鄭紀(jì)虎，禚海成

(揚州大學(xué)第五臨床醫(yī)學(xué)院常熟市第二人民醫(yī)院，江蘇常熟 215500)

?

·臨床研究·

血清Pep5、GP73及GPC-3檢測在原發(fā)性肝細胞癌診斷中的價值

鄭紀(jì)虎，禚海成

(揚州大學(xué)第五臨床醫(yī)學(xué)院常熟市第二人民醫(yī)院，江蘇常熟 215500)

目的 探討血清多肽抗原(Pep5)、高爾基體蛋白73(GP73)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)檢測在原發(fā)性肝細胞癌(PHC)診斷中的價值。方法 選取PHC患者30例(PHC組)，另選擇同期住院的良性肝病患者40例(良性肝病組)和查體健康者30例(正常對照組)。采用ELISA法檢測三組血清Pep5、GP73和GPC-3水平。結(jié)果 PHC組血清Pep5、GP73、GPC-3水平均高于正常對照組(P均<0.05),血清GP73和GPC-3水平高于良性肝病組(P<0.01)。PHC組三項血清標(biāo)志物的陽性檢出率均顯著高于正常對照組和良性肝病組(P均<0.01)；良性肝病組GP73和GPC-3陽性檢出率顯著高于正常對照組(P均<0.05)。三項指標(biāo)的診斷靈敏度以GPC-3最高，排序為GPC-3> Pep5> GP73;而診斷特異度在三項指標(biāo)中Pep5排在首位，排序為Pep5> GP73> GPC-3;準(zhǔn)確性以Pep5最佳，其排序為Pep5> GP73> GPC-3。結(jié)論 血清Pep5、GP73、GPC-3檢測各有優(yōu)缺點，三項標(biāo)志物聯(lián)合檢測有助于PHC的早期診斷。

原發(fā)性肝細胞癌；多肽抗原Pep5；高爾基體蛋白73；磷脂酰肌醇蛋白聚糖3

近年統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，全球肝癌新發(fā)病例74.8萬人，死亡病例69.6萬人，新發(fā)病例與死亡病例中國占有率高達50%[1]。有研究[2]表明，在全世界肝癌患者中，原發(fā)性肝細胞癌(PHC)是主要的組織學(xué)類型(70%～85%)。尋找早期診斷的特異性標(biāo)志物成為近年研究熱點。血清甲胎蛋白(AFP)因其靈敏度及特異性問題應(yīng)用受限。為進一步探討相關(guān)血清指標(biāo)水平變化與PHC發(fā)生和病情進展的關(guān)系，我們測定了30例PHC患者的血清多肽抗原(Pep5)、高爾基體蛋白73(GP73)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)水平，旨在探討血清Pep5、GP73和GPC-3水平測定在PHC診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 PHC患者30例(PHC組)，男20例、女10例，年齡38～72(58.6±5.8)歲?；颊咝薪?jīng)B超、CT或MRI等影像學(xué)檢查，提示肝臟占位病灶或肝外轉(zhuǎn)移灶，且均經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為PHC。另選擇同期住院的良性肝病患者40例(良性肝病組)，男30例、女10例，年齡30～68(53.8±5.6)歲。原發(fā)疾病包括慢性乙型肝炎20例，肝硬化11例，丙型肝炎9例。均符合2000年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的“病毒性肝炎防治方案”[3]診斷標(biāo)準(zhǔn)。選擇同期我院體檢中心查體健康者30例作為正常對照組，男20例、女10例，年齡(56±5.4)歲。排除炎癥和全身性器質(zhì)性疾病，肝、腎功能的血清學(xué)指標(biāo)均在正常范圍。

1.2 血清Pep5、GP73和GPC-3測定 采用無添加劑的一次性真空采血管分別抽取三組空腹靜脈血6 mL，置25 ℃室溫自然凝固后注入干燥潔凈的玻璃試管中，均于2 500 r/min，2～6 ℃低溫離心10 min，分離血漿和血清，將其注入干燥潔凈的試管中，加蓋塞緊，置于-70 ℃低溫冰箱中保存待測。血清Pep5、GP73和GPC-3水平測定均采用ELISA法；測定儀器為由美國生產(chǎn)的FAMIER-150型全自動酶標(biāo)分析系統(tǒng)。試劑均購自歐蒙(德國)醫(yī)學(xué)實驗診斷有限公司。嚴(yán)格按說明書操作。

1.3 陽性值判定 以PHC組、良性肝病組患者血清指標(biāo)的測定值>對照組均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差的數(shù)值判定為陽性。

1.4 診斷價值指標(biāo)計算 對照組例數(shù)=正常對照組例數(shù)+良性肝病組例數(shù)；靈敏度=肝癌組陽性例數(shù)/肝癌組總例數(shù)；特異度=對照組陰性例數(shù)/對照組總例數(shù)；假陽性率=對照組陽性例數(shù)/對照組總例數(shù)；假陰性率=肝癌組陰性例數(shù)/肝癌組總例數(shù)；準(zhǔn)確性=真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)/真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，組間比較采用t檢驗，陽性率的比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清Pep5、GP73、GPC-3水平比較PHC組血清Pep5、GP73、GPC-3水平均高于正常對照組(P均<0.05),血清GP73和GPC-3水平高于良性肝病組(P均<0.01)。見表1。

表1 三組血清Pep5、GP73、GPC-3水平比較

2.2 三組血清Pep5、GP73、GPC-3陽性檢出率比較 PHC組血清Pep5、GP73、GPC-3陽性檢出率分別為86.67%(26/30)、80.00%(24/30)、90.00%(27/30)，均顯著高于正常對照組(3.33%、0%、3.33%)和良性肝病組(5.00%、12.50%、15.00%)，P均<0.01；良性肝病組GP73和GPC-3陽性檢出率顯著高于正常對照組(P均<0.05)。

2.3 血清Pep5、GP73、GPC-3診斷PHC臨床價值比較 診斷靈敏度以GPC-3最高，排序為GPC-3> Pep5> GP73;而診斷特異度在三項指標(biāo)中Pep5排在首位，列序呈Pep5> GP73> GPC-3；而準(zhǔn)確性則以Pep5為最佳，其順序為Pep5> GP73> GPC-3。見表2。

表2 三項血清指標(biāo)臨床診斷PHC價值參數(shù)分析(%)

3 討論

近年來，人們一直致力于研究PHC的早期診斷方法。作為診斷PHC“金指標(biāo)”的肝組織穿刺活檢這一創(chuàng)傷性檢查方法因患者的接受度和方法本身存在多種因素影響而應(yīng)用受限。診斷PHC的血清生物學(xué)指標(biāo)研究從未間斷，人們從血清AFP開始逐漸探索出了與其他胚胎性、糖類抗原套餐式序貫檢測以提高臨床診斷價值的方法一直沿用至今，但結(jié)果不甚滿意。

國外基礎(chǔ)研究證實，血清多肽的相對分子質(zhì)量一般低于10 kD，作為體內(nèi)蛋白的代謝產(chǎn)物，蘊含著豐富的疾病代謝信息，為腫瘤早期診斷提供了豐富的標(biāo)志物資源，其聯(lián)用有可能為腫瘤等重大疾病的預(yù)警提供重要信息[4]，隨著血清多肽組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，血清多肽用于疾病的診斷越來越受到重視。Villanueva等[5]研究發(fā)現(xiàn)，血清Pep5可分別作為前列腺癌、乳腺癌和膀胱癌等腫瘤診斷的多肽標(biāo)志物之一。Huang等[6]研究認(rèn)為，肝臟損害和炎癥反應(yīng)是肝纖維化、肝硬化的病理學(xué)基礎(chǔ)，亦是發(fā)展為肝癌的必經(jīng)過程。盡管對于肝硬化轉(zhuǎn)為肝癌概率的報道不盡相同，多數(shù)學(xué)者依然認(rèn)為肝硬化是發(fā)生肝癌的最大風(fēng)險因素[7，8]。本研究結(jié)果提示，PHC組、良性肝病組血清Pep5水平顯著高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；PHC組與良性肝病組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。陽性檢出率PHC組顯著高于正常對照組及良性肝病組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。診斷靈敏度Pep5位居第二(86.67%),特異度位居第一(95.71%),準(zhǔn)確性位居第一(96.87%)。雖靈敏度不及GPC-3，但特異度(真陰性)和準(zhǔn)確性均位居第一，且假陽性率最低(4.29%)。認(rèn)為血清Pep5參與了慢性肝病尤其是演變?yōu)镻HC的病理進展過程，是近年來研究發(fā)現(xiàn)的一項很有前景的PHC診斷血清多肽標(biāo)志物。

GP73又稱高爾基體Ⅱ型跨膜糖蛋白，存在于高爾基體上。正常情況下通過一個膜生成結(jié)構(gòu)域錨定于順面高爾基體膜上。在弗林蛋白酶的作用下發(fā)生水解反應(yīng)，裂解其胞外結(jié)構(gòu)域，并釋放至細胞外液中。在正常肝臟，GP73主要于膽管上皮細胞中表達，而在肝細胞則很少表達甚至不表達。有研究[9]顯示，PHC患者GP73陽性率64%，AFP陽性率52%，兩項指標(biāo)聯(lián)合檢測陽性率可達88%,GP73水平變化不受癌腫大小、數(shù)量侵襲等因素影響；與AFP無相關(guān)性，故認(rèn)為其高表達是判斷PHC的一個獨立因素。本研究結(jié)果顯示，PHC組血清GP73水平及GP73陽性檢出率顯著高于正常對照組和良性肝病組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義,診斷靈敏度位居第三(80.00%),特異度和準(zhǔn)確性均位居第二(92.86%和94.68%)；雖靈敏度不及Pep5、GPC-3，然而特異度和準(zhǔn)確性均位居第二；假陽性率低于GPC-3(7.14%)。可見在PHC的診斷中GP73實用價值同樣優(yōu)于血清AFP測定。

GPC-3是一種參與細胞增殖和胚胎發(fā)育的細胞膜糖蛋白，在細胞增殖與分化過程中發(fā)揮重要作用。其主要通過結(jié)合胞外基質(zhì)、生長因子和蛋白酶等對細胞生長分化及腫瘤形成和轉(zhuǎn)移起關(guān)鍵影響。Capurro等[10]發(fā)現(xiàn)在34例PHC患者中有18例(53%)GPC-3 蛋白水平明顯升高，而在20例肝硬化合并慢性肝炎患者中僅1例GPC-3蛋白水平升高。本研究結(jié)果顯示，PHC組血清GPC-3及陽性檢出率顯著高于正常對照組和良性肝病組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。診斷靈敏度位居第一(90.00%),特異度、準(zhǔn)確性和假陽性率均位居第三。PHC的診斷意義是靈敏度重于特異度和準(zhǔn)確性，早期發(fā)現(xiàn)可通過影像學(xué)等手段共同協(xié)診。同時從準(zhǔn)確性數(shù)據(jù)來看，三項指標(biāo)間差異均較小。由此，筆者認(rèn)為本指標(biāo)依然不失為一項PHC診斷的新型血清學(xué)標(biāo)志物。

綜上所述，血清Pep5、GP73、GPC-3診斷參數(shù)均優(yōu)于以往AFP及相關(guān)糖類抗原測定，同時又各自存在一定不足；三項標(biāo)志物聯(lián)合檢測方法有助于PHC診斷。

[1] Jemal A， Bray F， Center MM， et al． Global cancer statistics[J]． Cancer J Clin， 2011,61(2):69-90．

[2] Perz JF， Armstrong GL, Farringlon LA， et al． The contributions of hepatitis B virus and hepatitis C virus infctions to cirrhosis and prmary liver cancer worldwide[J]． J Hepatal， 2006，45(4)：529-538．

[3] 中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會，肝病學(xué)分會.病毒性肝炎防治方案[J].中華傳染病雜志，2001，19(1)：56-61.

[4] Lopez MF, Mikulskis A, Kuzdzal S， et al． A novel, high-throughput worknow for discovery and identification of serum carrier protein-bound peptide biomarker candidates in ovarian cancer samples[J]． Clin Chem， 2007，53(6)：1067-1074．

[5] Villanueva J, Shaffer DR, Philip J, et al. Differential exoprotease activities confer tumor-speci- fic serum peptidome patterns[J]. J Clin Invest, 2006,116(1):271-284．

[6] Huang T, Wang J, Cai YD, et al. Hepatitis C virus network based classification of hepatocellular cirrhosis and carcinoma[J]. PLoS One, 2012,7(4)：e34460.

[7] Gish RG. Hepatocellular carcinoma ：overcoming challenges in disease management[J]. Clin Gas Hepatol, 2006,4(4):252-261．

[8] Debruyne EN, Delanghe JR. Diagnosing and monitoring hepatocellular carcinoma with alpha- fetoprotein:new aspects and applications[J]. Clin Chim Acta, 2008,359(12):12-26．

[9] Benzoni E, Lorenzin D, Favero A, et al. Liver resection for hepatocellular carcinoma:a maultivariate analysis of factors associated with improved prognosis．The role of clinical, pathologncal and surgical related factor[J]. Tumori, 2007,93(3):264．

[10] Capurro M， Wanless IR， Sherman M， et al． Glypican3：A novel serum and histochemical marker for hepatocellular Carcinoma[J]. Gastroenterology, 2003，125(1):89-97．

常熟市科技計劃項目(CSWS201305)。

鄭紀(jì)虎(E-mail:wxzhengjh@sina.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.41.012

R735.7

B

1002-266X(2016)41-0041-03

2016-04-05)