亡率無顯著影響（P＞0.05）。日糧中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%時(shí)，1～42日齡肉雞平均體增重顯著降低（P＜0.05）；與日糧中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶為10 000 IU/kg時(shí)，肉雞平均體增重和平均采食量顯著提高（P＜0.05）。與日糧中NPP含量為0.45%/0.35%相比，日糧中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg植酸酶或0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg對(duì)1～42日齡肉雞生長性能無顯著的影響（P＞0.05）。

表2 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞生長性能的影響

表2 （續(xù)） 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞生長性能的影響

2.2 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞骨骼參數(shù)的影響（見表3～表5）

由表3、4和5可知，日糧中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%時(shí)，42日齡肉雞股骨和脛骨灰分重量、鈣含量和磷含量以及跖骨直徑和磷含量顯著降低（P＜0.05）。與日糧中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶為10 000 IU/kg時(shí)，肉雞脛骨長度、股骨重量和灰分重量以及跖骨長度顯著提高（P＜0.05）。與日糧中NPP含量為0.45%/0.35%相比，日糧中0.25%/0.15%NPP+1 000 IU/kg植酸酶時(shí)，肉雞骨骼（股骨、脛骨和跖骨）灰分重量、灰分含量、鈣含量和磷含量顯著降低（P＜0.05）；日糧中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg植酸酶、0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg或0.35%/0.25%NPP+10 000 IU/kg對(duì)42日齡肉雞骨骼（除跖骨磷含量外）無顯著的影響（P＞0.05）。

2.3 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞血漿指標(biāo)及鈣和磷沉積率的影響（見表6）

由表6可知，日糧中NPP含量和植酸酶水平顯著影響42日齡肉雞血漿無機(jī)磷濃度（P＜0.05）。日糧中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%時(shí)，42日齡肉雞血漿無機(jī)磷濃度顯著降低（P＜0.05）。與日糧中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶為10 000 IU/kg時(shí)，肉雞血漿無機(jī)磷濃度顯著提高（P＜0.05）。

表3 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞股骨參數(shù)的影響

表3 （續(xù)） 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞股骨參數(shù)的影響

表4 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞脛骨參數(shù)的影響

表4 （續(xù)） 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞脛骨參數(shù)的影響

表5 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞跖骨參數(shù)的影響

表5 （續(xù)） 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞跖骨參數(shù)的影響

表6 高劑量植酸酶對(duì)肉雞血漿鈣和血漿無機(jī)磷濃度及鈣和磷沉積率的影響

由表6可知，日糧中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%時(shí)，31～34日齡肉雞鈣沉積率和11～14日齡肉雞磷沉積率顯著提高（P＜0.05）；與日糧中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶為10 000 IU/kg時(shí)，11～14日齡肉雞鈣磷沉積率顯著提高（P＜0.05）。與日糧中NPP含量為0.45%/0.35%相比，日糧中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg植酸酶時(shí)，11～14日齡和31～34日齡肉雞磷沉積率顯著提高（P＜0.05）。

3 討論

3.1 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞生長性能的影響

本試驗(yàn)顯示，日糧中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%時(shí)1～42日齡肉雞體增重顯著降低。這和Liu等[1]和Li等[13]研究結(jié)果一致。這表明，日糧中NPP含量不足會(huì)抑制肉雞生長性能。與日糧中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶為10 000 IU/kg時(shí)，肉雞體增重和采食量顯著提高。前人研究顯示，肉雞日糧中添加高劑量植酸酶能促進(jìn)降解幾乎全部植酸磷[14]，原因可能是植酸酶水解植酸，提高植酸磷消化率；而25-OH-D3提高了肉雞對(duì)磷的吸收能力，進(jìn)而增加家禽體內(nèi)磷沉積，最終改善肉雞生長性能。本研究顯示，與日糧中0.45%/0.35%NPP相比，日糧中0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg植酸酶、0.35%/0.25%NPP+10 000 IU/kg植酸酶和0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg植酸酶時(shí)，肉雞體增重、采食量、料重比和死亡率無顯著影響。這和Taheri等[15]和Manobhavan等[16]的研究結(jié)果一致。這表明，低磷日糧中添加適宜水平的植酸酶能達(dá)到和正常日糧中磷含量對(duì)肉雞生長性能的促進(jìn)效果。

3.2 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞骨骼參數(shù)的影響

本試驗(yàn)顯示，日糧中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%時(shí)42日齡肉雞股骨和脛骨灰分重量、鈣含量和磷含量以及跖骨直徑和磷含量顯著降低。這和Viveros等[17]研究結(jié)果一致。與日糧中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶為10 000 IU/kg時(shí)，肉雞股骨重量和灰分重量以及脛骨和跖骨長度顯著提高。這和前人研究結(jié)果高劑量植酸酶和25-OH-D3能提高骨骼礦化相一致[9，18-19]。原因可能是高劑量植酸酶和25-OH-D3能增加植酸磷水解和提高對(duì)磷的吸收，進(jìn)而促進(jìn)肉雞骨骼的礦化。與對(duì)照組日糧中NPP含量為0.45%/0.35%相比，日糧中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg、0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg和0.35%/0.25%NPP+10 000 IU/kg時(shí)，42日齡肉雞股骨、脛骨和跖骨的骨骼礦物無顯著影響（除跖骨磷含量外）；日糧中0.25%/0.15%NPP+1 000 IU/kg時(shí)，42日齡肉雞灰分重量、灰分含量、鈣含量和磷含量顯著降低。這表明，在低磷日糧中添加高劑量植酸酶能滿足肉雞骨骼礦化對(duì)磷的需要。

3.3 含25-OH-D3日糧中高劑量植酸酶對(duì)肉雞血漿指標(biāo)及鈣和磷沉積率的影響

本試驗(yàn)顯示，日糧中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%時(shí)無顯著影響42日齡肉雞血漿鈣濃度，這和前人的研究結(jié)果一致[3]。與日糧中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶為10 000 IU/kg時(shí)，42日齡肉雞血漿無機(jī)磷濃度顯著提高，但未顯著影響血漿鈣濃度。這和Manobhavan等[16]的研究結(jié)果一致。原因可能是高劑量植酸酶能促進(jìn)日糧中更多的植酸磷的降解進(jìn)而提高肉雞血漿無機(jī)磷濃度[3]。與對(duì)照組日糧中NPP含量為0.45%/0.35%相比，日糧中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg、0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg和 0.35%/0.25%NPP+10 000 IU/kg時(shí)，42日齡肉雞血漿鈣濃度和血漿無機(jī)磷濃度無顯著影響。這表明，低磷日糧中添加高劑量植酸酶能達(dá)到正常日糧磷含量肉雞血漿鈣濃度和血漿鈣無機(jī)磷濃度。

本試驗(yàn)顯示，日糧中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%時(shí)，11～14日齡肉雞磷沉積率和31～34日糧肉雞鈣沉積率顯著提高。這和Viveros等[17]的研究結(jié)果一致。與日糧中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶為10 000 IU/kg時(shí)，11～14日齡肉雞鈣和磷沉積率顯著提高。Zeller等[19]研究報(bào)道顯示，低磷日糧中由500 IU/kg提高到12 500 IU/kg時(shí)，21日齡肉雞植酸磷降解由67%提高到92%，腸道磷吸收率由31%提高到52%。與對(duì)照組日糧中NPP含量為0.45%/0.35%相比，日糧中為0.25%/0.15%+10 000 IU/kg植酸酶時(shí)，肉雞磷沉積率顯著提高。

4 結(jié)論

以生長性能和骨骼礦化為評(píng)價(jià)指標(biāo)，1～42日齡肉雞日糧中NPP含量為0.35%/0.25%時(shí)，植酸酶適宜添加量為1 000 IU/kg；NPP含量為0.25%/0.15%時(shí)，植酸酶適宜添加量為10 000 IU/kg。