胃腸間質瘤是胃腸道最常見的間葉源性腫瘤，由于基于腫瘤大小以及核分裂數(shù)的提出，單純的用良性和惡性定義胃腸間質瘤已經(jīng)沒有任何的意義[1]。隨著診斷標準的精確化，以往多種消化道腫瘤在相關臨床診斷指標中均與GIST相同，應歸屬于GIST[2]。胃腸道間質瘤的發(fā)病和絲氨酸激酶的過度激活有關，免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)GIST過表達CD117和DOG1，并且大多數(shù)病例具有C-Kit基因擴增現(xiàn)象[3]，KIT 或者PDGFRA基因的持續(xù)激活可以啟動細胞的過度增殖[4]。然而，在一些KIT 或者PDGFRA基因正常的GIST患者中，琥珀酸脫氫酶亞型SDHx（SDHA， SDHB， SDHC， and SDHD）也被證實發(fā)生了致病性突變[5]。GIST的發(fā)病也和細胞周期的紊亂有關，MDM2或者TP53發(fā)生突變，導致細胞周期調節(jié)紊亂，這種現(xiàn)象在高危險的胃腸間質瘤中尤其常見[6]。除此以外，一些常見的胃癌致病的環(huán)境因素，諸如飲酒、不良飲食習慣亦可能成為胃腸間質瘤的誘導因素[7]。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2012年1月～2015年10月在南昌大學第一附屬醫(yī)院行根治性手術的40例胃腸間質瘤患者的臨床病理資料，見表1。2014年10月～2015年3月在我院行根治性手術的3例胃腸間質瘤患者的臨床病理資料，所有入組患者病歷資料完整，手術前均未進行化療，避免由于放療導致的病理及其生理變化。所有研究對象術后病理診斷明確，均按照美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC）2010年出版的《AJCC癌癥分期手冊》（第2版）進行胃腸間質瘤侵襲危險程度分期。

1.2免疫組化方法 免疫組織化學采用免疫學原理，將制好的切片經(jīng)過帶有標記的抗體孵育后顯色，以觀察相關的蛋白表達量。本課題中采用的是PH 6.0的檸檬酸鹽修復、DAB顯色的方法，用PBS代替一抗作為陰性對照。染色結束后，用蘇木素進行復染，以使顏色更加鮮艷。

1.3 Western-Bolt采用10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳，使用兔源抗FAK一抗（ abcam 40794），再用HRP標記的抗兔的二抗（WB150614）與一抗結合，在凝膠成像系統(tǒng)中成像。

1.4結果判讀標準 免疫組織化學染色評分系統(tǒng)采用德國半量[8]評分：在光學顯微鏡下在200×及400×下觀察切片面積及陽性染色強度。顯微鏡下觀察到胞漿和（或）胞核呈棕色或黃色判定為陽性著色，陽性細胞數(shù)比率<10%記0分，1分為10%～25%，2分為25%～50%，3分為50%～75%，4分為>75%，與陰性對照比較著色強度分四級：0、1、2、3分，無染色為陰性 （0分），細胞漿和（或）細胞核呈淡棕色為弱陽性 （1分），呈棕色者為陽性（2分），深棕色為強陽性 （3分），然后根據(jù)陽性細胞數(shù)比率和染色強度得分的乘積將組織染色結果進行評分分級：0～1為陰性（-），2～4為弱陽性（+），5～8為陽性（++），9～12為強陽性（+++）。

1.5統(tǒng)計方法 使用SPSS 20.0（IBM）統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，所有統(tǒng)計的資料均采用雙側檢驗，P值<0.05將認為所檢驗的數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學意義。實驗數(shù)據(jù)包括計數(shù)資料和計量資料。免疫組化檢測FAK表達情況的實驗總所獲得的計數(shù)資料采用卡方檢驗比較二者之間構成比的差異。

2 結果

2.1免疫組化結果

2.1.1 不同侵襲危險程度組FAK的表達水平 胃腸間質瘤組織中存在FAK的表達，定位于間質的細胞漿，不同侵襲危險程度組FAK表達水平不同，見圖1，統(tǒng)計學分析組間差異有統(tǒng)計學意義（χ2=19.827，P<0.01）。

圖1 不同侵襲危險程度組FAK免疫組化染色圖片，A為高危險度GIST，B為中危險度GIST，C為低危險度GIST，D為極低危險度GIST

2.1.2 胃腸間質瘤組織中FAK的表達與胃腸間質瘤患者性別和年齡的關系 將FAK的表達水平與胃腸間質瘤患者的性別和年齡分組進行比較，年齡（χ2=0.131，P>0.05），性別（χ2=0.162，P>0.05），差異均無統(tǒng)計學意義，見表2。

2.1.3胃腸間質瘤組織中FAK的表達量與胃腸間質瘤相關臨床病理參數(shù)的關系 使用統(tǒng)計學的方法分析胃腸間質瘤的腫瘤部位、侵襲危險程度和細胞類型與FAK表達水平的關系，統(tǒng)計結果顯示：FAK的表達量在不同級別的胃腸間質瘤中（P=0.08）、腫瘤部位（P=0.664）和細胞類型（P=0.093）的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表3。

由于在侵襲危險程度中我們采用了不同級別的分類方法，并且其表達差異的P值非常接近0.05，所以我們對不同級別的胃腸間質瘤按照AJCC的胃腸間質瘤劃分方法進行進一步的細分，得到以下評分等級資料，其P值等于0.016，小于0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。其表達情況統(tǒng)計結果如圖2。

圖2 不同侵襲危險程度GIST中FAK表達情況統(tǒng)計圖，在GIST組織中FAK隨著侵襲危險程度的升高而表達上升，表達差異用χ2檢驗，（P<0.05用*表示）。

2.2 Western-Bolt結果 胃腸間質瘤新鮮組織提取總蛋白行Western-Bolt檢測FAK的表達水平，結果顯示：在正常組織和腫瘤組織中，F(xiàn)AK在胃腸間質瘤組織中的表達量顯著增加，結果見圖3。

3 討論

黏著斑激酶（focal adhesion kinase， FAK）是一個分子量為125kD的胞漿酪氨酸激酶，在正常組織中，F(xiàn)AK主要對細胞的錨著依賴（anchorage dependent）性生長起調控作用，在侵襲性和轉移性的腫瘤中，F(xiàn)AK表達較高水平，且在腫瘤進展過程中起關鍵性作用。免疫組化和Western-Bolt的實驗結果中我們發(fā)現(xiàn)：胃腸間質瘤組織中存在FAK高表達，侵襲危險程度不同，F(xiàn)AK的表達水平不同，隨著胃腸間質瘤侵襲危險程度的增高，F(xiàn)AK的表達量增多，呈現(xiàn)逐步遞增的趨勢。

比較FAK的表達量與胃腸間質瘤患者侵襲危險程度分期的關系，我們發(fā)現(xiàn)FAK的表達水平與胃腸間質瘤組織侵襲危險程度分期有關，不同的侵襲危險程度分期組，F(xiàn)AK的表達水平不同。實驗結果顯示：極低侵襲危險程度期和中侵襲危險程度期，極低侵襲危險程度期和極高侵襲危險程度期之間的差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），我們認為隨著腫瘤分期的進展，F(xiàn)AK的表達量增多，表明FAK的表達水平與胃腸間質瘤臨床進展有關，推測FAK可作為胃腸間質瘤患者臨床進展的監(jiān)測指標，并對胃腸間質瘤患者的預后有一定的參考價值。

FAK與性別的相關性分析中，結果是男性組和女性組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），因此推斷性別與FAK表達水平的相關性不大。FAK與胃腸間質瘤的腫瘤部位及細胞類型的分析結果顯示腫瘤部位及細胞類型差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），推測腫瘤部位及細胞類型對胃腸間質瘤中FAK表達無顯著影響。研究表明，F(xiàn)AK的高表達與患者的預后不良有顯著關系。

綜合上述研究結果，我們認為FAK的表達量與胃腸間質瘤的臨床進展相關。故此，我們提出FAK診斷GIST的新方法，即活檢標本進行FAK基因診斷和FAK免疫組化診斷結合的方法。我們的研究在組織學上為FAK作為GIST的潛在治療靶標也提供了可靠的依據(jù)。

參考文獻：

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編輯/金昊天