姚春紅，鄧建平

（黃石市愛(ài)康醫(yī)院，湖北 黃石 435000）

抗 CCP抗體和 AKA在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷的應(yīng)用價(jià)值

姚春紅，鄧建平

（黃石市愛(ài)康醫(yī)院，湖北 黃石 435000）

目的比較抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗 CCP抗體）和抗角蛋白抗體（AKA）在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中作用，探討 RA的早期診斷方法。方法對(duì)已確診的85例 RA患者、74例非 RA的自身免疫病患者同時(shí)測(cè)定抗 CCP抗體（ELISA法）、AKA（間接免疫熒光檢測(cè)）。結(jié)果抗 CCP抗體對(duì)診斷 RA的靈敏度和特異性分別為75.3%和93.2%；AKA對(duì) RA診斷的靈敏度和特異性分別為89.4%和85.14%?？笴CP抗體的靈敏度與AKA靈敏度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），特異性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；抗CCP抗體或AKA與二者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），特異性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值抗 CCP抗體較高，陰性預(yù)測(cè)值以二者聯(lián)合檢測(cè)較好，Youden index二者聯(lián)合檢測(cè)比單獨(dú)檢測(cè)抗 CCP抗體或 AKA高?？?CCP抗體和 AKA在檢測(cè) RA組中抗 CCP抗體和 AKA同時(shí)陽(yáng)性檢出 58例；抗CCP抗體或AKA陽(yáng)性共檢出85例?？笴CP抗體或AKA陽(yáng)性率（96.5%）比二者同時(shí)陽(yáng)性率（68.2%）大大提高。結(jié)論抗 CCP抗體、AKA對(duì)RA具有較好的靈敏度和高度的特異性，聯(lián)合檢測(cè)抗CCP抗體和AKA可作為早期RA患者及RF陰性RA患者的早期診斷指標(biāo)。

抗環(huán)瓜氨酸肽抗體； 抗角蛋白抗體； 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RF）是一種常見(jiàn)的以對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的慢性彌漫性自身免疫疾病，其病因和發(fā)病機(jī)制迄今尚未闡明［1-2］，而早期診斷和系統(tǒng)性治療是防止關(guān)節(jié)畸性和致殘的關(guān)鍵。類風(fēng)濕因子是診斷 RA重要檢測(cè)指標(biāo)，但 RF特異性不高，特別是早期檢出率不高，對(duì)早期預(yù)防和治療帶來(lái)一定的困難。近年來(lái)陸續(xù)發(fā)現(xiàn)抗核周因子抗體 （antiperinuclear factor，APF）、抗 角 蛋白 抗體（antikeratin antibody，AKA）等，瓜氨酸是 AKA、ARF、AFA的共同抗原決定簇，以合成的CCP為抗原，可以用ELISA檢測(cè)抗 CCP抗體［3］，可在 RA發(fā)病早期發(fā)現(xiàn)。本文通過(guò)對(duì)抗 CCP抗體和 AKA的檢測(cè)，了解抗CCP抗體、AKA在RA早期診斷中的作用和價(jià)值。

材料和方法

1 研究對(duì)象

2014年8月至2015年5月我院門(mén)診和住院 RA患者85例，符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）1987年修訂的 RA診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，男性 39例，女性 46例，年齡20～76歲。非 RA組：74例，其中系統(tǒng)性硬化癥（PSS）16例，原發(fā)性干燥綜合征（SS）18例，強(qiáng)直性脊柱炎（AS）6例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）17例，骨關(guān)節(jié)炎（OA）4例，混合性結(jié)締組織?。∕CTD）3例，痛風(fēng)10例。門(mén)診健康體檢對(duì)照組82例，均未作任何治療，無(wú)感染性疾病、腫瘤、自身免疫性疾病等。其中男性36例，女性46例，年齡26～63歲。

2 方法

2.1 抗 CCP抗體的檢測(cè) ELISA法檢測(cè) IgG型 CCP抗體，試劑采用上海榮盛生物有限公司提供的試劑盒，操作過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)，參考質(zhì)控及陰陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行檢測(cè)?？?CCP抗體濃度＞12RU／mL為陽(yáng)性，抗 CCP抗體濃度 ＜12RU／mL為陰性。

2.2 AKA檢測(cè) 采用間接免疫熒光法檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果在熒光顯微鏡下觀察，見(jiàn)到角質(zhì)層出現(xiàn)明顯的多條板層狀（連續(xù)）或者點(diǎn)片狀（不連續(xù)）的熒光即為陽(yáng)性結(jié)果。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

收集的數(shù)據(jù)采用 SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 抗CCP抗體和AKA在RA組、非RA組和健康對(duì)照檢測(cè)結(jié)果

在85例RA患者血清中，抗CCP抗體陽(yáng)性64例，AKA陽(yáng)性76例；74非RA患者血清中，抗CCP抗體陽(yáng)性5例，AKA陽(yáng)性11例。二者聯(lián)合檢測(cè)以抗CCP抗體或 AKA任何一項(xiàng)陽(yáng)性均判斷為陽(yáng)性，見(jiàn)表1。

表1 抗 CCP抗體和 AKA各組組檢測(cè)結(jié)果

2 抗CCP抗體、AKA對(duì)RA診斷的靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值

抗 CCP抗體的靈敏度與 AKA差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），特異性與AKA差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），抗CCP抗體或AKA與二者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），特異性方面抗CCP抗體與 AKA二者聯(lián)合檢測(cè)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值抗CCP抗體較高，陰性預(yù)測(cè)值以二者聯(lián)合檢測(cè)較好，Youden index比單獨(dú)檢測(cè)抗 CCP抗體或 AKA高。見(jiàn)表2。

3 抗CCP抗體和AKA在RA組中的檢測(cè)

抗CCP抗體和 AKA在檢測(cè) RA組中抗 CCP抗體和AKA同時(shí)陽(yáng)性檢出 58例，陽(yáng)性率為 68.2%（58／85）；二者均陰性3例，抗CCP抗體或AKA陽(yáng)性共檢出82例，陽(yáng)性率為96.5%（82／85）?？笴CP抗體或 AKA任何一項(xiàng)陽(yáng)性比二者同時(shí)陽(yáng)性檢出率大大提高。見(jiàn)表3。

表3 抗 CCP抗體和 AKA在RA組中的關(guān)系

討 論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是最常見(jiàn)的慢性炎性關(guān)節(jié)疾病，在世界范圍內(nèi)發(fā)病率為0.5%到1%。RA滑膜關(guān)節(jié)炎癥，到發(fā)病中晚期將發(fā)生如骨關(guān)節(jié)不可逆損壞等嚴(yán)重后果，因此早期診斷早期治療是至關(guān)重要的［5］。然而在疾病的早期臨床癥狀不明顯，臨床醫(yī)生在診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎時(shí)，主要要依靠臨床表現(xiàn)、X線和檢測(cè)RF［6］。在1987年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)制定的RA分類標(biāo)準(zhǔn)中，RF是唯一的血清學(xué)指標(biāo)。雖然 RF的靈敏度高，但其特異性卻相對(duì)較低，不但在結(jié)締組織病中表現(xiàn)陽(yáng)性，在一些非結(jié)締組織病，如感染、腫瘤等疾病，甚至3%～5%正常人中如健康老年人都可以檢測(cè)出RF。當(dāng)臨床癥狀不典型時(shí)，如60歲以后起病的 RA，其發(fā)病不典型，大關(guān)節(jié)發(fā)病多，肩、下肢關(guān)節(jié)者僅有關(guān)節(jié)痛而無(wú)關(guān)節(jié)炎，往往 RF陰性［7］，檢測(cè) RF很難為早期診斷提供可靠的依據(jù)。對(duì)RA進(jìn)行早期診斷可以減少致殘率，提高治愈率?？弓h(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種 RA診斷指標(biāo)，國(guó)外有研究顯示，該抗體可早期診斷 RA，甚至可在患者臨床癥狀出現(xiàn)前數(shù)年檢出RA，其靈敏度和特異性均高于傳統(tǒng)診斷指標(biāo)RF。近年來(lái)陸續(xù)發(fā)現(xiàn)抗核周因子抗體、抗角蛋白抗體、抗 Sa抗體、抗 RA33抗體等，可在 RA發(fā)病早期發(fā)現(xiàn)，對(duì)RA具有較好的靈敏度和很高的特異性，因此對(duì)這些抗體的檢測(cè)具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。有文獻(xiàn)報(bào)道，除抗RA33抗體外，這些抗體具有相關(guān)性，它們有共同的抗原決定簇即瓜氨酸，并提出將 APF、AKA、抗 Sa抗體、抗CCP抗體定義為環(huán)瓜氨酸相關(guān)的自身免疫系統(tǒng)。目前，可以人工合成高純度的 CCP，是較理想的抗原底物；且較之 APF、AKA須采用間接免疫熒光法檢測(cè)，抗 CCP抗體應(yīng)用ELISA方法，結(jié)果判定更易標(biāo)準(zhǔn)化，易于臨床推廣和應(yīng)用。2010年 ACR和EULAR重新修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)中將抗CCP抗體納入血清學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］。

AKA是在 RF患者血清中發(fā)現(xiàn)的一種能與鼠食管中上段角質(zhì)層反應(yīng)的IgG抗體。在疾病早期即可檢出，且抗體與疾病嚴(yán)重程度和活動(dòng)性有一定的相關(guān)性［9］，對(duì) RA具有高度特異性。本研究發(fā)現(xiàn) AKA靈敏度相對(duì)較高，單項(xiàng)檢測(cè)其靈敏度高于抗 CCP抗體，達(dá) 85.1%。AKA抗體靶抗原存在于人頰黏膜角質(zhì)透明顆粒中，1995年有學(xué)者從人頰黏膜細(xì)胞中提取該抗原，AKA與角蛋白絲聚集原或 Filag-grin前體的單克隆抗體可顯現(xiàn)相同的條帶［10］，故作為 RA診斷指標(biāo)之一，可用于區(qū)分 RA及RF陽(yáng)性骨關(guān)節(jié)炎癥。AKA是在 RA患者血清中發(fā)現(xiàn)的一種能與鼠食管中上段角質(zhì)層反應(yīng)的IgG抗體。AKA具有很高的特異性，在疾病早期即可檢出，且抗體與疾病嚴(yán)重程度和活動(dòng)性有一定的相關(guān)性。AKA與RA病情嚴(yán)重性和功能障礙有關(guān)，其檢測(cè) RA的敏感性 40%～70%［11］。在本項(xiàng)研究中 AKA的靈敏度為 89.4%，特異性為85.1%，特異性較抗CCP低，與研究報(bào)道相符。但是由于AKA敏感度較高，故一般可以作為臨床上早期診斷RA的輔助指標(biāo)。

本組檢測(cè)中，抗CCP抗體靈敏度75.3%，特異性93.2%，與Guo等［12］報(bào)道的對(duì)RA的靈敏度68%，特異性98%結(jié)果較接近。RA組抗CCP抗體陽(yáng)性預(yù)測(cè)值明顯高于非 RA組，在非 RA組中，有 5例抗 CCP抗體檢測(cè)陽(yáng)性，其中 3例是 SLE，1例是MCTD，1例是 PSS，抗 CCP抗體和 RF有 3例同時(shí)陽(yáng)性?？?CCP抗體對(duì)RA診斷的靈敏度、特異性和AKA對(duì) RA診斷的靈敏度、特異性分別是75.3%、93.2%和89.4%、85.1%，抗 CCP抗體的靈敏度較AKA低，有顯著性差異（P＜0.05），但特異性高于AKA，無(wú)顯著性差異（P＞0.05），Palosuo等［13］在一組300例正常老年人群中，僅 1例抗 CCP抗體陽(yáng)性。這說(shuō)明抗CCP抗體的特異性很高。在 RA組中抗CCP抗體和RF同時(shí)陽(yáng)性 58例，陽(yáng)性率僅為68.2%；抗CCP抗體或AKA陽(yáng)性82例，陽(yáng)性率為96.5%，Youden index比單獨(dú)檢測(cè)抗CCP抗體或AKA高，因此聯(lián)合檢測(cè)抗 CCP抗體和AKA，任何一項(xiàng)陽(yáng)性可顯著提高對(duì) RA的靈敏度，較單獨(dú)檢測(cè)抗CCP抗體或AKA一項(xiàng)對(duì) RA的診斷大為提高。另外抗 CCP抗體在 RA疾病的早期診斷、區(qū)分損傷性與非損傷性 RA疾病、在疾病的預(yù)后評(píng)估等方面都有非常重要的意義，在 RA早期患者的檢測(cè)中有較好的表達(dá)，在活動(dòng)性病變中其含量可迅速升高。聯(lián)合檢測(cè)抗 CCP抗體與 AKA更有利于 RA的早期診斷。

［1］謝冰，鐘樹(shù)奇.抗CCP抗體診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的最佳臨界值.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，27（4）：101-103.

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［9］許軍華，劉樹(shù)業(yè).血清抗CCP抗體、抗MCV抗體與RF聯(lián)合檢測(cè)診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床價(jià)值.山東醫(yī)藥，2013，53（22）：38-41.

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（潘子昂編輯）

Anti-CCP and Anti-AKA Application Value in the Diagnosis of Rheumatoid Arthritis

YAO Chun-hong，DENG Jian-ping
（Clinical Laboratory of Huangshi Aikang Hospital，Huangshi 435000，China）

ObjectiveTo compare the diagnostic value of anti-CCP and anti-AKA in rheumatoid arthritis and to explore the early diagnosis of rheumatoid arthritis（RA）.MethodsThe anti-CCP（ELISA）and anti-AKA（indirect immunofluorescence assay）were used in 85 patients with RA and 74 patients with non-RA.ResultsThe sensitivity and specificity of anti-CCP for the diagnosis of RA were 75.3%and 93.2%.The sensitivity and specificity of anti-AKA were 89.4%and 85.1%.There was no significant difference on the sensitivity of between anti-AKA and anti-CCP（P＞0.05）.On the specificity of anti-AKA，the difference was significant（P＜0.05）.The difference on sensitivity of anti-CCP and antAKA combined detection was statistically significant（P＜0.05）.The specificity of anti-CCP and anti-AKA combined was statistically significant（P＜0.05）.Anti-CCP antibodies were higher for positive predictive value，combined detection of both offered high negative predictive value.Youden index on combined detection of anti-CCP or anti-AKA was higher than tested.Anti-CCP and anti-AKA were detected in 58 cases，anti-CCP or AKA positive in 85 cases.The positive rate of anti-CCP or anti-AKA（96.5%）was significantly higher than that（68.2%）.ConclusionAnti-CCP and anti-AKA have higer sensitivity and specificity for diagnosis of RA.Combined detection of anti-CCP and anti-AKA can be used as good diagnostic indicators for early RA patients and RF negative RA patients.

Anti-CCP； AKA； Rheumatoid arthritis

10.11748／bjmy.issn.1006-1703.2016.12.027

2016-09-21；

2016-10-16