羅微：癌癥“戰(zhàn)士”

本刊記者 徐 賽

生活照

在我們體內(nèi)的淋巴細(xì)胞中，存在一類細(xì)胞，它可以直接殺傷靶細(xì)胞、輔助或抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，對(duì)特異性抗原和促有絲分裂原發(fā)生免疫應(yīng)答并產(chǎn)生細(xì)胞因子等，被稱作是身體中抵御疾病感染、腫瘤形成的“斗士”。它就是胸腺依賴性淋巴細(xì)胞，簡稱為“T細(xì)胞”。

佛山市第一人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究所所長羅微同樣也是一位“戰(zhàn)士”，她與顯微鏡下的“T細(xì)胞”并肩作戰(zhàn)，共同抗擊威脅人類健康的頭號(hào)殺手——癌癥。踏足T細(xì)胞免疫識(shí)別活化的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究領(lǐng)域以來，她先后主持了國家自然科學(xué)基金1項(xiàng)、廣東省自然科學(xué)基金3項(xiàng)、廣東省醫(yī)學(xué)科研基金1項(xiàng)、廣東省創(chuàng)新人才2項(xiàng)、佛山市科技創(chuàng)新平臺(tái)1項(xiàng)、廣州市科技計(jì)劃1項(xiàng)；申請(qǐng)專利14項(xiàng)，已獲授權(quán)5項(xiàng)。

伴著“敢于冒險(xiǎn)、敢于拼搏、敢于挑戰(zhàn)”的精神，羅微懷揣夢(mèng)想，一直堅(jiān)持奮斗在抗癌幕后，潛心研究，以待成果惠及更多的病患。

歲月青蔥 初出茅廬

2003年，從三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系本科畢業(yè)的羅微進(jìn)入葛洲壩水利水電工程集團(tuán)，成為溫泉療養(yǎng)院的一名醫(yī)師，收入叫同齡人羨慕，工作也十分清閑，但安逸的生活無法泯滅她對(duì)夢(mèng)想的追求。1年后，她考入了廣東省南方醫(yī)科大學(xué)（原第一軍醫(yī)大學(xué)），重新邁入大學(xué)校園攻讀碩士。在碩士階段，羅微就已初露鋒芒。她參與國家“973”計(jì)劃項(xiàng)目“疾病相關(guān)的免疫識(shí)別技術(shù)與免疫耐受的研究（2003CB514113）”，建立起檢測(cè)TCR庫多樣性的CDR3譜型GeneScan技術(shù)平臺(tái)，并應(yīng)用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡、CMV感染、肺結(jié)核等疾病研究，發(fā)表論文10篇、SCI收錄7篇。

T細(xì)胞產(chǎn)生的免疫應(yīng)答是細(xì)胞免疫。與靶細(xì)胞特異性結(jié)合，破壞靶細(xì)胞膜，進(jìn)而直接殺傷靶細(xì)胞是細(xì)胞免疫的一種效應(yīng)形式。然而，T細(xì)胞要想準(zhǔn)確地找到宿主細(xì)胞，還需要特殊的介質(zhì)，即特異性識(shí)別抗原并與之結(jié)合的分子結(jié)構(gòu)，稱為“T細(xì)胞抗原受體”（T cell receptor，TCR）。

TCR是一種由α和β鏈或γ和δ鏈聚合而成的雙肽鏈分子。T細(xì)胞在發(fā)育過程中其α、β或γ、δ經(jīng)過基因重排，最終在細(xì)胞表面表達(dá)不同的TCR，在克隆水平顯示各自的特異性，在個(gè)體水平則呈現(xiàn)豐富的多樣性。外周血中約95%的T細(xì)胞表達(dá)αβTCR，TCR的多樣性由α鏈和β鏈的V區(qū)決定，Vα和Vβ各有3個(gè)CDR，但只有CDR3直接和抗原相互作用，故TCR的多樣性主要由CDR3決定。由此可見，檢測(cè)TCR庫多樣性，可了解T細(xì)胞的組成和功能，對(duì)于腫瘤診斷和治療均有重要參考價(jià)值。

在碩士階段建立了CDR3譜型GeneScan技術(shù)平臺(tái)后，羅微沒有停止前進(jìn)的腳步，在隨后的讀博和工作階段，她作為第二負(fù)責(zé)人，在傳染病防治重大專項(xiàng)、國家自然科學(xué)基金和廣東省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目資助下，率先開展TCR庫多樣性及其臨床意義研究，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者TCR庫變化與療效相關(guān)、結(jié)核患者疾病嚴(yán)重度與TCR庫相關(guān)，發(fā)表SCI論文5篇。同時(shí)，她完善了CDR3譜型分析技術(shù)平臺(tái)，在利用該平臺(tái)找到抗原特異TCR的基礎(chǔ)上，建立了TCR基因修飾T細(xì)胞技術(shù)，找到MTB抗原特異性TCR，證實(shí)其修飾的T細(xì)胞具有顯著的抗結(jié)核活性，并首次在國內(nèi)權(quán)威雜志《科學(xué)通報(bào)》上發(fā)表。值得一提的是，僅僅用了兩年的時(shí)間，她就取得了南方醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)博士學(xué)位。

在前期研究的基礎(chǔ)上，羅微繼續(xù)優(yōu)化了技術(shù)平臺(tái)，通過突變C區(qū)9個(gè)氨基酸，促使外源性α、β穩(wěn)定結(jié)合，減少內(nèi)外源性錯(cuò)配，極大地提高了轉(zhuǎn)導(dǎo)TCR的胞膜表達(dá)水平和活性，文章發(fā)表在國際分子醫(yī)學(xué)領(lǐng)域知名期刊J Mol Med上。相關(guān)研究成果獲授權(quán)發(fā)明專利5項(xiàng)，并受到國際同行普遍關(guān)注。據(jù)悉，她現(xiàn)已與美國賓夕法尼亞大學(xué)和澳大利亞臥龍崗大學(xué)開展深入合作。

心懷夢(mèng)想 突飛猛進(jìn)

2012年，羅微入選廣東省“千百十工程”校級(jí)培養(yǎng)對(duì)象；2013年被評(píng)為廣州市“珠江科技新星”；2015年，由南方醫(yī)科大學(xué)調(diào)動(dòng)到佛山市第一人民醫(yī)院工作，出任臨床醫(yī)學(xué)研究所所長。

臨床醫(yī)學(xué)研究所成立于1994年，是佛山市第一人民醫(yī)院大型綜合性重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室研究平臺(tái)?，F(xiàn)有基因工程實(shí)驗(yàn)室、蛋白免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、分子遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室、生物樣本庫等6個(gè)功能實(shí)驗(yàn)區(qū)，實(shí)驗(yàn)室面積約1300平方米，擁有FACSCalibur流式細(xì)胞儀、ABI-7500熒光定量PCR儀、超速冷凍離心機(jī)等先進(jìn)設(shè)備。

2015年6月底，除了流式外，研究所將其他全部臨檢項(xiàng)目移交給了檢驗(yàn)科，專心開展科研并確立了“TCR庫分析及其在T細(xì)胞免疫相關(guān)疾病中的臨床應(yīng)用”和“含IL-10受體阻斷劑的HPV治療性疫苗”兩個(gè)研究方向。羅微主要圍繞前者展開科研，在研究所，她的研究再次上了一級(jí)臺(tái)階。

“鼻咽癌患者T細(xì)胞受體庫多樣性特點(diǎn)及其臨床意義研究”是由羅微主持的一項(xiàng)國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目?！氨茄拾┦菑V東省高發(fā)的惡性腫瘤，早發(fā)現(xiàn)、早治療是提高生存率的關(guān)鍵”，鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展與患者T細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)。項(xiàng)目以鼻咽癌作為切入點(diǎn)，利用已建立的CDR3譜型分析技術(shù)與最新的擴(kuò)增子救援多重PCR和高通量測(cè)序技術(shù)相結(jié)合，建立鼻咽癌患者腫瘤組織和外周血T細(xì)胞亞群治療前后多個(gè)階段TCR庫，分析其多樣性與療效相關(guān)性，為其應(yīng)用于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷提供依據(jù)；同時(shí)，通過分析優(yōu)勢(shì)克隆TCR，建立鼻咽癌特征性TCR譜，為早期診斷提供新的分子標(biāo)識(shí)。項(xiàng)目不僅為TCR庫分析輔助鼻咽癌臨床診斷和治療提供依據(jù)，也為其他T細(xì)胞免疫相關(guān)疾病的同類研究提供模式和平臺(tái)。

目前，依托研究所標(biāo)本庫，項(xiàng)目組對(duì)收集到外周血樣本的400余例鼻咽癌患者的臨床資料進(jìn)行了整理和統(tǒng)計(jì)，篩選出102名鼻咽癌患者作為研究對(duì)象，同時(shí)收集108份非癌鼻咽炎患者外周血樣本作為對(duì)照。依據(jù)課題設(shè)計(jì)，按照實(shí)驗(yàn)方案對(duì)4名鼻咽癌患者和4名非癌患者的樣本進(jìn)行TCR庫構(gòu)建預(yù)實(shí)驗(yàn)。經(jīng)過3個(gè)多月的摸索，終于建立了穩(wěn)定的、自主創(chuàng)新的全序列高通量TCR庫實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)。

團(tuán)隊(duì)合影（前排左四為羅微）

勇于創(chuàng)新 攀登高峰

2016年，羅微入選廣東省“特支計(jì)劃”（高層次人才特殊支持計(jì)劃）科技創(chuàng)新青年拔尖人才，并獲得廣東省自然科學(xué)杰出青年基金資助，在腫瘤細(xì)胞免疫治療領(lǐng)域開展新的探索。

惡性腫瘤近年來不斷呈現(xiàn)年輕化、發(fā)病率和死亡率“三線”走高的態(tài)勢(shì)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國每年新發(fā)癌癥病例312萬，因癌癥死亡人數(shù)180萬，存量癌癥患者約3000萬。“由于起病隱匿，早期癥狀不明顯，絕大多數(shù)惡性腫瘤確診時(shí)已為中晚期，療效仍不盡如人意，相關(guān)腫瘤治療5年生存率長期處于瓶頸，復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移仍是擺在我們面前的現(xiàn)實(shí)問題。手術(shù)、放化療等傳統(tǒng)治療技術(shù)進(jìn)入平臺(tái)期，難以遏制腫瘤快速發(fā)展的態(tài)勢(shì)，所以亟需開發(fā)新的治療手段應(yīng)用于臨床”，羅微道出了腫瘤治療面臨的困境。

于是在已建立的技術(shù)平臺(tái)基礎(chǔ)上，羅微計(jì)劃建立腫瘤抗原特異性TCR儲(chǔ)備庫，并在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證TCR基因修飾T細(xì)胞的抑瘤作用和安全性。以肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌這三種我國最常見的惡性腫瘤為代表，針對(duì)每一癌種建立攜帶腫瘤組織中CTL優(yōu)勢(shì)取用TCR的載體庫，為其應(yīng)用于TCR基因修飾T細(xì)胞過繼免疫治療奠定基礎(chǔ)；其次，利用已建立的高通量全克隆TCR庫檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)，分析癌癥患者腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞亞群的TCR庫，篩選出優(yōu)勢(shì)取用的TCR，將其V（D）J基因人工合成后插入到預(yù)先制備好的載體中；最后，用TCR基因修飾腫瘤患者外周血T細(xì)胞，并鑒定TCR基因修飾的T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性，將能介導(dǎo)較高殺傷活性的TCR納入到腫瘤抗原特異性TCR儲(chǔ)備庫中，作為將來TCR基因修飾T細(xì)胞過繼免疫治療腫瘤的TCR基因來源。目前，項(xiàng)目正在順利開展中。

一路走來，作為女性科研工作者，羅微承受了更多的壓力，但她憑借對(duì)科研事業(yè)的熱愛和堅(jiān)韌的品格將一切默默扛在肩頭。未來，她仍會(huì)以“人無我有、人有我優(yōu)”的創(chuàng)新精神去實(shí)現(xiàn)自己最初的夢(mèng)想，繼續(xù)投身與癌癥的“戰(zhàn)斗”。路漫漫其修遠(yuǎn)兮，靜待碩果滿枝。