[摘 要] 自疫苗產(chǎn)生以來，疫苗在疫病的防制方面發(fā)揮著舉足輕重的作用。隨著現(xiàn)代生物技術的發(fā)展，獸用疫苗的研制取得了革命性的進步。除了傳統(tǒng)的疫苗外，近幾年來利用分子生物學技術研制生產(chǎn)的新型疫苗日漸增多，受到世人的注目。本文僅對其中的核酸疫苗作一個概述。

[關鍵詞] 基因疫苗 生物學活性 免疫機理 制備 影響因素

[中圖分類號] S7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2016）06-0263-01

核酸疫苗（nucleic vaccine）又名基因疫苗（gene vaccine）或DNA疫苗（DNA vaccine）它是將一種或多種抗原編碼基因克隆到質粒上，然后直接注入到動物體內，使之表達抗原，激活免疫應答。它本身既是載體又是抗原，具有疫苗的功能，對毒株的攻擊有保護作用。核酸疫苗既具有亞單位疫苗或滅活疫苗的安全性，又具有活疫苗的免疫力全面的優(yōu)點。

1 基因免疫的生物學活性

1.1基因免疫疫苗的應答水平 非毒性蛋白的基因疫苗免疫應答水平與其表達水平成正比，而毒性蛋白的表達水平卻不能太高，否則免疫水平可能反而下降。小鼠免疫應答的水平與其年齡成負相關。

1.2 基因免疫疫苗的動力學 基因免疫產(chǎn)生抗體的動力學與蛋白抗原免疫不同，其潛伏期較長，接種后一般要2～3周才有抗體產(chǎn)生，而抗體產(chǎn)生后卻可在比較長的時間內維持較高的水平，小鼠甚至可持續(xù)終生。

1.3 基因免疫疫苗誘導的免疫應答類型與接種途徑有關 基因疫苗肌肉接種免疫反應以Th1型反應為主，所產(chǎn)生的抗體主要是ΙgG2，而基因槍接種皮內，以Th2型反應為主，所產(chǎn)生的抗體主要是IgG1。

1.4 基因疫苗接種新生動物可誘導出較強的免疫應答，不受或少受母源抗體的影響。而且基因免疫疫苗可使無反應性動物產(chǎn)生免疫應答如以HBsAg表達質粒免疫HBsAg轉基因鼠亦可誘導動物產(chǎn)生特異性免疫反應，而在一般情況下，HBsAg轉基因鼠對HBsAg是不產(chǎn)生免疫應答的。

1.5 基因免疫疫苗質粒既是抗原信息的攜帶者，同時又具有佐劑的作用。

2 基因疫苗的免疫機理

研究表明，核酸疫苗可以引發(fā)全面的免疫應答反應。核酸疫苗導入宿主體內后，在動物體內產(chǎn)生微量的抗原蛋白，誘發(fā)機體免疫應答。而用等量的抗原蛋白直接免疫動物根本不能誘發(fā)任何免疫應答。

3 影響核酸免疫效果的主要因素

3.1 目的基因的選擇 目的基因即疫苗DNA的構建和選定，這是決定核酸免疫效果的關鍵。最好選擇病毒的主要保護性抗原基因。

3.2 載體質粒及啟動子的選擇 載體質粒的種類及其結構組成對核酸免疫的水平有明顯影響。無論是用腺病毒載體還是逆轉錄病毒載體，總體上達到的免疫效果都不如用質粒載體。而且，細菌質粒本身沒有很強的免疫原性，這對保證質粒在體內長期穩(wěn)定地表達有重要意義。核酸疫苗大多采用質粒作載體。

3.3 接種方法及途徑 Fynan等（1993）進行了不同方式核酸免疫效果比較，結果發(fā)現(xiàn)用基因槍接種比直接注射核酸疫苗效果好，研究還表明，肌肉注射保護效果比鼻腔內、腹腔內、靜脈內和皮肉內免疫效果都好。接種部位也要進行必要的預處理。試驗表明，用25%高滲蔗糖或甘油在核酸接種前預處理接種部位，比如肌肉，可使疫苗DNA的表達水平提高。

3.4 接種劑量和次數(shù) 許多研究表明，免疫應答強度和免疫保護與接種劑量和次數(shù)有一定的相關性。若無毒性的表達蛋白，較高接種劑量和多次接種可產(chǎn)生較高水平的表達蛋白和抗體。相反，毒性蛋白的表達，可能會較早殺死轉染細胞，阻止抗原產(chǎn)生，無法維持免疫刺激，從而呈現(xiàn)負效應。

3.5 另增強劑和佐劑的應用對基因疫苗也有影響，而且對于試驗動物年齡和品系來說，幼齡動物接種DNA時，在體內表達水平較高，并產(chǎn)生較好的免疫應答。而且，核酸疫苗不受母源抗體的抑制，在新生動物的感染防治上具有良好效果。

4 核酸疫苗的發(fā)展前景

核酸疫苗是二十世紀九十年代發(fā)展起來的一項新的生物技術，它已成為疫苗研究領域中的熱點之一。對于細菌、病毒和寄生蟲等多種疾病的防治都有深遠的意義。核酸疫苗以其獨特的優(yōu)點吸引著人們：

4.1 抗原合成和遞呈過程與病原的自然感染相似，通過MHCⅠ類和Ⅱ類分子直接遞呈免疫系統(tǒng)。

4.2 免疫原單一， 核酸疫苗載體本身沒有抗原性，只有抗原編碼基因得到表達。

4.3 核酸疫苗作為一種重組質粒，易在工程菌內大量擴增，提純方法簡單，穩(wěn)定性好，成本低廉，適于規(guī)?；a(chǎn)。但其潛在的危險性也令人擔憂：①引起腫瘤形成，概率較低。因重組的質粒DNA有可能被整合到宿主的染色體中，并引起插入突變。外源DNA引入體內敏感細胞中可能引起腫瘤細胞形成；②由于對接種所用DNA表達抗原的持續(xù)時間尚不了解，外源抗原的長期表達可能導致免疫病理反應，使被接種者保持一定強度的免疫應答，如果這種強度和持續(xù)時間沒有合理控制，就可能引發(fā)免疫耐受； ③可能形成針對注射DNA的抗體和出現(xiàn)不利的自身免疫紊亂； ④所表達的抗原可能產(chǎn)生額外的生物活性。核酸疫苗若推廣使用須解決這些安全問題。隨著基礎研究和臨床應用的進一步深化，這些問題都將會得到更客觀的評價和解決。在不久的將來，核酸疫苗將會以其它疫苗無可比擬的優(yōu)點而獲得廣泛的應用，使動物醫(yī)學得到更進一步的發(fā)展。

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