吳潤標 ， 李小燕 ， 李 奧 ， 劉 威 ， 曹 平 ， 張德志 ， 李前勇

(西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系 ， 重慶榮昌402460)

牛羊皮膚癬菌病的研究進展

吳潤標 ， 李小燕 ， 李 奧 ， 劉 威 ， 曹 平 ， 張德志 ， 李前勇

(西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系 ， 重慶榮昌402460)

牛羊皮膚癬菌病(Dermatophytosis)(亦稱銅錢癬、脫毛癬或禿毛癬病)是由皮膚癬菌(Dermatophytes)引起的牛羊淺在性皮膚真菌病，屬于臨床常發(fā)疾病，主要表現(xiàn)為局部的皮膚炎癥和病變，對生長發(fā)育和育肥增重效果影響較大。引起牛羊皮膚癬菌病的病原有石膏樣毛癬菌(Trichophytongypseum)、疣狀毛癬菌(T.verrucosum)、須癬毛癬菌(T.mentagrophytes)、玫瑰色毛癬菌(T.megninii)、紅色毛癬菌(T.rubrum)、馬類毛癬菌(T.equinum)、犬小孢子菌(Microsporumcanis)、石膏樣小孢子菌(M.gypseum)、豬小孢子菌(M.nanum)和馬蹄足小孢子菌(M.equinum)等。

牛羊皮膚癬菌病呈全球性分布，不同品種、性別、年齡及飼養(yǎng)條件的牛羊均可感染，由于皮膚癬菌的繁殖需要角蛋白作為營養(yǎng)原料，而動物和人的毛干，甲板，皮膚表皮等富含角蛋白，因此皮膚癬菌可在牛羊皮膚上大量繁殖，通過機械刺激和代謝產(chǎn)物的作用對宿主造成傷害，造成經(jīng)濟損失[1]。本病自1957年報道以來，臨床上發(fā)病逐漸增多，已引起了人們的關注。但該病病原種類多、鑒定難、發(fā)病后難以根除，臨床上又缺乏規(guī)范的診斷治療程序，已成為了臨床防治的難點問題。只有深入的了解皮膚癬菌病的歷史分布與現(xiàn)狀、病原及流行病學、臨床癥狀、鑒別診斷才能有效的防制該病。

1 歷史分布與現(xiàn)狀

19世紀60年代，波斯尼亞和黑塞哥維那的學者Ozegovc[2]通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該國國內(nèi)牛群中疣狀毛癬菌是最普遍的皮膚癬菌病原，陽性率最高達93.3%，從那以后巴西、捷克共和國、摩洛哥、巴基斯坦、印度、日本、伊朗、意大利、土耳其、南斯拉夫、埃塞俄比亞、埃及、利比亞、伊拉克、尼日利亞等國陸續(xù)報道了牛羊的皮膚癬菌病，這些報道中，牛的感染率為2%～93.3%，主要病原為疣狀毛癬菌，須癬毛癬菌次之；羊的感染率7.67%～76%，主要病原為毛癬菌屬和小孢子菌屬。牛羊的混合感染率為5.45%。在我國，李自漢最早(1986年)報道了1頭1歲公綿羊與患牛拴在一起，通過飼養(yǎng)員和飼喂器具或飼料等途徑間接地感染牛疣狀毛癬菌[3]。此后，河南、貴州、蘭州、西安、黑龍江、廣東、新疆、河北、內(nèi)蒙古、四川、陜西、北京、寧夏、云南、福建等省份陸續(xù)報道了牛羊患皮膚癬菌病。綜合報道情況，國內(nèi)肉牛的感染率為6%～75.79%，主要病原為疣狀毛癬菌，山羊的感染率為0.84%～75%，病原為毛癬菌屬和小孢子菌屬。由此可見，牛羊皮膚癬菌病在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)廣泛發(fā)生，典型養(yǎng)殖場發(fā)病率高，是值得人們關注和重視的傳染性皮膚病。

2 病原及流行病學

本病的病原體是主要生長在毛和皮膚或兩者上的真菌，稱為皮膚真菌或真菌癬，包括毛癬菌屬(Trichophyton)、小孢子菌屬(Microsporum)和表皮癬菌屬(Epidermophyton)，約45個種[8]，比較公認對牛羊有致病作用的約有9種，分別是石膏樣毛癬菌、疣狀毛癬菌(T.verrucosum)、須癬毛癬菌(T.mentagrophytes)、馬類毛癬菌(T.equinum)、犬小孢子菌(M.canis)、石膏樣小孢子菌(M.gypseum)、豬小孢子菌(M.nanum)、犬小孢子菌(Mcanis)和馬蹄足小孢子菌(M.equinum)。皮膚癬菌主要由菌絲和孢子組成。菌絲是由孢子萌發(fā)而產(chǎn)生的，一般為長管狀分支，具有典型的細胞結構，包括細胞壁、細胞膜、細胞漿、細胞核和內(nèi)含物，呈多核單細胞狀態(tài)，菌絲細胞的大小因菌種不同而異，細胞壁厚度為100～300 μm，內(nèi)含幾丁質(zhì)，占干重的2%～26%。根據(jù)功能不同可將菌絲劃分營養(yǎng)菌絲，氣生菌絲和繁殖菌絲3類。伸入培養(yǎng)基中的為營養(yǎng)菌絲，起吸收營養(yǎng)作用；伸向空氣生長的為氣生菌絲；氣生菌絲繼續(xù)發(fā)育到一定階段，產(chǎn)生孢子的繁殖器官的稱為繁殖菌絲。孢子是皮膚癬菌的繁殖結構，多呈圓形或橢圓形，當外界條件適宜時，以無性繁殖的方式，萌發(fā)成新的菌絲體，即真菌的菌落[1]。感染牛和羊的主要真菌、癬菌及宿主和地理分布詳見表1。癬菌真菌對犬、貓、牛、馬等動物最為易感。牛羊皮膚癬菌病傳播方式是接觸傳染，易感動物、被污染的土壤以及人是構成傳播真癬菌的主要因素。犢牛羔羊比成年牛羊更易感染，1歲犢牛發(fā)病率為9.45%，1～2歲牛為2%，成年牛為0.94%[9]。該病一年四季均可發(fā)生，秋冬季比夏季多發(fā)，7～9月份為高峰期，潮濕溫暖(22 ℃～29 ℃)環(huán)境和動物的皮膚創(chuàng)傷均可促進發(fā)病。皮膚癬菌對宿主無選擇性，牛羊皮膚癬菌病病原常具有人畜共患性，可通過菌絲或分節(jié)孢子傳播給犬、貓、豬、賽馬、駱駝和人等。

表1 感染牛和羊的主要癬菌真菌

3 發(fā)病機制

目前，人們對于皮膚癬菌病的致病機制尚未完全明確，但普遍認為癬菌感染皮膚的過程主要包括粘附和侵襲兩個階段。研究表明，皮膚癬菌可分泌粘附相關物質(zhì)、蛋白水解酶、半胱氨酸雙加氧酶(CDO)等物質(zhì)，并能分解角蛋白[4]；而表層皮膚的主要成分是角蛋白，角蛋白又與胱氨酸二硫鍵緊密連接；皮膚癬菌在角蛋白水解過程中通過半胱氨酸的氧化還原反應產(chǎn)生胞內(nèi)亞硫酸鹽，通過亞硫酸鹽泵流出真菌胞外，亞硫酸鹽最終作為還原劑將角蛋白層的胱氨酸二硫鍵裂解。而半胱氨酸雙加氧酶(CDO)在真菌胞內(nèi)半胱氨酸的產(chǎn)生過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。

4 臨床癥狀

癥狀明顯時，表現(xiàn)為體表皮膚圓形或不整形脫毛性禿斑；進而在病變周圍形成癬垢，甚至堆積痂殼。脫斑大小不等，呈散在分布或連接成片；開始為白色，然后逐漸變厚、變黃，猶如石棉狀結痂。好發(fā)于頭、頸部，也可發(fā)于腹部、臀部和四肢。發(fā)于甲部時，多呈灰白色，甲板增厚，甲下常有角蛋白及碎屑沉積，嚴重時引起甲板破損脫落。發(fā)病牛羊還表現(xiàn)出脫毛、滲出、毛囊炎以及癢感[19]。犢牛感染后，病變常呈全身性分布[9]。

5 診斷

牛羊癬菌病主要通過流行病學、臨床癥狀和病原的分離進行診斷。前者可作為懷疑性診斷。確診必須進行實驗室檢驗，常用的實驗室診斷方法包括直接顯微鏡檢查、Wood氏燈試驗、掃描電鏡檢測、真菌培養(yǎng)、血清學和分子生物學方法等。

顯微鏡檢查是先刮取病變部位的毛發(fā)，指(趾)甲，皮屑等兩份，一份做直接鏡檢，即將病料放于干凈滅菌的載玻片上，加入20%KOH 1滴制成涂片，以蓋玻片覆蓋，必要時在酒精燈火焰上輕輕加熱，使之軟化透明后再鏡檢觀察，臨床上也可以用膠帶粘病變部位的皮膚，載玻片上滴加少許乳酸酚棉藍染液，最后膠帶粘貼到載玻片上一段時間后鏡檢。另一份做病理切片染色檢查和培養(yǎng)，皮膚癬菌常用的染色方法有：六胺銀染色方法、糖原染色法、銀氨液浸染法、熒光染色等。其中六胺銀染色結果為真菌菌絲和孢子呈明顯的黑褐色，糖原染色結果為真菌菌絲和孢子呈品紅色，銀氨液浸染結果為真菌呈棕黑色，熒光染色結果為真菌顯熒光染料顏色。在組織切片中發(fā)現(xiàn)真菌菌絲和(或)孢子，即為診斷真菌感染的有力證據(jù)。

真菌培養(yǎng)是將采集的病料先用75%酒精和無菌生理鹽水洗滌處理后將其接種于沙保勞瓊脂平板上，28℃培養(yǎng)兩周。利用平板畫線的方法將在接種部位生長的真菌進一步純化，獲得單菌落。菌落的形態(tài)和類型及在培養(yǎng)基的正面和背面顯示不同顏色都是真菌的鑒別依據(jù)。還可將單菌落真菌接種到皮膚癬菌鑒定培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)1周，若培養(yǎng)基由黃變紅，則說明為皮膚癬菌。用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)進行小培養(yǎng)，誘導真菌產(chǎn)生孢子后鏡檢鑒定可將其鑒定到屬。

血清學診斷的原理為β-1,3-D-葡聚糖廣泛存在于各類真菌的細胞壁中，占真菌胞壁成分50%以上，而細菌和動物上一般不存在這類物質(zhì)，檢測到β-1,3-D-葡聚糖，就可以初步認為真菌感染。目前的檢測方法為G試驗法，其靈敏度約為90%，特異性100%。但皮膚癬菌與腐生性真菌有共同抗原，因此，臨床上一般不用本法診斷皮膚癬菌感染。

分子生物學診斷可以用于種屬間的鑒別、種內(nèi)分化以及分子分型。該方法包括聚合酶鏈式反應(PCR)、核酸堿基GC比分析、限制性片段長度多態(tài)性、Southern印跡分析、脈沖場凝膠電泳(PFGE)、隨機擴增多態(tài)性(RAPD)、DNA片段測序。目前，鑒別皮膚癬菌菌種的金標準為菌株rRNA的ITS測序。該法利用純培養(yǎng)的病原真菌提取基因組，用真菌ITS通用引物進行PCR擴增并進行產(chǎn)物測序，最后將測序的結果與基因數(shù)據(jù)庫中的序列進行比較，相似度最高的為種。近幾年來，國內(nèi)外學者研究表明，CHS1基因其在皮膚癬菌中高度保守，可用于皮膚癬菌鑒定[20]。

6 防制

預防為主、防治結合是當前國內(nèi)外對于牛羊皮膚癬菌病的防制原則。有效地預防措施包括畜舍消毒和疫苗免疫。LTF-130凍干苗肌肉注射牛羊，即可獲得免疫力，安全有效[21]。一旦，牛羊群暴發(fā)癬菌病，應先進行隔離，對患畜用碘制劑、復方土槿皮、大蒜素或特比奈芬進行外敷，口服噻苯咪唑也能取得較好的療效。治療過程中可與抗生素聯(lián)合用藥，用以治療除癬菌以外的細菌感染病，藥物治療配合熱療，可提高該病的治愈率。

7 小結

皮膚癬菌病是由一種群密切相關的絲狀真菌侵入皮膚角質(zhì)層及其附屬物引起的各種感染，這種疾病致死率雖低，但可造成養(yǎng)殖效益下降，對動物福利、國際間牛羊交易均可帶來較大的負面影響。因此了解和掌握牛羊皮膚癬菌病的研究現(xiàn)狀，對于臨床上進行疾病診斷和有效防制有著十分重要的意義。隨著人們對牛羊疾病的重視，尤其是皮膚癬菌致病機理和遺傳特性研究的不斷深入，以及診斷技術水平的持續(xù)提高，我們有理由相信，將會有更多牛羊皮膚癬菌病的快速、簡便、準確的診斷新技術出現(xiàn)，也會有更加有效的防治藥物或方法被發(fā)現(xiàn)。

[1] 陸承平.獸醫(yī)微生物學[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社, 2007.

[2] Ozegovc L, Grin I E. Dermatomycosis in Domestic Animals in our Country with special attention to their Extension in Bosnia and Herzegovina[J]. Veterinaria, 1957,6:2-3.

[3] 李自漢. 發(fā)癬菌引起的牛, 綿羊, 馬和人的皮膚絲狀菌病[J]. 中國人獸共患病雜志, 1986, 2: 032.

[4] Scott J A, Untereiner W A. Determination of keratin degradation by fungi using keratin azure[J]. Medical Mycology, 2004, 42(3): 239-246.

[5] 趙小東. 須癬毛癬菌角蛋白酶的表達及生物學作用[D]. 西安：解放軍第四軍醫(yī)大學, 2004.

[6] 段志敏, 曾榮, 李岷. 皮膚癬菌致病因素的研究進展[J]. 國際皮膚性病學雜志, 2014, 40(5):329-331.

[7] Grumbt M, Monod M, Staib P. Genetic advances in dermatophytes[J]. FEMS microbiology letters, 2011, 320(2): 79-86.

[8] Emmons C W. Dermatophytes: natural grouping based on the form of the spores and accessory organs[J]. Archives of Dermatology and Syphilology, 1934, 30(3): 337-362.

[9] 汪昭賢. 獸醫(yī)真菌學[M]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學出版社, 2005.

[10] Ilhan Z. Isolation of dermatophytes from cattle, sheep, goats and Van cats in Van and its around[J]. Yüzüncü y1l üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi, 2015, 26(1): 1-5.

[11] Papini R, Nardoni S, Fanelli A,etal. High infection rate of Trichophyton verrucosum in calves from Central Italy[J]. Zoonoses and public health, 2009, 56(2): 59-64.

[12] Chah K F, Majiagbe K A, Kazeem H M,etal. Dermatophytes from skin lesions of domestic animals in Nsukka, Enugu State, Nigeria[J]. Veterinary dermatology, 2012, 23(6): 522-e104.

[13] Pandey V S, Mahin L. Observations on ringworm in goats caused by Trichophyton verrucosum[J]. British veterinary journal, 1980.

[14] Khosravi A R, Mahmoudi M. Dermatophytes isolated from domestic animals in Iran[J]. Mycoses, 2003, 46(5‐6): 222-225.

[15] 馬維奇, 施進文. 羊錢癬病的診斷及綜合防治[J]. 養(yǎng)殖技術顧問, 2011 (9): 115-115.

[16] Takatori K, Takahashi A, Kawai S,etal. Isolation of Trichophyton verrucosum from lesional and non-lesional skin in calves[J]. The Journal of veterinary medical science/the Japanese Society of Veterinary Science, 1993, 55(2): 343-344.

[17] Nada H S. Mycological studies on dermatophytes among goats in Egypt[J]. Veterinary Medical Journal Giza, 2000, 48(3): 335-340.

[18] Mohammed S J, Faraj M K. A Survey of Dermatophytes Isolated from Cows and Sheep in Iraq [J]. The Iraqi journal of veterinary medicine. 2011,35 (2): 40-45.

[19] 葛松, 蔣萬, 何生虎, 等. 寧夏肉牛皮膚病原真菌的分離與鑒定[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學, 2015, 48(14): 2876-2883.

[20] 安然. CHS1基因在皮膚癬菌菌種鑒定中的應用[D]. 北京：北京大學, 2001.

[21] Lund A, Bratberg A M, Nαss B,etal. Control of bovine ringworm by vaccination in Norway[J]. Veterinary immunology and immunopathology, 2014, 158(1): 37-45.

2016-04-26

吳潤標(1991-)，男，碩士生，主要從事家畜皮膚癬菌病研究，E-mail:352304798@qq.com

李前勇,E-mail：qianyong_l@126.com

S827

A

0529-6005(2016)11-0079-03