祁高展，高丹丹

（西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅蘭州 730030）

洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病的抑菌活性試驗(yàn)

祁高展，高丹丹*

（西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅蘭州 730030）

以新鮮洋蔥鱗莖為原料，采用水勻漿法制備粗提物，通過體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)蘋果輪紋病的抑菌作用。結(jié)果表明，不同質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)均具有抑制活性，濃度越高，抑制作用越強(qiáng)；抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的最低有效質(zhì)量濃度為3.125 mg·mL-1，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到50 g· mL-1時(shí)，其對(duì)孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的抑制率分別達(dá)到99.0%和97.5%。

洋蔥鱗莖；粗提物；蘋果輪紋?。灰志饔?/p>

蘋果輪紋病是蘋果重要病害之一，大面積發(fā)生時(shí)，果實(shí)爛果率達(dá)到30%～50%［1］。目前，控制蘋果輪紋病主要采用化學(xué)藥劑處理，但是化學(xué)藥劑處理會(huì)造成蘋果中藥品殘留超標(biāo)，對(duì)人體產(chǎn)生危害，不符合無(wú)公害產(chǎn)品生產(chǎn)要求［2-12］。因此，就需要一種簡(jiǎn)單、安全的方法來(lái)防治蘋果輪紋病。

1 材料與方法

1.1 材料

供試洋蔥（Allium sativum L.）為市售新鮮白皮洋蔥，蘋果輪紋病病原物（Physalospora piricola Nose）由西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院提供，蘋果為天水產(chǎn)白娃娃品種，從當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)買。

使用的儀器設(shè)備有SW-CJ-1FDSW-CJ-2FD型無(wú)菌操作臺(tái)（蘇州江東精密儀器有限公司）；YX-280B+型手提式高壓滅菌鍋（北京維欣儀奧科技有限公司）；YP1201N型電子天平（上海精密儀器有限公司）；HY-4型搖床（廣州市科訊實(shí)驗(yàn)器材有限公司）；HV-1000Z型臺(tái)式硬度計(jì)（上海聯(lián)爾實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；MZB-85手持折光儀（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 不同質(zhì)量濃度洋蔥粗提物制備

將新鮮洋蔥去皮，準(zhǔn)確稱量20.0 g，放入研缽研磨，邊研磨邊加入200 m L無(wú)菌水，濾紙過濾，得濾清液，配制成質(zhì)量濃度為100 mg·m L-1的母液，然后將母液稀釋成0、0.391、0.781、1.560、3.130、6.250、12.500和25.000 mg·m L-1的梯度溶液，剩余母液置于4℃冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。此過程需在無(wú)菌條件下進(jìn)行操作。

1.2.2 抑菌圈直徑測(cè)定

用打孔器打取孔徑為8 mm的濾紙片，滅菌，浸泡在配制好的不同質(zhì)量濃度（0～25.000 mg· m L-1）的粗提物溶液中。浸泡60 min后將濾紙片取出瀝干，置于涂布好病菌的PDA培養(yǎng)基中央，25℃避光培養(yǎng)，3 d后量取抑菌圈直徑。每處理2個(gè)濾紙片，重復(fù)3次。

1.2.3 菌絲生長(zhǎng)抑制活性測(cè)定

含粗提物培養(yǎng)基的制備。將PDA培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌，將配制好的（0～25.0 mg·m L-1）粗提物溶液與相同體積的培養(yǎng)基混合均勻，配制成含粗提物0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25.0和50.0 mg·m L-1的培養(yǎng)基，倒于平板上備用。

平板菌落制備。將病原菌活化，加無(wú)菌水，配成濃度為104～105個(gè)·m L-1的菌懸液，用5 m L移液管吸取菌懸液于PDA平板上，25℃避光培養(yǎng)，待菌落布滿平板后使用。

抑菌活性測(cè)定。用直徑8 mm打孔器在菌落生長(zhǎng)良好的平板上打取圓形菌片，放置在含不同質(zhì)量濃度粗提物的PDA培養(yǎng)基中央，25℃避光培養(yǎng)，每皿放置1個(gè)菌片，重復(fù)3次，3 d后量取菌落擴(kuò)展直徑，并計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑制率/%=（對(duì)照皿菌落直徑-處理皿菌落直徑）/對(duì)照皿菌落直徑×100。

1.2.4 孢子萌發(fā)抑制活性測(cè)定

將病原菌培養(yǎng)產(chǎn)生孢子，配成400倍物鏡下每個(gè)視野20個(gè)孢子的菌懸液。用移液槍吸取60μL菌懸液，分別與同體積不同質(zhì)量濃度的粗提物混合均勻。將載玻片放入培養(yǎng)皿中，皿底鋪有濾紙，將打好的孔徑為15 mm的PDA培養(yǎng)基置于載玻片上，每皿放置2片。用移液槍吸取30μL混合液于培養(yǎng)基上，25℃避光培養(yǎng)24 h后，400倍物鏡下鏡檢病原菌孢子萌發(fā)情況，計(jì)算病菌孢子萌發(fā)率和萌發(fā)抑制率。

孢子萌發(fā)率/%=（孢子萌發(fā)數(shù)/總孢子數(shù)）×100；

孢子萌發(fā)抑制率/%=（對(duì)照孢子萌發(fā)數(shù)-處理孢子萌發(fā)數(shù)）/對(duì)照孢子萌發(fā)數(shù)×100。

用DPS和Excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)蘋果輪紋病菌的抑菌活性

由表1可以看出，低質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病抑制效果不明顯，隨著粗提物質(zhì)量濃度提高，抑菌圈直徑增大，兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系；當(dāng)質(zhì)量濃度大于3.125 mg·m L-1時(shí)，各處理與對(duì)照間的差異達(dá)到極顯著水平；但質(zhì)量濃度為3.125和6.25 mg·m L-1的2個(gè)處理間及3.125和1.562 5 mg·m L-1的2個(gè)處理間的差異不顯著。

表1 不同質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病的抑菌效果

2.2 對(duì)蘋果輪紋病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性

從表2可以看出，洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病菌絲生長(zhǎng)具有抑制活性，并且隨著粗提物質(zhì)量濃度的增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)。質(zhì)量濃度為6.25 mg·m L-1的處理對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率達(dá)到了51.6%，且處理與對(duì)照間的差異達(dá)到極顯著水平；質(zhì)量濃度分別為12.5、25和50 mg·m L-1的處理對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率分別達(dá)到了70.7%、87.6%和97.5%。但25和50 mg·m L-12個(gè)處理之間的差異不顯著。

表2 不同質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病菌絲生長(zhǎng)的抑制活性

2.3 對(duì)蘋果輪紋病孢子萌發(fā)的抑制活性

由表3可以看出，隨著洋蔥鱗莖粗提物質(zhì)量濃度的提高，其對(duì)蘋果輪紋病菌孢子萌發(fā)的抑制活性逐漸增強(qiáng)。當(dāng)質(zhì)量濃度大于3.125 mg·m L-1時(shí)，各處理的孢子萌發(fā)抑制率分別達(dá)到了38.0%、74.5%、96.6%、98.1%和99.0%，且各處理的孢子萌發(fā)率與對(duì)照間的差異均達(dá)到了極顯著水平，但1.562 5和3.125 mg·m L-12個(gè)處理間以及12.5、25和50 mg·m L-13個(gè)處理間的差異不顯著。

表3 不同質(zhì)量濃度洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病孢子萌發(fā)的抑制效應(yīng)

3 小結(jié)與討論

不同質(zhì)量濃度的洋蔥鱗莖粗提物對(duì)病原物的菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)均具有抑菌活性，抑菌活性與質(zhì)量濃度呈正相關(guān)關(guān)系，抑菌實(shí)驗(yàn)篩選出的最低有效抑菌濃度為3.125 mg·mL-1；當(dāng)濃度為50 mg· m L-1時(shí)，其對(duì)病原物孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的抑制率分別達(dá)到99.0%和97.5%。

利用天然植物活性物質(zhì)對(duì)真菌病害的拮抗性是果蔬采后病害無(wú)害化防治的一個(gè)重要研究方向，符合綠色無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)的理念，在這方面，相關(guān)科研人員做了大量的研究工作，但目前尚沒有成熟可靠的技術(shù)可用于生產(chǎn)實(shí)際，因此相關(guān)工作還需要進(jìn)一步的深入開展。洋蔥含有很多活性物質(zhì)，其對(duì)很多真菌具有拮抗作用，且來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉，本研究為洋蔥鱗莖粗提物用于蘋果輪紋病無(wú)害化防治技術(shù)的開發(fā)做一些基礎(chǔ)性的工作。

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（責(zé)任編輯：張才德）

S436

：A

：0528-9017（2016）12-2065-02

文獻(xiàn)著錄格式：祁高展，高丹丹.洋蔥鱗莖粗提物對(duì)蘋果輪紋病的抑菌活性試驗(yàn)［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，57（12）：2065-2067.

10.16178/j.issn.0528-9017.20161245

2016-09-18

祁高展（1981—），男，河南商丘人，講師，碩士，研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品貯藏和加工，E-mail：270995651@qq.com。

高丹丹，E-mail：109458906@qq.com。