劉 玲，陳晴清，李 華，劉潤妮，王 崢

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川芎嗪和葛根素配伍使用對腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響

劉 玲，陳晴清，李 華，劉潤妮，王 崢

目的 觀察川芎嗪和葛根素合適配伍對腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。方法 雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為6組，每組8只。假手術(shù)組、模型組給予等量生理鹽水；川芎嗪組給予川芎嗪50 mg/kg；葛根素組給予葛根素50 mg/kg；川芎嗪+葛根素組給予川芎嗪50 mg/kg，葛根素50 mg/kg；陽性對照組給予依達(dá)拉奉3 mg/kg。給藥方式均為腹腔注射，給藥時間為缺血后0 h、6 h。通過神經(jīng)功能評分Western Blot檢測缺血區(qū)腦組織凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)和組織免疫熒光標(biāo)記觀察川芎嗪和葛根素配伍對腦缺血損傷后的細(xì)胞凋亡影響情況。結(jié)果 川芎嗪+葛根素組腦缺血損傷大鼠神經(jīng)功能評分為(1.83±0.41)分，較模型組(2.67分±0.52分)明顯降低(P<0.01)。與模型組相比，川芎嗪+葛根素組促凋亡相關(guān)基因Bax蛋白表達(dá)降低，抗凋亡相關(guān)基因Bcl-2蛋白表達(dá)增加。結(jié)論 川芎嗪和葛根素配伍治療腦缺血可能是通過降低缺血腦組織促凋亡相關(guān)蛋白和增加抗凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)而達(dá)到治療效果。

腦缺血；川芎嗪；葛根素；神經(jīng)細(xì)胞凋亡；促凋亡相關(guān)基因

缺血性卒中在成人中具有高患病率且患病后死亡率、致殘率居于首位，但目前仍缺乏有效的治療手段?，F(xiàn)代藥理研究表明：川芎嗪對缺血性腦血管疾病有顯著療效。葛根素廣泛用于心腦血管疾病，具有明顯的療效。臨床上，川芎嗪與葛根素常配伍治療缺血性腦血管病具有協(xié)同作用。文獻(xiàn)報(bào)道：葛根和川芎配伍能協(xié)同改善大鼠腦缺血-灌注損傷，其機(jī)制之一是葛根素與川芎嗪配伍協(xié)同抵抗自由基損傷[1]。但迄今沒有川芎嗪和葛根素配伍對腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞凋亡影響的研究報(bào)道。因此，本研究探討川芎嗪和葛根素配伍是否能通過協(xié)同作用抑制細(xì)胞凋亡而發(fā)揮其對缺血腦組織的保護(hù)作用?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組 從揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心選購48只雄性SD大白鼠，體重280 g～300 g，清潔級，大鼠購回后按照常規(guī)給食水，白晝/黑夜交替、室溫26 ℃環(huán)境飼養(yǎng)。將48只雄性SD大白鼠隨機(jī)分為6組，每組8只。假手術(shù)組、模型組給予等量生理鹽水；川芎嗪組給予川芎嗪50 mg/kg；葛根素組給予葛根素50 mg/kg；川芎嗪+葛根素組給予川芎嗪50 mg/kg，葛根素50 mg/kg；陽性對照組給予依達(dá)拉奉3 mg/kg。給藥方式均為腹腔注射，給藥時間為缺血后0 h、6 h。

2 結(jié) 果

2.1 各組Zea-Longa神經(jīng)功能評分比較 川芎嗪+葛根素組、陽性對照組腦缺血損傷大鼠神經(jīng)功能評分較模型組明顯降低(P<0.01)。詳見表1。

組別神經(jīng)功能評分假手術(shù)組0.41±0.167模型組2.67±0.52川芎嗪組2.33±0.52葛根素組2.17±0.41川芎嗪+葛根素組1.83±0.411)陽性對照組1.17±0.631) 與模型組相比,1)P<0.01。

2.2 腦組織凋亡免疫熒光染色 Bax、Bcl-2均呈紅色熒光表達(dá)于胞漿，核呈藍(lán)色。促凋亡蛋白Bax在模型組表達(dá)較假手術(shù)組明顯增加，川芎嗪組和葛根素組則Bax蛋白表達(dá)下降，川芎嗪+葛根素組隨劑量增加熒光強(qiáng)度進(jìn)一步下降，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，優(yōu)于陽性對照組。抗凋亡蛋白Bcl-2在模型組表達(dá)低于假手術(shù)組，川芎嗪組和葛根素組熒光強(qiáng)度較模型組增加，而川芎嗪+葛根素組隨劑量增加，Bcl-2熒光強(qiáng)度進(jìn)一步增加，和陽性對照組相似。

2.3 缺血腦組織凋亡相關(guān)蛋白表達(dá) 凋亡相關(guān)蛋白Western blot結(jié)果趨勢和熒光標(biāo)記結(jié)果相同。模型組促凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)較假手術(shù)組高，川芎嗪組和葛根素組Bax蛋白表達(dá)較模型組下降，川芎嗪+葛根素組隨治療劑量增加呈下降趨勢，有一定量效關(guān)系，近似或優(yōu)于陽性對照組。詳見圖1。

注：1代表假手術(shù)組；2代表模型組；3代表葛根素組；4代表川芎嗪組；5代表川芎嗪+葛根素組；6代表陽性對照組。

3 討 論

腦缺血是老年人高發(fā)疾病，致死致殘率高。中醫(yī)藥是一個巨大傳統(tǒng)資源寶庫，中藥有效成分配伍已成為中醫(yī)藥現(xiàn)代化的新模式，協(xié)同作用可提高療效。川芎嗪有抗血小板聚集、擴(kuò)張小動脈、改善微循環(huán)和腦血流的作用。臨床常用于閉塞性血管疾病、腦血栓形成、脈管炎、冠心病、心絞痛等。葛根素具有退熱、鎮(zhèn)靜和使冠狀動脈血流量增加的作用，對垂體后葉素引起的急性心肌出血有保護(hù)作用。臨床上用于冠心病心絞痛、高血壓。但以往研究兩者配伍治療腦缺血的文獻(xiàn)報(bào)道較少。本研究結(jié)果顯示：川芎嗪和葛根素配伍能明顯降低神經(jīng)功能評分，對缺血腦組織有一定的保護(hù)作用。

川芎嗪減輕腦缺血損失是通過PI3K/Akt信號通路調(diào)節(jié)NOS磷酸化[2]或PI3K/Akt/GSK3β[3]實(shí)現(xiàn)。也有文獻(xiàn)報(bào)道：川芎嗪可通過抑制還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)增強(qiáng)抗氧化能力實(shí)現(xiàn)腦缺血損傷后的保護(hù)作用[4]。我國有學(xué)者報(bào)道川芎嗪具有抑制自由基反應(yīng)造成的脂質(zhì)過氧化而降低脂質(zhì)過氧化物(LPO)含量，增加一氧化氮(NO)含量和降低中分子物質(zhì)(MMS)總量有關(guān)[5]。

葛根素是從中藥葛根中分離的具有擴(kuò)冠作用的異黃酮類衍生物，存在于豆科植物野葛的根。具有退熱、鎮(zhèn)靜和使冠狀動脈血流量增加的作用，對垂體后葉素引起的急性心肌出血有保護(hù)作用。葛根素對過氧化物歧化酶(SOD)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、丙二醛(MDA)及PI3K/Akt、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)信號通路影響最為重要[6]。葛根素能明顯降低缺血心肌的耗氧量，保護(hù)心臟免受缺血再港灌注所致的超微結(jié)構(gòu)損傷，并發(fā)現(xiàn)其改善是通過一種重要的心肌保護(hù)蛋白PKCepsilon所介導(dǎo)[7-8]。此外，葛根素不僅改善人體的正常腦微循環(huán)，而且對微循環(huán)障礙也有明顯的改善作用，主要表現(xiàn)為局部微血管血流和運(yùn)動的幅度增加。

川芎嗪和葛根素伍用可能發(fā)揮協(xié)同作用，減少單用時的不良反應(yīng)。有文獻(xiàn)報(bào)道川芎嗪和葛根素伍用能增加SOD抗氧化酶表達(dá)，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA和NO含量，顯示了兩者伍用對腦缺血再灌注損傷的重要保護(hù)作用[9]。本研究通過探討兩者伍用調(diào)節(jié)腦缺血損傷后腦細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)來達(dá)到保護(hù)作用，進(jìn)一步豐富了川芎嗪和葛根素兩者伍用對腦缺血損傷保護(hù)機(jī)制的理解，同時提示傳統(tǒng)中藥伍用對腦缺血損傷的治療具有重要價值。

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(本文編輯郭懷印)

廣東省珠海市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015J009)

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引用信息：劉玲，陳晴清，李華，等.川芎嗪和葛根素配伍使用對腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2016，14(22)：2624-2626.

R743 R255.2

A

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1672-1349(2016)22-2624-03

2016-02-11)