喀日耶姆·艾海提+艾爾肯·依不拉音

[摘要] 目的 建立在線光纖傳感同步吸收-熒光光譜法測定阿司匹林中游離水楊酸的方法。 方法 采用在線光纖傳感同步吸收-熒光光譜法測定不同廠家阿司匹林片中水楊酸，1% 冰醋酸-甲醇溶液作為溶劑，20%甲醇作為載液，泵流速1.00 mL/min，進樣體積50 μL時，300 nm為吸收波長，303 nm為激發(fā)波長，430 nm為發(fā)射波長進行檢測。 結(jié)果 游離水楊酸在0.5～5.0 μg/mL（r=0.9994）范圍內(nèi)線性良好。拜阿司匹林、阿司匹林腸溶片、阿司匹林泡騰片中游離水楊酸的平均加樣回收率分別為98.01%、98.32%、98.40%；精密度、穩(wěn)定性、重復性的RSD均<1.60%。 結(jié)論 該方法靈敏度高、重復性好，適用于阿司匹林中游離水楊酸的檢測。

[關(guān)鍵詞] 在線光纖傳感；同步吸收-熒光光譜檢測儀；阿司匹林游離水楊酸；微量檢測

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）10（c）-0126-04

[Abstract] Objective To establish an online optical fiber sensing synchronous absorption-fluorescence spectrometer for detection of free salicylic acid in aspirin. Methods Free salicylic acid in aspirin from different manufacturer was measured by online optical fiber sensing synchronous absorption - fluorescence spectrometry， as soon as solvent was 1% glacial acetic acid - methanol solution， carrying fluid was 20% methanol， pump flow rate was 1.00 mL/min， sample volume was 50 μL， 300 nm was selected absorption wavelength， 303 nm was selected fluorescence excitation wavelength， 430 nm was selected emission wavelength to be proceeded. Results The linear ranges of free salicylic acid was 0.5-5.0 μg/mL （r=0.9994）. The average recovery of free salicylic acid in aspirin， aspirin enteric tablets and aspirin effervescent tablets were 98.00%， 98.32%， 98.40%； the RSD of precision， stability， repeatability were less than 1.60%. Conclusion The method is high sensitivity and good repeatability for the residue analysis of free salicylic acid in aspirin.

[Key words] Online optical fiber sensing； Synchronous absorption-fluorescence spectrum detector； Free salicylic acid in aspirin； T race detection

阿司匹林（Aspirin，ASP）是常用的解熱鎮(zhèn)痛藥，用于各種原因引起的[1-2] 感冒、發(fā)熱、頭痛、關(guān)節(jié)痛、風濕病，還能抑制血小板聚集。阿司匹林是有機物中的酯類物質(zhì)，易發(fā)生水解反應[3]，產(chǎn)物游離水楊酸易被氧化形成醌類物質(zhì)，使阿司匹林變質(zhì)，從而降低產(chǎn)品質(zhì)量，且對人體有極大的毒副作用[4]。阿司匹林含量測定方法主要有高效液相色譜法[5-8]、反相液相色譜法[9]、酸堿滴定法、氣相色譜法[10]、紫外可見分光光度法[11-12]、熒光分光光度法和自動電位滴定法[13]等。

1970年代發(fā)展起來的新技術(shù)是光纖化學傳感技術(shù)，也是光纖、六通閥、流通池、檢測器、光譜、材料和計算機結(jié)合起來的技術(shù)[14-16]。在線光纖傳感同步吸收-熒光光譜檢測法在射光90°方位下可以檢測出吸收光譜和熒光光譜。目前初步假設入射光在流通池內(nèi)，產(chǎn)生漫反射，改變了光的傳播路線，經(jīng)過幾次漫反射轉(zhuǎn)移方向與入射光90°方向產(chǎn)生吸收光譜[17]。在入射光垂直點能檢測熒光光譜，但使用的數(shù)據(jù)分析軟件是測定吸光度數(shù)據(jù)模型原因，檢測出來倒立的熒光圖譜其值為負。該測定法重復性好、靈敏度高、基線穩(wěn)定、樣品檢測下限低，可觀察200～800 nm范圍內(nèi)的吸收光譜、發(fā)射光譜、吸收點及熒光點按時序圖的變化[18-19]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

光譜儀（美國海洋公司，QE65000）；光纖（美國海洋公司，F(xiàn)IA-P400-SR）；光源（美國海洋公司，DH-2000）；柱塞泵（日本精密科學株式會社，SP-D320U）；UV-2550紫外分光光度計（日本，島津）。

1.2 試藥

拜阿司匹林（Bayer Schering Pharmacy，批號：BJ05662）；阿司匹林腸溶片（石家莊市華新藥公司，批號：018110930）；阿司匹林泡騰片（阿斯利康制藥公司，批號：1108081）；游離水楊酸（中國食品藥品檢定研究院，0106-9508），實驗用水為二次蒸餾水，這些試藥均為分析純。

1.3 實驗原理

在光譜測定工作中經(jīng)常需要同時檢測吸收光譜和熒光發(fā)射光譜。為了實現(xiàn)兩種光譜同時檢測出一種檢測器，經(jīng)多次設計并通過多種樣品吸收光譜和熒光發(fā)射光譜的檢測驗證了兩種光譜同時檢測的可能，并得到了較好的實驗數(shù)據(jù)及結(jié)果。見圖1。

2 方法與結(jié)果

2.1 影響因素考察

2.1.1 檢測波長的選擇 精密量取濃度為5 μg/mL的100 mL游離水楊酸標準溶液，用紫外可見分光光度計、熒光分光光度計和在線光纖傳感同步吸收-熒光光譜檢測儀分別掃描吸收光譜和熒光光譜，測得游離水楊酸的吸收波長300 nm，熒光激發(fā)波長303 nm，熒光發(fā)射波長430 nm。

2.1.2 載液濃度的影響 考察20%、40%、60%、80%、100 %甲醇-水溶液五個濃度，濃度越大，出峰時間越快，但因甲醇-水比例較大時易在流路中產(chǎn)生氣泡，影響檢測結(jié)果，20%甲醇-水溶液作為載液時，峰形成及出峰時間跟其他比例的甲醇液相差很小，且無溶劑峰干擾。故選擇20%甲醇溶液作為最佳載液。

2.1.3 載液流速的影響 從0.5～4.0 mL/min范圍內(nèi)考察洗脫載液流速。載液流速0.5 mL/min時出峰時間很慢。載液流速從2～4 mL/min時，出峰時間隨流速的增加而加快，但同時，脈沖對基線穩(wěn)定性的影響也增加。泵流速為1 mL/min時，脈沖影響極小，出峰時間也快，每秒中的進樣次數(shù)可達到3次。所以1 mL/min的流速作為最佳載液流速。

2.1.4 在線光纖傳感同步吸收-熒光光譜法進樣體積的影響 調(diào)節(jié)在線光纖傳感同步吸收-熒光光譜檢測儀的進樣環(huán)長度，精密吸取5 μg/mL水楊酸標準溶液，依次進樣10、20、30、40、50、60 μL，通過水楊酸溶液的吸光強度變化，確定進樣體積。進樣體積在10～40 μL時，溶液熒光強度不斷增大，大于50 μL后，熒光強度基本不變，但此時，在線時序圖中游離水楊酸峰有拖尾現(xiàn)象，因此選擇進樣體積為50 μL。結(jié)果見圖2。

2.2 水楊酸標曲光譜及時序圖

20%甲醇為載液，流速為1 mL/min，進樣體積為50 μL。水楊酸濃度依次為0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 μg/mL。按信噪比（S/N=3），得到的最低檢測限為0.1 μg/mL。圖3左圖為紫外-熒光光譜濃度梯度變化圖，300 nm左右處成凹狀，是水楊酸在不同濃度時的紫外吸收波長，430 nm左右顯示凸狀，為不同濃度時的熒光波長；右圖向上峰為熒光強度實時變化圖（λ=430 nm），倒掛形狀峰為紫外吸收強度實時變化圖（λ=300 nm）。以對照品進樣量（μg）為橫坐標，光強度為縱坐標，繪制標準曲線，在線光纖傳感熒光光譜法測時線性方程Y=138.16 X+25.31 （r=0.9994），熒光分光光度法測時線性方程Y=37.36 X+3.44 （r=0.9990）。水楊酸標準曲線光譜及時序圖見圖3。

2.3 方法學考察

2.3.1 精密度試驗 準確吸取5 μg/mL水楊酸標準液0.5、1.0、5.0 mL各3份于25 mL量瓶，加1%冰乙酸-甲醇至刻度，配制成濃度為1、2、5 μg/mL的溶液，依照對照品測定法，測6次，得RSD為1.23%、1.05%、0.76%。

2.3.2 重復性試驗 取拜阿司匹林及其腸溶片、泡騰片，各配成6份溶液，測得RSD為0.98%、1.14%、1.06%。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 同一份樣品，于制備后0～8 h內(nèi)每隔2 h取樣50 μL檢測，水楊酸峰強度基本不變，RSD為1.52 %。表明水楊酸8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4 回收率試驗 精密稱取約含阿司匹林50 mg的拜阿司匹林及其腸溶片、泡騰片，置500 mL的容量瓶中，定量加入水楊酸對照品溶液，用1%冰醋酸-甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，過0.45 μm濾膜。每份樣品平行測定三次，結(jié)果見表1～2。

2.4 樣品含量檢測

精密稱取拜阿司匹林69.25 mg、阿司匹林腸溶片149.55 mg、阿司匹林泡騰片79.65 mg（均含有阿司匹林50 mg）于500 mL量瓶，加1%冰醋酸-甲醇定容，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，在線光纖傳感同步吸收-熒光光譜法、熒光分光光度法檢測，結(jié)果表明三種阿司匹林類藥片中的水楊酸含量符合限量規(guī)定，在線光纖傳感熒光光譜法測定出來的水楊酸含量比熒光分光光度法測定出來的水楊酸含量高。結(jié)果見表3。

2.5 線光纖傳感熒光光譜法和熒光分光光度法含量測定差異比較

經(jīng)統(tǒng)計學驗證，在線光纖傳感熒光光譜法和熒光分光光度法測出來的差值均數(shù)為0.08，差值標準差為0.03，得P = 0.04（直接概率法），按α=0.05，認為兩種方法數(shù)據(jù)總體結(jié)果有顯著差異。這說明在線光纖傳感熒光光譜法的檢測靈明度高，可檢測微量物質(zhì)。

3 討論

3.1 樣品溶劑

乙酰水楊酸是弱酸性化合物，微溶于水，溶于乙醇、乙醚，也溶于較強的堿性溶液，其水溶液水解強度受酸堿影響最大，選用1%冰醋酸-甲醇溶液溶解樣品，可有效抑制其水解。

3.2 檢測波長

紫外分光光度法檢測時，濃度3 μg/mL以下的水楊酸在300 nm處的吸光度值較小，線性關(guān)系差。熒光分光光度計檢測時，300 nm處測得的線性關(guān)系良好，并且與阿司匹林在275 nm處的紫外吸收重合，故選300 nm作為水楊酸含量的檢測波長。

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（收稿日期：2016-07-20 本文編輯：趙魯楓）