王 穎，牛志云，邢麗娜，喬淑凱，潘 崚

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液科，河北 石家莊 050000)

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·論 著·

青蒿琥酯對(duì)高危MDS細(xì)胞株SKM-1中DNMT1表達(dá)的影響

王 穎，牛志云，邢麗娜，喬淑凱，潘 崚*

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液科，河北 石家莊 050000)

目的以骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes，MDS)細(xì)胞系SKM-1細(xì)胞為研究對(duì)象，在體外觀察青蒿琥酯(artesunate，ART)對(duì)SKM-1細(xì)胞脫氧核糖核酸甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase, DNMT1)基因表達(dá)的影響，以期為臨床應(yīng)用ART治療中高危MDS患者提供體外實(shí)驗(yàn)的理論依據(jù)。方法ART干預(yù)體外細(xì)胞培養(yǎng)MDS細(xì)胞SKM-1細(xì)胞系，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(revers transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法觀察DNMT1的mRNA改變，采用蛋白印跡法觀察DNMT1蛋白表達(dá)改變。采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR法觀察DNMT1靶基因p15INK4b表達(dá)的改變，采用甲基化PCR法觀察p15INK4b啟動(dòng)子甲基化的改變。結(jié)果1、5、10 μmol/L的ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1基因表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。1、5、10 μmol/L各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。DNMT1蛋白表達(dá)1、10 μmol/L低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； 1、10 μmol/L組低于5 μmol/L組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1基因3、6、12 h處理組低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3 h、6 h與12 h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DNMT1蛋白3、6、12 h處理組低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ART處理后p15INK4b的mRNA水平5、10 μmol/L組、地西他賓組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 p15INK4b的mRNA水平在10 μmol/L組是這5個(gè)處理組中最高的，并且1 μmol/L、5 μmol/L、地西他賓組與10 μmol/L組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1蛋白靶基因p15INK4b啟動(dòng)子甲基化程度下降，各組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；ART組非甲基化啟動(dòng)子較其他2組上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論ART通過(guò)抑制DNMT1的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)來(lái)恢復(fù)SKM-1細(xì)胞中的p15INK4b的表達(dá)，進(jìn)而發(fā)揮其抑癌作用。

骨髓增生異常綜合征；青蒿素；甲基轉(zhuǎn)移酶類(lèi)

近年來(lái)，在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)和骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes，MDS)患者中頻繁發(fā)現(xiàn)脫氧核糖核酸甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase, DNMT1)基因突變,提示其可能在造血系統(tǒng)腫瘤中發(fā)揮不可替代的作用。抗瘧藥青蒿琥酯(atesunate，ART)屬于青蒿素的衍生物，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，ART對(duì)腫瘤細(xì)胞發(fā)揮多重抗腫瘤效應(yīng)。筆者以前曾報(bào)道ART在體外能對(duì)高危MDS細(xì)胞系SKM-1細(xì)胞發(fā)揮明顯的增殖抑制作用[1]，但ART能否對(duì)MDS細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)異常發(fā)揮改善作用，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究在體外觀察ART對(duì)SKM-1細(xì)胞DNMT1基因表達(dá)的影響，旨在為臨床應(yīng)用ART治療中高危MDS患者提供體外實(shí)驗(yàn)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試劑及藥物 RPMI 1640培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；CCK-8試劑盒購(gòu)自于日本同仁化學(xué)試劑研究所；ART購(gòu)自桂林南藥股份有限公司；PI試劑盒購(gòu)于美國(guó)Biolegend公司。

1.2細(xì)胞培養(yǎng) 人類(lèi)高危MDS細(xì)胞株SKM-1細(xì)胞購(gòu)于日本JC-RB細(xì)胞庫(kù)。將SKM-1細(xì)胞常規(guī)接種于RPMI 1640培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)中，并添加入雙抗(青霉素100 U/mL和鏈霉素10 mg/L)，然后將培養(yǎng)瓶置于5%CO2、飽和濕度37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKM-1細(xì)胞進(jìn)行后繼實(shí)驗(yàn)。

1.3實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè) 收集經(jīng)ART處理72 h的SKM-1細(xì)胞，用冷PBS充分洗滌2次，然后采用Trizol一步法提取細(xì)胞總RNA，并在18 g/L瓊脂糖上電泳，可以看到存在3條清晰條帶(28 s，18 s，5 s)，證明所提RNA模板完整；用紫外分光光度計(jì)測(cè)定吸光度A 260/A 280比值均>1.8，并根據(jù)A 280為1≌40 mg/L RNA進(jìn)行含量測(cè)定。25 μL逆轉(zhuǎn)錄體系包含總RNA 2 μg，隨機(jī)引物25 ng，5×RT緩沖液5 μL，dNTPs(2 mmol/L)1 μL，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(100 U/μL)1 μL，Rnasin(10 U/μL)2 μL，Mg2+(25 mmol/L)1 μL，雙蒸水補(bǔ)足體系，37 ℃水浴60 min，94 ℃滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，獲取的cDNA于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｒ镌O(shè)計(jì)參考GenBank中原始cDNA序列，經(jīng)上海生物工程公司鑒定并合成。

PCR反應(yīng)體系為25 μL，包括cDNA 2 μL，SYBR Green 1.25 μL，無(wú)氧核酸水10.75 μL，上、下游引物20 pmol/L各2 μL，余用雙蒸水補(bǔ)至25 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性3 min，然后95℃變性30 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，40次循環(huán)結(jié)束。每一樣本檢測(cè)管和內(nèi)對(duì)照β-actin的檢測(cè)均做3個(gè)平行管，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。Ct值為擴(kuò)增產(chǎn)物量達(dá)到臨界域值時(shí)所對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)，反應(yīng)完畢后，將擴(kuò)增的每份PCR產(chǎn)物進(jìn)行熔解曲線分析，判斷是否為特異性產(chǎn)物。測(cè)出每份標(biāo)本目的基因和管家基因的Ct值，以目的基因的Ct值減去管家基因的Ct值得到ΔCt值，2-ΔCt即為目的基因相對(duì)于管家基因的相對(duì)表達(dá)量。引物序列由賽百盛公司設(shè)計(jì)并合成 DNMT1 5′-TACCTGGACGACCCTGACCTC-3′，5′-CGTTGGCATCAAAGATGGACA-3′ 擴(kuò)增片段103 bp， β-actin 5′-CGGGAAATCGTGCGTGAC-3′，5′-TGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′ 擴(kuò)增片段434 bp。

1.4免疫印跡分析 處理前后細(xì)胞的DNMT1蛋白印記分析流程同本課題組前期文章流程[1]，Anti-DNMT1(Epitomics，美國(guó))，兔抗GAPDH單克隆抗體(Santa Cruz，美國(guó))。

1.5甲基化特異性PCR(MSP-PCR) DNA提取按照基因組DNA抽提試劑盒(離心柱式)說(shuō)明書(shū)操作：收集最多不超過(guò)500萬(wàn)的細(xì)胞，離心沉淀后重懸于200 μL PBS中；加入20 μL蛋白酶K，Vortex混勻；加入200 μL樣品裂解液B，Vortex混勻。70 ℃孵育10 min；加入200 μL無(wú)水乙醇，Vortex混勻；把步驟e中的混合物加入到DNA純化柱內(nèi)。≥6 000 g(約≥8 000 r/min)離心1 min。倒棄廢液收集管內(nèi)液體；加入500 μL洗滌液I，≥6 000 g(約≥8 000 r/min)離心1 min。倒棄廢液收集管內(nèi)液體；加入600 μL洗滌液Ⅱ，≥18 000 g(約≥12 000 r/min)離心1 min。倒棄廢液收集管內(nèi)液體；再≥18 000 g(約≥12 000 r/min)離心1 min，以去除殘留的乙醇；將DNA純化柱置于一潔凈的1.5 mL離心管上，加入50～200 μL洗脫液。室溫放置1～3 min?！?2 000 r/min 離心1 min。所得液體即為純化得到的總DNA。 DNA 修飾：參照CpGenomeTM modification Kit說(shuō)明書(shū)操作，取1 μg基因組DNA 加入100 μL 的DDW和7 μL 3 mol/L 的NaOH 混勻，放入50 ℃水浴中加熱10 min。取出后每管中加入新鮮配制的DNA 修飾試劑Ⅰ550 μL，避光，50 ℃水浴16 h。取出后再向每管中加入充分重懸的DNA 修飾試劑Ⅲ 5 μL 和DNA 修飾試劑Ⅱ750 μL，輕輕混勻，室溫放置10 min。5 000 g 離心 10 s，棄去上清，再用70%乙醇洗滌3次，并棄去上清。每管中再加入新鮮配制的20 mmol/L 的NaOH/90%乙醇溶液50 μL(即每mL 該溶液中含900 μL 無(wú)水乙醇，93.4 μL DDW 和6.6 μL 3 mol/L NaOH)，輕彈重懸團(tuán)塊，并室溫放置5 min。5 000 g 離心10 s，棄去上清，再用90%乙醇洗滌3次，棄上清，室溫干燥。每管加25 μL 的TE 溶解DNA，55 ℃水浴加熱15 min 后取出，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度和純度，取A260/A280>1.8者進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

PCR反應(yīng)體系為25.0μL：修飾的DNA模板100 ng，MgCL21.5 mmol/L， 10×Taq 酶緩沖液2.5 μL，TaqDNA 合成酶1.0 U，dNTP 0.2 mmol/L， p15INK4b-M和p15INK4b-U 上、下游引物各0.25 μmol/L，余用無(wú)核酸酶的水補(bǔ)足至25 μL。反應(yīng)條件為94 ℃ 10 min；94 ℃ 40 s，63 ℃ 45 s，72 ℃ 60 s，30 個(gè)循環(huán)；72 ℃ 12 min。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照。反應(yīng)產(chǎn)物4 ℃保存。取5 μL 反應(yīng)產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上電泳，Goldview 染色，紫外燈下照相。結(jié)果分析：采用Gel-PRO analyzer 凝膠定量分析軟件分析條帶光密度。

引物序列由賽百盛公司合成[2]p15INK4b-M：5′-GCGTTCGTATTTTGCGGTT-3′，5′-CGTAC-AATAACCGAACGACCGA-3′ 擴(kuò)增片段148 bp，p15INK4b-U：5′-TGTGATGTGTTTGTATTTT-GTGGTT-3′，5′-CCATACAATAACCAAACAA-CCAA-3′擴(kuò)增片段154 bp。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用GraphPad Prism 5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料比較分別采用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1不同濃度的ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1基因和DNMT1蛋白的表達(dá) 1、5、10 μmol/L的ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1基因低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。1、5、10 μmol/L各劑量之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。1、10 μmol/L DNMT1蛋白表達(dá)低于對(duì)照組，10 μmol/L組DNMT1蛋白表達(dá)低于5 μmol/L組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2ART不同時(shí)間處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1基因和蛋白的表達(dá) 3 h、6 h與12 h處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1基因表達(dá)低于對(duì)照組(P<0.05)，12 h處理后DNMT1基因表達(dá)低于3 h組和6 h組(P<0.05)。3 h、6 h和12 h組DNMT1蛋白的表達(dá)低于對(duì)照組(P<0.05)；DNMT1蛋白3 h、6 h、12 h處理組間表達(dá)依次減低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各劑量組ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1基因與蛋白比較Table 1 Comparison of DNMT1 gene and protein in each dose group of ART treated SKM-1 cells

表2 各時(shí)間點(diǎn)ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1基因與蛋白比較Table 2 Comparison of DNMT1 gene and protein in ART treated SKM-1 cells at different time points

2.3各組ART處理后p15INK4b的mRNA水平比較 以80 μmol/L的去甲基化藥物地西他濱作為陽(yáng)性對(duì)照。ART處理后p15INK4b的mRNA水平在5、10 μmol/L組、地西他賓組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。10 μmol/L組在各處理組間上升最高，與5 μmol/L組和地西他賓組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組ART處理后p15INK4b的mRNA水平比較Table 3 Comparison of mRNA levels of p15INK4b after ART treatment in each group

2.4各組ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1蛋白靶基因p15INK4b啟動(dòng)子甲基化和非甲基化程度比較 ART處理SKM-1細(xì)胞后DNMT1蛋白靶基因p15INK4b啟動(dòng)子甲基化程度在ART處理組和地西他濱處理組有低于對(duì)照組的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；非甲基化啟動(dòng)子在ART處理組和地西他濱處理組高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 各組ART處理后p15INK4b的啟動(dòng)子甲基化、非甲基化水平比較Table 4 After being treated with ART,methylation and unmethylation promoter of p15INK4b among each groups

3 討 論

隨著對(duì)表觀遺傳學(xué)在腫瘤發(fā)生發(fā)展中地位認(rèn)識(shí)的不斷深入，以表觀遺傳學(xué)為靶位的治療日益受到重視。對(duì)老年患者為主的高危MDS來(lái)講，表觀遺傳學(xué)修正治療更是不能進(jìn)行骨髓移植者的首選方案。DNA甲基化與腫瘤發(fā)生發(fā)展最為密切，在MDS尤為突出，多項(xiàng)研究顯示MDS存在多個(gè)調(diào)節(jié)和執(zhí)行DNA甲基化的基因突變或功能異常[3-5]。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑也在MDS中顯示出較好的治療前景。但是隨著臨床應(yīng)用的增多，已發(fā)現(xiàn)存在地西他濱治療原發(fā)或繼發(fā)耐藥的病例，最近的報(bào)道顯示應(yīng)用地西他濱治療失敗的患者預(yù)后通常是很差的[6-8]。之后的治療通常包括強(qiáng)化療、 雷那度安、臨床試驗(yàn)治療和(或)同種異體干細(xì)胞移植[9-11]。在某些情況下，改變?nèi)ゼ谆幬镆苍S是另一種更好的選擇,尤其是那些疾病穩(wěn)定的患者，其不能耐受更強(qiáng)的化療。MDS患者應(yīng)用阿扎胞苷治療過(guò)程中疾病進(jìn)展或治療失敗后改換地西他濱治療只有很少患者取得完全緩解[12]。

高危MDS及MDS/AML對(duì)ART誘導(dǎo)凋亡作用有較敏感的反應(yīng)，對(duì)MDS的表觀遺傳是否也有修正作用未見(jiàn)報(bào)道，筆者選擇在MDS表觀遺傳學(xué)主要的調(diào)節(jié)靶位DNMT1為觀察指標(biāo)[13]，觀察ART處理SKM-1細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNMT1表達(dá)的影響。如果能下調(diào)DNMT1，則為ART治療高危MDS進(jìn)一步提供體外實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

本研究進(jìn)行RT-PCR和免疫印跡檢測(cè)的結(jié)果均提示ART處理后DNMT1的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平較未處理組下降。但未呈時(shí)間劑量依賴性模式，可能與ART劑量跨度較小，最高試驗(yàn)組劑量較低有關(guān)。進(jìn)一步用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)DNMT1靶基因p15INK4b的mRNA表達(dá)發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)ART處理時(shí)SKM-1細(xì)胞p15INK4b mRNA表達(dá)很低。在ART處理后12 h，p15INK4b的mRNA呈上升趨勢(shì)。應(yīng)用DAC處理SKM-1細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照，發(fā)現(xiàn)在ART處理后p15INK4b也恢復(fù)表達(dá)。p15INK4b的mRNA水平在10 μmol/L組是這5個(gè)處理組中上升最高的，1 μmol/L、5 μmol/L、地西他賓組與10 μmol/L組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但1 μmol/L、5 μmol/L 2組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，出現(xiàn)這一現(xiàn)象可能因?yàn)榍噍镧┝靠缍刃?，而在低劑量時(shí)趨勢(shì)不顯著。這一點(diǎn)也可以證明在SKM-1細(xì)胞中p15INK4b被DNA超甲基化沉默，去甲基化處理可以在某種程度上恢復(fù)其表達(dá)。未處理的SKM-1細(xì)胞中p15INK4b表達(dá)極低，在ART處理后上升，結(jié)合前面DNMT1下降的結(jié)果提示ART可抑制SKM-1的DNMT1并恢復(fù)由其介導(dǎo)沉默的下游基因表達(dá)。接下來(lái)的p15INK4b啟動(dòng)子甲基化特異性PCR結(jié)果顯示，ART處理后可以減低p15INK4b啟動(dòng)子甲基化程度，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是啟動(dòng)子非甲基化程度明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明ART恢復(fù)p15INK4b的表達(dá)機(jī)制中DNA去甲基化參與其中，至于結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有以下幾種可能：?jiǎn)?dòng)子甲基化比例基數(shù)較大，啟動(dòng)子非甲基化比例小，基數(shù)低，所以非甲基化比例變化較易體現(xiàn)出來(lái)；p15INK4b在SKM-1細(xì)胞中沉默的機(jī)制除DNA超甲基化外還有其他協(xié)同機(jī)制，如組蛋白修飾，ART作用于DNMT1的同時(shí)也影響了其他機(jī)制，促進(jìn)了p15INK4b的恢復(fù)。抑癌基因p15INK4b在MDS中沉默率高達(dá)89%，常常作為觀察DNMT抑制劑發(fā)揮去甲基化作用的標(biāo)志[14]。其在G1/S點(diǎn)發(fā)揮作用，介導(dǎo)G0/G1期的周期阻滯，ART處理SKM-1細(xì)胞后p15INK4b恢復(fù)，也與前期的報(bào)道周期分析研究結(jié)果相吻合[1]。

本研究結(jié)果顯示，ART通過(guò)抑制DNMT1的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)來(lái)恢復(fù)SKM-1細(xì)胞中的p15INK4b的表達(dá)，進(jìn)而發(fā)揮其抑癌作用。

[1] 喬淑凱，王穎，牛志云.青蒿琥酯對(duì)SKM-1細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的作用及其相關(guān)機(jī)制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2016,119(1):131-137.

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(本文編輯：劉斯靜)

Effects of Artesunate on DNMT1 expression in high-risk MDS cell strain of SKM-1

WANG Ying， NIU Zhi-yun， XING Li-na， QIAO Shu-kai， PAN Ling*

(Department of Hematology, the Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, China)

ObjectiveTo observe the effects of artesunate(ART) on gene expression levels of DNMT1 by using SKM-1 cells as the research object, and provide laboratory evidence in vitro for the usage of ART in MDS treatment.MethodsAfter being treated with ART(1, 5 and 10 μmol/L), DNMT1 mRNA changes in SKM-1 cells were observed with RT-PCR, and the protein expression changes were observed with West Blot. Then, the expression changes of p15INK4b, the DNMT1 targeting gene were observed by using real-time quantitative RT-PCR, and the changes of p15INK4b promoter methylation state were observed by using methylation PCR.ResultsAfter being treated with ART (1, 5 and 10 μmol/L), the difference was statistically significant for DNMT1 gene expression in SKM-1 cells compared with control group (P<0.05), but there was no significant difference in the three dose groups (1， 5 and 10 μmol/L) (P>0.05). As to DNMT1 protein expression, compared with 5μmol/L group, there was significantly lower in the other two groups (1 and 10μmol/L) (P<0.05), and also significantly lower than that in control group (P<0.05). However there was no significant difference among the other groups (P>0.05). After SKM-1 cells being treated with ART for 3 h, 6 h and 12 h, compared with control group, the difference of DNMT1 gene and protein expressions in the three groups (3 h, 6 h and 12 h) was significant (P<0.05). Besides, the difference of gene expression between the two groups (3 h, 6 h) and the 12 h group was also significant (P<0.05). But there was no significant different of protein expression in other treated groups (P>0.05). After SKM-1 cells being treated with ART, p15INK4B mRNA level of SKM-1 cells in the three groups (5 and 10 μmol/L groups, and decitabine group) was statistically higher than that in control group (P<0.05 ), with the level in 10 μmol/L group the highest in the five groups, and the significant difference was only found between 10 μmol/L group and the four groups (control group, 1μmol group, 5 μmol group and decitabine group) (P<0.05). After being treated with ART, p15INK4b promoter methylation level was decreased in SKM-1 cells, but the difference was not significant (P>0.05). On the contrary, the level of promoter unmethylation state in ART group was increased compared with two other groups (control group and the decitabine group) (P<0.05).ConclusionART can restore the expression of p15INK4b by inhibiting DNMT1 transcription and protein expression in SKM-1 cells, and thus to suppress tumor.

myelodysplastic syndromes； artemisinin； methyltransferases

2016-05-10；

2016-08-01

王穎(1972-)，女，河北衡水人，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，從事血液病診治研究。

R551.3

A

1007-3205(2016)12-1374-05

10.3969/j.issn.1007-3205.2016.12.003

*通訊作者