阿得力江·吾斯曼，米克熱木·沙衣布扎提，阿依姑麗·買買提明，賽福丁·阿不拉

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052)

列當(dāng)多糖對雞新城疫病毒在雞成纖維細(xì)胞中增殖的抑制作用

阿得力江·吾斯曼，米克熱木·沙衣布扎提，阿依姑麗·買買提明，賽福丁·阿不拉*

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052)

為研究列當(dāng)多糖抗新城疫病毒(NDV)活性，用水提醇沉法提取列當(dāng)總多糖及4種分級多糖，并通過苯酚硫酸法及紅外光譜對列當(dāng)多糖進行檢測。通過MTT法測定各級多糖對雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)的安全濃度。以3種加藥方式(先加多糖后接種病毒、先接種病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加藥，檢測列當(dāng)多糖對新城疫病毒的阻斷作用、抑制作用及直接殺滅作用。結(jié)果表明，列當(dāng)總多糖及4種分級多糖均具有抗NDV活性，其中對NDV的抑制作用及阻斷作用強于對NDV的直接殺滅作用。50%、80%梯度醇沉的列當(dāng)多糖(OSP50、OSP80)及總多糖(OSPt)，阻斷作用下的病毒抑制率分別為19.50%、33.10%和22.30%，抑制作用下的病毒抑制率分別為19.00%、21.90%和22.60%，殺滅作用下對NDV的抑制率分別為，14.70%、17.50%和13.30%，其余各組多糖阻斷作用、抑制作用及殺滅作用下的病毒抑制率均低于上述3組多糖。說明OSP50、OSP80及OSPt的抗NDV活性較好，可以作為進一步研究的材料。

列當(dāng)；多糖；雞胚成纖維細(xì)胞；新城疫病毒

雞新城疫(Newcastle disease,ND)是對我國養(yǎng)雞業(yè)危害嚴(yán)重、經(jīng)濟損失巨大的禽病之一，至今對于此病的治療仍無有效的藥物。研究顯示植物多糖具有無毒、無害、無殘留、無抗藥性等特點，能提高機體免疫功能，同時具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)及增殖、抗腫瘤等多種藥理作用[1]。列當(dāng)(OrobanchecoerulescensSteph.)是新疆及周邊地區(qū)常見的一種植物，也是一種傳統(tǒng)藥物。中藥學(xué)中列當(dāng)全草入藥，具有補腎、強筋之功效，用于治療腎虛、腰膝冷痛、遺精等癥狀[2]。維吾爾醫(yī)學(xué)中列當(dāng)通常用于治療腹瀉、陽痿、消化不良等疾病[3]。研究表明，列當(dāng)含多糖、苯乙醇苷類、木脂素類、甾醇類及環(huán)烯醚萜類等多種化學(xué)成分[4-5]。劉東春等進行列當(dāng)水提物藥效學(xué)研究，結(jié)果顯示列當(dāng)能使小鼠巨噬細(xì)胞增殖，從而增加網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)巨噬細(xì)胞的吞噬廓清能力和速度，起到增強免疫作用[6]。目前關(guān)于列當(dāng)抗病毒作用的研究鮮有報道，為考察列當(dāng)多糖體外抗病毒效果，本試驗用MTT法檢測列當(dāng)多糖對新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)感染雞胚成纖維細(xì)胞(chicken embryo fibroblast，CEF)的影響，旨在篩選出列當(dāng)抗病毒效果較好的活性部位。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 新城疫病毒制備 雞新城疫中等毒力活疫苗(Ⅰ系)，吉林正業(yè)生物制品股份有限公司產(chǎn)品(批號2013002)；9日齡SPF雞胚，北京梅里亞維通實驗動物技術(shù)有限公司；接種48 h后收集尿囊液，離心得病毒液，測定血凝效價，病毒傳3代后用Reed-Muench法[7]測定病毒對CEF的半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量(TCID50)為10-7，臨用前用細(xì)胞維持液稀釋成10-5(100 TCID50)

1.1.2 主要試劑 Hank′s液，HyClone公司產(chǎn)品；雙抗，美國Genview公司產(chǎn)品；DMEM培養(yǎng)液，Hy Clone公司產(chǎn)品；小牛血清，江蘇恩莫阿賽生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；四甲基偶氮唑藍(lán)MTT溶液，Biosharp公司產(chǎn)品；胰蛋白酶，北京索萊寶生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 CO2培養(yǎng)箱，美國Eppendorf公司；TE2000-U型倒置顯微鏡，Nikon公司產(chǎn)品；SHE-3000型酶標(biāo)分析儀，北京賽爾福知心科技有限公司；MM-2型微量振蕩器，金壇市醫(yī)療儀器廠；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；G154TW高壓滅菌鍋，上海富士工器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 列當(dāng)多糖的提取 列當(dāng)，粉碎，過60目篩，用95%無水乙醇回流3次進行脫脂，脫脂后的列當(dāng)在80 ℃、1∶15料水比下水煮3次，取上清液減壓濃縮，上清液經(jīng)Sevage法除蛋白后，加無水乙醇分別提取(30%、50%、70%、80%分步沉淀多糖及80%一步沉淀多糖即(OSP30、OSP50、OSP70、OSP80及OSPt)，取沉淀用90%的乙醇、無水乙醇及丙酮溶液反復(fù)洗滌數(shù)次得干燥的粗多糖。

1.2.2 列當(dāng)多糖的制備 采用苯酚-硫酸法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并測定(OSP30、OSP50、OSP70、OSP80和OSPt)列當(dāng)多糖的含量[8]。通過公式：多糖含量(%)=C×D÷W×100%(C為所測OSP的濃度，D為稀釋因素，W為樣品量)計算多糖含量。再將OSP30、OSP50、OSP70、OSP80和OSPt，用PBS配制、高壓、0.22 μm微孔濾膜過濾除菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 列當(dāng)多糖的紅外光譜檢測 列當(dāng)多糖樣品用KBr壓片法制備，利用紅外光譜法進行掃描觀察。

1.2.4 列當(dāng)多糖安全濃度測定 將制備好的列當(dāng)多糖分別自5 mg/mL濃度用細(xì)胞維持液倍比稀釋成11個濃度梯度。待細(xì)胞長成單層后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，用Hank′s液洗2次，加藥，每孔100 μL，每個濃度重復(fù)4孔，同時以細(xì)胞維持液為對照孔。培養(yǎng)72 h后，按MTT法用酶聯(lián)免疫檢測儀于490 nm波長處測定OD490nm值。選擇OD490nm值不小于細(xì)胞對照組的最大濃度作為該多糖的最大安全濃度。

假定理想狀態(tài)下，溶洞范圍很大，溶洞頂、底面均為水平。片石黏土組成的圓臺外表面將呈斜面，因黏土在鉆錘沖砸時基本成流塑狀態(tài)，未發(fā)生固結(jié)，其粘聚力可不考慮，圓臺外斜面斜率與片石內(nèi)摩擦角相關(guān)，約為30°，可依此進行估算。圓臺頂部直徑跟錘擊能量相關(guān)，根據(jù)過往施工經(jīng)驗，頂部直徑約為樁孔直徑的3～5倍，本工程施工最終階段采用高錘重?fù)?，頂部直徑?倍樁孔直徑考慮。由此得出片石黏土拋填量的估算半徑，r為圓臺頂半徑，h為圓臺高度。此為溶洞頂?shù)谆舅健⑷芮环秶艽蟮那闆r下的估算值，其余類型溶洞的填充量計算可以參考此式。

1.2.5 列當(dāng)多糖抗NDV感染細(xì)胞作用的影響 將各多糖用細(xì)胞維持液分別從安全濃度向下依次倍比稀釋5個濃度。待CEF長成單層后，棄掉孔內(nèi)液體，用Hank′s液洗3次，以3種方式加入各濃度多糖和病毒即:先加多糖后接種病毒:每孔加入不同濃度的多糖100 μL，培養(yǎng)4 h后棄掉孔內(nèi)液體，加入病毒液100 μL。先接種病毒后加多糖:每孔加入病毒液100 μL，培養(yǎng)2 h后棄掉孔內(nèi)液體，加入多糖100 μL。多糖和病毒感作后加入:將病毒液分別加入到各濃度的多糖溶液中37 ℃作用4 h，再加入到培養(yǎng)板中。3種加藥方式的細(xì)胞均培養(yǎng)72 h后，按MTT法測定OD490nm值，并按以下公式計算病毒抑制率[9]：病毒抑制率=(OD(多糖+病毒)-OD病毒對照)/(OD細(xì)胞對照-OD病毒對照)×100%。

1.2.6 統(tǒng)計分析 計算4孔平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)以Means±SE表示，用SPSS21.0軟件進行One-way ANONA 方差分析，方差顯著性用Duncan′s多重比較檢驗，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及列當(dāng)多糖含量測定

以吸光度(OD)為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度(C)為橫坐標(biāo)進行回歸，得回歸方程OD=2.4 C-0.0013，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 5。通過計算的列當(dāng)多糖OSP30、OSP50、OSP70、OSP80、OSPt的含量分別為24.95%、37.01%、34.61%、24.08%、30.36%，粗多糖得率分別為6.11%、1.73%、1.94%、1.63%、12.14%(圖1)。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 列當(dāng)多糖的紅外光譜分析

列當(dāng)多糖具有多糖的特征吸收峰，OSP30、OSP50、OSP70、OSP80、OSPt均在3 200～3 600 cm-1之間有強吸收峰，為多糖O-H基的伸縮振動引起，在2 800～3 000 cm-1處的中強吸收峰，為(-CH2-)C-H的伸縮振動，以上2個區(qū)域的吸收峰是糖類的特征峰。1 600～1 872 cm-1之間的強吸收峰為-COOH的C=O非對稱伸縮振動吸收峰。1 300～1 465 cm-1之間的吸收峰為羥基吸收峰，C-O伸縮振動,C-H變角振動，1 000～1 100 cm-1之間的吸收峰為處是C-O的伸縮振動,說明多糖含有吡喃環(huán)。根據(jù)以上特征峰，可判定提取物是多糖類化合物(圖2)。

2.3 列當(dāng)多糖對CEF細(xì)胞最大安全濃度的測定

各級多糖從初始濃度5 000 μg/mL起，OSP30、OSPt在1 250 μg/mL～5 000 μg/mL，OSP50、OSP70、OSP80在2 500 μg/mL～5 000 μg/mL時的OD490值均顯著小于細(xì)胞對照組(P<0.05)。說明該濃度時多糖對CEF有毒性作用。A490值越小，表明多糖對CEF的毒性越大。OSP30、OSPt在625 μg/mL，OSP50、OSP70和OSPt在1250 μg/mL時的A490值不顯著小于細(xì)胞對照組(P>0.05)。因此將該濃度定為他們的最大安全濃度，為了便于同水平比較，各多糖的安全濃度統(tǒng)一定為625 μg/mL。安全濃度以下，OSP30、OSP50在78.125 μg/mL，OSP70、OSP80在19.53 μg/mL～156.25 μg/mL，OSPt在78.125 μg/mL～156.25 μg/mL時的細(xì)胞OD490值顯著高于細(xì)胞對照組(P<0.05)，表明此濃度下多糖能顯著促進CEF的生長(表1)。

圖2 列當(dāng)多糖的紅外圖譜

表1 在4.883 μg/mL～5 000 μg/mL范圍內(nèi)各多糖組細(xì)胞的OD490值

Table 1 OD490 value of every polysaccharide groups within 4.883 μg/mL-5 000 μg/mL

濃度/(μg·mL-1)ConcentrantionOSP30OSP50OSP70OSP80OSPt50000.332±0.017d0.345±0.023d0.335±0.022e0.341±0.021g0.303±0.005e25000.409±0.014c0.417±0.022c0.404±0.019d0.404±0.017f0.408±0.016d12500.416±0.015c0.457±0.023b0.460±0.020c0.458±0.028de0.418±0.014d6250.454±0.021b0.464±0.019ab0.465±0.021bc0.469±0.013cde0.467±0.021bc312.50.465±0.023b0.476±0.013ab0.474±0.019bc0.475±0.021bcde0.480±0.010b156.250.469±0.013b0.479±0.028ab0.492±0.022ab0.510±0.015ab0.505±0.015a78.1250.500±0.015a0.495±0.022a0.510±0.016a0.514±0.017a0.504±0.014a39.060.467±0.006b0.479±0.005ab0.516±0.009a0.505±0.018abc0.481±0.013b19.530.461±0.019b0.474±0.013ab0.493±0.015ab0.491±0.028abcd0.475±0.007bc9.7650.456±0.021b0.469±0.010ab0.468±0.025bc0.459±0.033de0.463±0.015bc4.8830.455±0.016b0.453±0.018b0.459±0.011c0.455±0.027de0.460±0.016bc細(xì)胞對照Cellcontrol0.456±0.025b0.453±0.019b0.460±0.025c0.453±0.031e0.460±0.016bc

注：同列數(shù)據(jù)標(biāo)注不同字母者表示差異顯著(P<0.05)。

Note:Column data marked with different superscripts differ significantly (P<0.05).

2.4.1 先加多糖后接種病毒時NDV感染CEF的能力 OSP30、OSP50在78.125 μg/mL～312.5 μg/mL，OSP70在312.5 μg/mL，OSP80在39.06 μg/mL～312.5 μg/mL、OSPt在156.25 μg/mL～312.5 μg/mL時的OD490值顯著大于病毒對照組(P<0.05)，說明該濃度時他們能阻斷NDV感染CEF。各級多糖中OSP30、OSP70濃度為312.5 μg/mL時，OSP50、OSP80和OSPt濃度為156.25 μg/mL時的阻斷作用最強。說明列當(dāng)多糖濃度在156.25 μg/mL～312.5 μg/mL之間阻斷NDV感染CEF的能力最強(表2)。

列當(dāng)多糖對NDV的抑制率，各組多糖對NDV均有抑制作用，各組間抑制率有顯著差異(P<0.05)，其中OSP80組最高，達33.10%。其次為OSPt、OSP50、OSP30、OSP70，抑制率分別為22.30%、19.50%、15.10%、10.80%(圖3)。

2.4.2 先接種病毒后加多糖時NDV感染CEF的能力 OSP30、OSP80在78.125 μg/mL～625 μg/mL，OSP50、OSP70在78.125 μg/mL～312.5 μg/mL，OSPt在39.06 μg/mL～625 μg/mL時的OD490 nm值顯著大于病毒對照組(P<0.05)，說明能抑制NDV感染CEF。各級多糖中OSP30、OSP50、OSP80、OSPt濃度為312.5 μg/mL、OSP70濃度為156.25 μg/mL時的OD490 nm值最大，此濃度下的抑制力最強(表3)。

表2 先加多糖時各組細(xì)胞的OD490 nm值

Table 2 The cellular OD490 nm values of every groups in pre-adding OSP

濃度/(μg·mL-1)ConcentrantionOSP30OSP50OSP70OSP80OSPt6250.136±0.003cd0.136±0.004cd0.128±0.006c0.136±0.006cd0.130±0.005c312.50.166±0.007b0.141±0.005c0.165±0.014b0.194±0.009b0.179±0.012b156.250.144±0.004c0.189±0.012b0.138±0.005c0.199±0.011b0.188±0.007b78.1250.143±0.004c0.143±0.007c0.133±0.004c0.150±0.008c0.145±0.003c39.060.135±0.005cd0.136±0.006cd0.130±0.003c0.146±0.007c0.129±0.005c病毒對照Viruscontrol0.126±0.004d0.126±0.004d0.126±0.004c0.126±0.004d0.129±0.005c細(xì)胞對照Cellcontrol0.244±0.009a0.244±0.009a0.244±0.009a0.244±0.009a0.242±0.011a

注：同列數(shù)據(jù)標(biāo)注不同字母者表示差異顯著(P<0.05。

Note:Column data marked with different superscripts differ significantly (P<0.05).

不同字母表示差異顯著(P<0.05

Different superscripts differ significantly (P<0.05)

圖3 先加多糖后接種病毒時各組的病毒抑制率

Fig.3 The virus inhibitory rate of every group in pre-adding polysaccharides

列當(dāng)多糖對NDV的抑制率，各組多糖對NDV均有抑制作用，各組間抑制率無顯著性差異，其中OSPt組最高，達22.60%。其次為OSP80、OSP50、OSP30、OSP70，分別為21.90%、19.00%、18.90%和18.30%(圖4)。

不同字母表示差異顯著(P<0.05

Different superscripts differ significantly (P<0.05)

圖4 先接種病毒后加多糖時各組的病毒抑制率

Fig.4 The virus inhibitory rate in post-adding polysaccharides

表3 后加多糖時各組細(xì)胞的OD490 nm值

Table 3 The cellular OD490 nm values of every groups in post-adding OSP

濃度/(μg·mL-1)ConcentrantionOSP30OSP50OSP70OSP80OSPt6250.166±0.010c0.164±0.012cd0.163±0.006cd0.176±0.006bc0.173±0.011c312.50.192±0.008b0.189±0.010b0.174±0.012c0.189±0.010b0.189±0.010b156.250.187±0.014b0.181±0.009b0.193±0.003b0.177±0.008bc0.188±0.005b78.1250.164±0.011c0.176±0.011bc0.173±0.008c0.173±0.005c0.177±0.008bc39.060.152±0.018d0.155±0.007d0.158±0.008d0.165±0.008cd0.164±0.013c病毒對照Viruscontrol0.153±0.014d0.153±0.014d0.153±0.014d0.153±0.014d0.149±0.008d細(xì)胞對照Cellcontrol0.258±0.012a0.258±0.012a0.258±0.012a0.258±0.012a0.278±0.011a

注：同列數(shù)據(jù)標(biāo)注不同字母者表示差異顯著(P<0.05。

Note:Column data marked with different superscripts differ significantly (P<0.05).

2.4.3 多糖和病毒混合作用后加入時NDV感染CEF的能力 OSP30的OD490 nm值均不顯著小于細(xì)胞對照組(P>0.05)，說明OSP30對NDV基本上無殺滅作用。OSP50、OSPt在156.25 μg/mL～312.5 μg/mL，OSP70在39.06 μg/mL～312.5 μg/mL，OSP80在78.125 μg/mL～312.5 μg/mL時的OD490 nm值顯著大于病毒對照組(P<0.05)，說明該濃度時的多糖對NDV有殺滅作用。各級多糖中OSP30、OSP70濃度為156.25 μg/mL時，OSP50、OSP80、OSPt在312.5 μg/mL時的OD490 nm值最大，說明此濃度下的殺滅作用最強(表4)。列當(dāng)多糖對NDV的抑制率，其中OSP80組最高，為17.50%。其次為OSP50、OSPt、OSP70和OSP30，分別為14.70%、13.30%、11.00%和7.10%(圖5)。

表4 多糖和病毒混合作用時細(xì)胞的OD490 nm值

Table 4 The cellular OD490 nm values of every groups in mixed adding OSP with NDV

濃度/(μg·mL-1)ConcentrantionOSP30OSP50OSP70OSP80OSPt6250.157±0.012b0.165±0.014bc0.159±0.008c0.165±0.006bc0.162±0.007c312.50.158±0.009b0.175±0.011b0.164±0.008b0.181±0.010b0.185±0.008b156.250.168±0.009b0.173±0.007b0.173±0.014b0.178±0.014b0.184±0.011b78.1250.163±0.009b0.171±0.013bc0.170±0.013b0.174±0.016b0.177±0.019bc39.060.161±0.007b0.168±0.017bc0.166±0.011b0.170±0.012bc0.164±0.014bc病毒對照Viruscontrol0.153±0.013b0.153±0.013c0.153±0.013c0.153±0.013c0.159±0.018c細(xì)胞對照Cellcontrol0.271±0.015a0.271±0.015a0.271±0.015a0.271±0.015a0.275±0.020a

注：同列數(shù)據(jù)標(biāo)注不同字母者差異顯著(P<0.05。

Note:Column data marked with different superscripts differ significantly (P<0.05).

不同字母表示差異顯著(P<0.05

Different superscripts differ significantly (P<0.05)

圖5 多糖和病毒混合作用后加入時各組的病毒抑制率

Fig.5 The virus inhibitory rate in mixed adding polysaccharides with NDV

3 討論

列當(dāng)具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、鎮(zhèn)靜及抗炎等多種藥理作用[10]，而其抗病毒作用未見報道。MTT比色法常用于檢測細(xì)胞增值及細(xì)胞毒性，其OD值能夠直接反映出被檢測細(xì)胞的活性或增值情況，在一定范圍內(nèi)OD值同細(xì)胞活性呈正相關(guān)[11]。本試采用水提醇沉法提取OSP30、OSP50、OSP70、OSP80分步多糖及OSPt一步多糖，并用苯酚硫酸法檢測糖含量，用紅外光譜對多糖進行分析?？紤]到多糖對細(xì)胞生長的影響及毒性作用，首先對列當(dāng)多糖進行安全濃度的測定，在安全濃度及以下4個濃度，用3種加藥方式，檢測了列當(dāng)多糖抗NDV的效果。通過計算病毒抑制率得知了各級多糖抗病毒活性的大小。王君敏等[9]檢測枸杞多糖對新城疫病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞能力的影響。結(jié)果表明枸杞多糖先加多糖后接種病毒及多糖和病毒混合作用時的病毒抑制率在15%～20%之間，而先接種病毒后加多糖的病毒抑制率則低于10%。蔣月等[12]通過三種給藥方式檢測樺褐孔菌多糖的抗NDV效果，研究顯示，樺褐孔菌多糖對NDV有一定的預(yù)防及治療作用，其中通過多糖和病毒混合時的抗病毒活性最強。為檢測列當(dāng)多糖能否通過吸附或進入細(xì)胞，起到抗病毒作用，用先加多糖后上病毒的方式。結(jié)果證明OSP30、OSP50、OSP70、OSP80及OSPt均對NDV具有較好的預(yù)防作用，其中OSP80及OSPt的病毒抑制率較高，分別為33.10%、22.30%。為檢測多糖能否對以進入細(xì)胞的NDV有抑制合成或釋放毒素的作用，通常用先加病毒后上多糖的方式。結(jié)果證明五組多糖均對NDV具有較好的治療作用，其中OSPt的病毒抑制率最高，為22.60%。為檢測多糖能否減弱或殺滅病毒活性，通常用多糖和病毒混合一段時間后再作用于細(xì)胞的方式。結(jié)果證明五組多糖均對NDV具一定的殺滅作用，但殺滅作用都不強，其中OSP80的病毒抑制率最高，為17.50%。

綜上所述，列當(dāng)多糖對NDV的抑制作用及阻斷作用強于對NDV的直接殺滅作用，其中OSP50、OSP80及OSPt的抗NDV活性較好，可以作為進一步研究的材料。

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Study on Antiviral Effect of Polysaccharides fromOrobanchecoerulescenson NDVinVitro

ADELIJIANG-Wusiman,MUKEREMU-Shayibuzhati,AYIGULI-maimaitiming,SAIFUDING-Abula

(CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi，Xinjiang，830052,China)

To research on polysaccharides fromOrobanchecoerulescensagainst Newcastle disease virus (NDV),total polysaccharide and four different solvent extraction ofOrobanchecoerulescenswere extracted by the methods of hot water extraction and ethanol precipition in this study.The content of polysaccharide was measured by phenol-sulfuric acid method and infrared spectroscopy method.The safe concentration and growth of chick embryo fibroblasts (CEF) were assayed by MTT method in order to facilitate the comparison under the same level,the safe concentration was united as 625 μg/mL.Under the safety range of concentration, the block-virus activity,anti-virus activity and virus-killing activity of polysaccharides were detected through the way of pre-adding polysaccharides,post-adding polysaccharides and adding polysaccharides with NDV.Results showed that the direct inactivation and propagation inhibition activity of total polysaccharide and four different solvent extraction were stronger than anti-absorption function.Block-virus activity rate of 50%,80% gradient alcohol precipitation of polysaccharides fromOrobanchecoerulescens(OSP50,OSP80) and total polysaccharide (OSPt)were 19.50%,33.10%,22.30%,anti-virus inhibition rate were 19.00%,21.90% and 22.60%,virus-killing inhibition rate were 14.70%,17.50%,13.30%.The activity rate of this three polysaccharides were higher than that of other polysaccharides fromOrobanchecoerulescens.In summary,50%,80% gradient alcohol precipitation and total polysaccharide in this five polysaccharides possessed better activity and would be as the materials for further research.

Orobanchecoerulescens；polysaccharide；chick embryo fibroblast；Newcastle disease virus

2016-05-19

國家自然科學(xué)基金項目(31360625)

阿得力江·吾斯曼(1990-)，男(維吾爾族)，碩士研究生，主要從事中藥藥理學(xué)研究。*通訊作者

S853.73

A

1007-5038(2016)12-0060-06