竇歡歡，何滔，時麗芳，鄭淑芳

(1天津中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，天津 300193；2武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院)

大腸腺癌組織中CXCL14、EGFR的表達變化及其意義

竇歡歡1，何滔2，時麗芳2，鄭淑芳2

(1天津中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，天津 300193；2武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院)

目的 觀察大腸腺癌組織中趨化因子14(CXCL14)和表皮生長因子受體(EGFR)的表達變化，并探討其意義。方法 大腸腺癌患者92例，手術(shù)治療中均留取腫瘤組織，其中53例同時留取距離腫瘤組織5 cm以外的自體非腫瘤性大腸黏膜組織，另收集21例大腸腺瘤患者手術(shù)切除的腫瘤組織。采用免疫組化SP法檢測受檢組織中的CXCL14和EGFR，分析CXCL14、EGFR的表達與大腸腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 大腸腺癌、大腸腺瘤及非腫瘤性大腸黏膜組織中CXCL14陽性率分別為79.3%(73/92)、66.7%(14/21)、56.6%(30/53)， EGFR陽性率分別為47.8%(44/92)、42.9%(9/21)、26.4%(14/53)；大腸腺癌組織中CXCL14、EGFR的表達與大腸腺瘤及非腫瘤性大腸黏膜組織相比，P均<0.05；大腸腺瘤組織中CXCL14與EGFR的表達與非腫瘤性大腸黏膜組織相比，P均>0.05。大腸腺癌組織中CXCL14和EGFR的表達與大腸腺癌的分化程度、Dukes分期有關(guān)(P均<0.05)，EGFR的表達與大腸腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。CXCL14與EGFR在大腸腺癌組織中的表達呈正相關(guān)(rs=0.220，P<0.05)。結(jié)論 CXCL14、EGFR在大腸腺癌組織中高表達，可能與大腸腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

大腸腫瘤；大腸癌；大腸腺癌；趨化因子14；表皮生長因子受體

大腸腺癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，常規(guī)治療手段是手術(shù)、化療、綜合治療，病死率居惡性腫瘤第5位。近年來，隨著腫瘤個體化治療和靶向治療技術(shù)的進展，探討大腸腺癌發(fā)生的分子機制，尋找可能的治療靶點，對改善大腸腺癌的療效具有重要意義。趨化因子14(CXCL14)是新近發(fā)現(xiàn)的趨化因子家族成員之一，其在頭頸部鱗狀細胞癌、乳腺癌、前列腺癌等惡性腫瘤中的表達已有研究，但結(jié)果并不一致[1～3]，其在大腸腺癌中的研究報道很少。

表皮生長因子受體(EGFR)在許多惡性腫瘤異常增殖信號通路中起調(diào)節(jié)作用[4]。本研究觀察了大腸腺癌組織中CXCL14和EGFR的表達變化，分析二者與大腸腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系及二者的相關(guān)性，以探討大腸腺癌發(fā)生的分子機制，尋找可能的治療靶點。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2014年6月～2015年11月收治的大腸腺癌患者92例(中高分化腺癌59例，低分化腺癌33例)，男60例，女32例；年齡31～83歲；術(shù)前未接受放療和化療；手術(shù)治療中均留取腫瘤組織(浸潤至漿膜層、肌層74例，浸潤至黏膜層、黏膜下層18例)，其中53例同時留取距離腫瘤組織5 cm以外的自體非腫瘤性大腸黏膜組織。另收集21例大腸腺瘤患者手術(shù)切除的腫瘤組織。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 CXCL14、EGFR檢測方法 CXCL14兔抗人多克隆抗體(濃縮型)購自美國ProteintechTM公司；EGFR鼠抗人單克隆抗體(濃縮型)購自美國Origene公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記通用型Ⅱ抗、羊血清封閉液、DAB購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。所有組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛緩沖溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片5張；其中1張行HE染色，經(jīng)2名高年資病理醫(yī)生復(fù)檢，明確其病理診斷、組織學(xué)分級、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況；其余4張黏附于經(jīng)APES膠處理的免疫切片備做免疫組化染色。采用免疫組化SP法檢測CXCL14及EGFR，CXCL14抗體稀釋比例為1∶400，EGFR抗體稀釋比例為1∶200，以PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，以試劑盒附帶的陽性切片作陽性對照，所有受檢切片同批次染色。CXCL14、EGFR均呈黃色細顆粒狀，前者定位于胞質(zhì)，后者定位于胞膜和胞質(zhì)。首先于低倍鏡下觀察標(biāo)本切片整體，找出腫瘤區(qū)域，然后按照白細胞計數(shù)原則(避開大血管、大片間質(zhì)與大片壞死區(qū))于腫瘤區(qū)域隨機選取10個高倍(400×)視野，分別按照細胞著色強度和著色細胞百分比計分[5]：細胞無著色計0分、淡黃色計1分、棕黃色計2分、棕褐色計3分；陽性細胞<5%計0分、5%～ 25%計 1分、 26%～50%計2分、>50%計3分；上述兩項分值的乘積≤3為陰性、>3為陽性[4]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗，相關(guān)性分析用Spearman相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CXCL14和EGFR在大腸腺癌、大腸腺瘤及非腫瘤性腸黏膜組織中的表達比較 大腸腺癌、大腸腺瘤及非腫瘤性大腸黏膜組織中CXCL14陽性率分別為79.3%(73/92)、66.7%(14/21)、56.6%(30/53)， EGFR陽性率分別為47.8%(44/92)、42.9%(9/21)、26.4%(14/53)；大腸腺癌組織中CXCL14、EGFR的表達與大腸腺瘤組織及非腫瘤性大腸黏膜組織相比，P均<0.05；大腸腺瘤組織中CXCL14與EGFR的表達與非腫瘤性大腸黏膜組織相比，P均>0.05。

2.2 CXCL14和EGFR表達與大腸腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 CXCL14和EGFR的表達與大腸腺癌的組織分化程度、Dukes分期有關(guān)(P均<0.05)，EGFR的表達與大腸腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；CXCL14、EGFR表達與大腸腺癌患者的性別、年齡、腫瘤大小、浸潤深度無關(guān)(P均>0.05)，CXCL14表達與大腸腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。詳見表1。

表1 CXCL14、EGFR表達與大腸腺癌

2.3 大腸腺癌組織中CXCL14、EGFR表達的相關(guān)性 大腸腺癌組織中CXCL14與EGFR均陽性者39例、均陰性者14例，二者表達呈正相關(guān)關(guān)系(rs=0.220，P<0.05)。

3 討論

CXCL14最早從乳腺和腎臟組織中提取得到，定位于人染色體5q31.1，由77個氨基酸組成，具有激活巨噬細胞、未成熟樹突狀細胞和自然殺傷細胞的能力，其特異性受體目前尚未發(fā)現(xiàn)[6]。CXCL14受體和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與其他常見的趨化因子家族成員不同[7]。目前，“正常黏膜→腺瘤→癌演變”學(xué)說已是較為公認的大腸腺癌發(fā)生學(xué)說，大腸腺瘤是典型的大腸腺癌癌前病變之一。本研究結(jié)果顯示，CXCL14在大腸腺癌中的陽性表達率高于大腸腺瘤和非腫瘤性大腸黏膜，提示CXCL14高表達與大腸腺癌的發(fā)生有關(guān)。另外，本研究發(fā)現(xiàn)低分化大腸腺癌CXCL14陽性表達率高于中高分化大腸腺癌，Dukes分期C～D期大腸腺癌的CXCL14陽性表達率高于A～B期，提示CXCL14表達與大腸腺癌的發(fā)展密切相關(guān)。Kleer 等[8]研究證實，CXCL14內(nèi)源性表達可以促進乳腺癌和胰腺癌細胞的生長和侵襲，作用機制可能是其通過活性氧族 (ROS)/激活蛋白-1/CXCL14通路提高細胞內(nèi)鈣離子濃度而調(diào)節(jié)線粒體功能和活性氧應(yīng)激能力，從而促進腫瘤細胞的運動。在乳腺癌細胞內(nèi)線粒體呼吸鏈紊亂ROS上調(diào)會導(dǎo)致新一代細胞亞克隆而激活細胞的增殖、運動和侵襲行為[2]。另外，CXCL14在肺癌與頭頸部鱗癌中的表達是下降的，CXCL14可與趨化因子受體4(CXCR4)結(jié)合競爭性抑制趨化因子12(CXCL12)/CXCR4生物學(xué)軸功能，CXCL12/CXCR4生物學(xué)軸可為許多腫瘤細胞利用并促進其生長、血管生成和轉(zhuǎn)移[9～11]。由于CXCL14的特異性受體目前尚未明確，故其具體作用機制尚不清楚。有學(xué)者[6]提出CXCL14可能因腫瘤發(fā)生部位不同而呈現(xiàn)不同功能。 Ikoma等[12]研究提出CXCL14在上皮細胞中的表達也會因刺激因素的不同而不同，并發(fā)現(xiàn)CXCL14的表達會隨細胞密度的增加而上調(diào)。

EGFR是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶受體，是表皮生長因子(EGF)的受體，與腫瘤細胞的增殖、分化、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及細胞凋亡的抑制有關(guān)[13]。EGFR是反映細胞增殖活性的重要指標(biāo)，其表達率可直接反映細胞增殖情況[14]。本研究結(jié)果顯示，大腸腺癌組織EGFR陽性表達率明顯高于非腫瘤大腸黏膜組織，并且與大腸腺癌分化程度、Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。EGFR主要通過Ras/Raf/MAPK、PI3K/Akt兩條通路傳遞信號到胞核，調(diào)節(jié)細胞的增殖、分化，同時EGFR表達上調(diào)[15]。EGFR對腫瘤的生長、發(fā)展和腫瘤干細胞特性的維持具有重要作用，并在多種腫瘤細胞中存在過表達現(xiàn)象，EGFR通路是腫瘤治療的一個重要靶點[16]。本研究結(jié)果顯示，大腸腺癌組織中CXCL14與EGFR的表達呈正相關(guān)，提示EGFR和 CXCL14在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中起協(xié)同作用，但二者協(xié)同作用的機制有待進一步探討。

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天津市應(yīng)用基礎(chǔ)及前沿技術(shù)研究計劃面上項目(11JCYBJC13000)。

鄭淑芳(E-mail: zhengshf@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.43.030

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2016-07-27)