王起來，譚 巖，馬寅芙，蘆小單，方艷秋

(吉林省人民醫(yī)院 醫(yī)學(xué)診治實驗中心，吉林 長春130021)

*通訊作者

人工常規(guī)精液分析與計算機輔助精液質(zhì)量分析的相關(guān)研究

王起來，譚 巖，馬寅芙，蘆小單，方艷秋*

(吉林省人民醫(yī)院 醫(yī)學(xué)診治實驗中心，吉林 長春130021)

精液質(zhì)量是反映男性生育力最直接、最主要的指標(biāo)，對于男性不育患者的精液質(zhì)量進行分析是首要檢測項目，可以提供較為直觀的診斷依據(jù)。以往常常采用經(jīng)典的人工常規(guī)精液分析(SRA)方法進行檢測，近年來，計算機技術(shù)迅速發(fā)展，計算機輔助精子分析(CASA)技術(shù)也逐漸普及，為了對男性不育患者精液質(zhì)量各項檢測項目提供更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，本研究采用SRA法和CASA法對精液的主要指標(biāo)進行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 選取2014年3年-2015年3年于我院生殖中心就診的婚后無分居、性生活正常、未避孕未育1年以上的不育癥患者647例精液標(biāo)本進行分析，排除無精癥者，年齡21-44歲，囑患者禁欲3-7天后，手淫法留取精液，將全部精液留于一次性取精杯中，注意保溫，立即送檢。 將所接收的標(biāo)本放于37℃ 恒溫水浴箱中，液化后檢測。

1．2 方法 CASA法：在整份標(biāo)本中取10 μl置于Macro計數(shù)板上，記錄精子活率、活力和密度、精子畸形率、圓細胞數(shù)量等，嚴格按照儀器操作規(guī)程及參數(shù)設(shè)置作全套的精液參數(shù)分析，對采集的圖像進行動態(tài)處理分析，打印結(jié)果。SRA法：根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)規(guī)定的方法和標(biāo)準(zhǔn)對液化后的標(biāo)本進行分析檢測，對精子活動率、活力及濃度、精子形態(tài)及細胞等做詳細記錄。兩種方法均由一名有經(jīng)驗的檢驗師進行操作，操作前經(jīng)過正規(guī)試驗，力求做到操作過程規(guī)范、降低誤差。精子計數(shù)及精液樣品保持在36.5℃至37℃的環(huán)境溫度中進行檢測。

2 結(jié)果

兩種方法對精液質(zhì)量分析的結(jié)果有一定的差異，與SRA相比，CASA法所檢測的精子密度在(20-50)×106/ml范圍內(nèi)的結(jié)果較穩(wěn)定，二者無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。而對于密度 >50×106/ml和<20×106/ml的結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。精子的活動率和a、d級精子、畸形精子數(shù)及其他細胞數(shù)存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表1。

表1 SRA與CASA分析結(jié)果比較

注：﹡兩者比較P<0.05。

3 討論

精液分析是判斷男性生育力的重要手段，在男性不育癥的治療、男性節(jié)育措施的效果評價及男性生殖生理研究中具有不可替代的作用[1]。傳統(tǒng)的SRA法具有直觀、檢測面廣等優(yōu)點，但其帶有很強的主觀性，對精子運動能力的判斷缺少嚴格的量化標(biāo)準(zhǔn)，不同檢測者的分析結(jié)果有時差別很大，即使同一個人對同一個精液樣本進行重復(fù)檢測，結(jié)果也會有所不同，特別是對精子活率和活力的統(tǒng)計，絕大多數(shù)根據(jù)檢查者的經(jīng)驗來判斷，結(jié)果的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到臨床醫(yī)生的診療方向，影響科研成果的準(zhǔn)確性。而CASA法通過相機或攝像機和顯微鏡鏈接，跟蹤單個精子的運動，按設(shè)定精子的活動、精子的體積、灰度及精子運行的相關(guān)參數(shù)，對所采集的圖像進行數(shù)據(jù)分析。CASA具有客觀、操作簡便、快速、可比性強、重復(fù)性好等優(yōu)點，減少了人為檢測誤差，為臨床醫(yī)生和科研提供了規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化及科學(xué)化的有利條件。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)精子濃度對CASA法測定結(jié)果有一定影響，CASA系統(tǒng)檢測濃度>50×106/ml及濃度<20×106/ml的精液標(biāo)本時結(jié)果有一定的局限性。濃度在(20-50)×106/ml范圍內(nèi)的精液標(biāo)本的結(jié)果較理想。故建議對于靜態(tài)圖上濃度<20×106/ml的標(biāo)本，應(yīng)多個視野進行檢查，而濃度高于50×106/ml的標(biāo)本進行稀釋后再檢測,WHO推薦可使用Dulbecco磷酸鹽緩沖液‐葡萄糖‐牛血清蛋白溶液稀釋標(biāo)本，此外生理鹽水也是較好的稀釋液[2]。CASA直接測定高密度精液結(jié)果 除受到精子碰撞和非精子成分的影響外，還與精子的密度、CASA灰度和閾值設(shè)置密切相關(guān)[3]。有學(xué)者建議使用CASA分析精子時：精子密度以(25-50)×106/ml 為宜，過高應(yīng)稀釋，密度過低以手工檢查為妥[4]。另外兩種方法對精液質(zhì)量分析各指標(biāo)的結(jié)果有一定的差異，與SRA相比，CASA法檢測的精子活動率低，可能是因為其只將位置發(fā)生移動大精子認為是活精子，而在原地擺動的精子認定為無活動精子。 而在精子活動力方面，CASA法檢測到a 級活力精子比例高，d 級活力精子偏低，SRA法則相反，這可能與精液分析儀的參數(shù)設(shè)置有關(guān)。本實驗結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，CASA對畸形精子的識別模糊，不能確定畸形類別，對精液中非精子有形成分，如精原細胞、白細胞、非細胞顆粒等較多的標(biāo)本所提供的信息含糊不清，這可能與精子計數(shù)時采用的灰度閾值需將閾值調(diào)整到可將精子全部采集而不采集卵磷脂小體、白細胞等非精子微小顆粒狀態(tài)有關(guān)[5]，此項檢查信息也須人工分析后輸入。

總之，雖然CASA系統(tǒng)具有效率高、精度高的特點，但其影響因素不容忽視。傳統(tǒng)的SRA法具有直觀、檢測面廣等優(yōu)點，但其帶有很強的主觀性，兩種方法各有利弊，不能依靠某一結(jié)果，為提高檢測的精準(zhǔn)度，應(yīng)二者結(jié)合，為臨床提供準(zhǔn)確的診斷依據(jù)。

[1]葛利麗．計算機輔助精子質(zhì)量分析系統(tǒng)與人工顯微鏡方法比對分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2011,8(2)：228．

[2]葉明桃，曹云霞，趙濟華，等.兩種稀釋液在精液常規(guī)分析中的用比較[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2008，16(2)：110．

[3]黃宇烽，陸金春.精子質(zhì)量參數(shù)分析的標(biāo)準(zhǔn)化與質(zhì)量控制的研究進展[J].中華男科學(xué)雜志，2007，55(11)：865.

[4]黃荷鳳，主編.臨床診療指南-輔助生殖技術(shù)與精子庫分冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：148.

[5]李 麗，曾金良，盧衛(wèi)國．提高計算機輔助精液分析結(jié)果的準(zhǔn)確性[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(8)：963．

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