劉曉婷，陳維達(dá)，陳澤濤，王海濤

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南250014；2濰坊市中醫(yī)院;3山東省中醫(yī)院)

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加味滌痰湯灌胃對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響

劉曉婷1,2，陳維達(dá)3，陳澤濤3，王海濤2

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南250014；2濰坊市中醫(yī)院;3山東省中醫(yī)院)

目的 探討加味滌痰湯灌胃對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響。方法 選取SPF級(jí)雄性SD大鼠90只，分為假手術(shù)組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組5組，每組大鼠16只。采用可逆性大鼠腦中動(dòng)脈閉塞線栓法進(jìn)行右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)，于造模成功后24 h假手術(shù)組與模型組灌胃生理鹽水，中藥高劑量組、中藥低劑量組分別灌胃加味滌痰湯1.92、0.96 g/(kg·d)，西藥組灌胃吡拉西坦片0.5 g/(kg·d)，灌胃容積為10 mL/kg；1次/d，連續(xù)給藥7 d。各組于治療開(kāi)始前及治療結(jié)束24 h內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試并記錄，于給藥周期結(jié)束24 h內(nèi)，取腦組織切片、染色、拍照，計(jì)算各組梗死體積比及缺血側(cè)大腦水腫度。結(jié)果 治療后神經(jīng)障礙評(píng)分及平衡木行走實(shí)驗(yàn)得分中藥高劑量組、西藥組與模型組比較明顯減低(P均<0.05)，中藥低劑量組最為顯著(P<0.01)；中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組較模型組自發(fā)活動(dòng)次數(shù)明顯增多(P均<0.05)，中藥高劑量組最為顯著(P<0.01)，中藥低劑量組及西藥組亦明顯增多(P均<0.05)，中藥高、低劑量組與西藥組比較，P均<0.05；中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組與模型組腦梗死體積相比均明顯降低(P均<0.01)；中藥低劑量組、西藥組缺血側(cè)大腦水腫度明顯降低(P均<0.01)。結(jié)論 加味滌痰湯灌胃對(duì)缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能有保護(hù)作用，能提高受累肢體肌力、恢復(fù)精巧運(yùn)動(dòng)，減少腦梗死體積。

腦缺血再灌注損傷；加味滌痰湯；中藥；神經(jīng)保護(hù)；大鼠

缺血性腦卒中是腦血管病中最常見(jiàn)的一種類(lèi)型，約占全部腦血管病的80%。腦缺血一定時(shí)間恢復(fù)血液供應(yīng)后，其功能不但未能恢復(fù)，卻出現(xiàn)了更加嚴(yán)重的腦功能障礙，稱(chēng)為腦缺血再灌注(CIR)損傷[1]。缺血再灌注損傷是缺血性腦卒中導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙的主要病理基礎(chǔ)，缺血性腦卒中屬于中醫(yī)“中風(fēng)”范疇，出自《濟(jì)生方》的滌痰湯有滌痰開(kāi)竅之功，是治療急性期缺血性腦卒中的有效方劑。2015年1月～2016年1月，我們探討了加味滌痰湯灌胃對(duì)CIR損傷大鼠神經(jīng)功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性SD大鼠90只，SPF級(jí)，體質(zhì)量140～160 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK(京)2012-0001，質(zhì)量合格證號(hào)NO.011400700055671。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蘇木色精、曙紅Y、甲苯胺藍(lán)等試劑均為分析純，購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。實(shí)驗(yàn)儀器系統(tǒng)冠狀切腦，型號(hào)68709，深圳瑞沃德公司；LEICA RM2245切片機(jī)，LEICA HI1220烤片機(jī)，LEICA XL全自動(dòng)染色機(jī)，OLYMPUS BX51 生物顯微鏡；FED53恒溫干燥箱購(gòu)自德國(guó)Binder公司；LEICA ASP200s全自動(dòng)全封閉脫水機(jī)，LEICAEG1150H包埋機(jī)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱購(gòu)自上海培因公司；自發(fā)活動(dòng)視頻分析系統(tǒng)和大小鼠抓力測(cè)定儀，購(gòu)自北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司。中藥加味滌痰湯(膽南星12 g、石菖蒲、橘紅、梔子、枳實(shí)各10 g，半夏9 g，水蛭、生大黃各6 g)，采用北京康仁堂藥業(yè)全成分中藥配方顆粒，每劑9.6 g。西藥吡拉西坦片(0.4 g/片)購(gòu)自山東仁和堂藥業(yè)有限公司。

1.2 CIR損傷模型建立與分組 以10%水合氯醛按3.5 mL/kg麻醉大鼠，按照Clark 等[2]的方法，采用可逆性大鼠腦中動(dòng)脈閉塞線栓法進(jìn)行右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)手術(shù)，縫合皮膚切口并消毒。假手術(shù)組除不插入線栓外過(guò)程相同。缺血90 min后拔出栓線進(jìn)行再灌注[3]，再灌注90 min時(shí)進(jìn)行神經(jīng)功能障礙評(píng)分，參照Longa等[4]制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，神經(jīng)功能評(píng)分為1～3分的MCAO大鼠和0分的假手術(shù)大鼠為本實(shí)驗(yàn)選用。實(shí)驗(yàn)共分為5組：假手術(shù)組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組，假手術(shù)組選用0分的假手術(shù)大鼠16只，其余4組隨機(jī)選取造模成功大鼠各16只；假手術(shù)組與模型組灌胃生理鹽水，中藥高、低劑量組分別灌胃加味滌痰湯1.92、0.96 g/(kg·d)，西藥組灌胃吡拉西坦片0.5 g/(kg·d)，灌胃容積為10 mL/kg；于造模成功后24 h給藥，1次/d，連續(xù)給藥7 d，固體飼料和水自由攝取。

1.3 神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試 各組于治療開(kāi)始前及治療結(jié)束24 h內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試并記錄。①神經(jīng)功能障礙評(píng)分：參照Longa等[4]制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。②平衡木行走實(shí)驗(yàn)[5]：測(cè)定大鼠運(yùn)動(dòng)整合及協(xié)調(diào)能力，術(shù)前1周每天早晚各訓(xùn)練1次，每次10 min，使其能順利在平橫木上行走。平衡木長(zhǎng)80 cm、寬2.5 cm，平放在距離地面高10 cm處，參考Feeney的計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)。③自發(fā)活動(dòng)次數(shù)和抓力：將每只大鼠單獨(dú)置于暗室之中，采用自發(fā)活動(dòng)視頻分析系統(tǒng)記錄10 min中內(nèi)的自發(fā)活動(dòng)次數(shù)，并用抓力測(cè)定儀對(duì)大鼠逐一進(jìn)行抓力測(cè)試。術(shù)前1周每天早晚各訓(xùn)練1次，使大鼠適應(yīng)暗室及對(duì)抓力板抓握。④腦梗死體積比和缺血側(cè)大腦水腫度：各組給藥周期結(jié)束24 h內(nèi)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試后將大鼠斷頭取腦，取用的腦組織置于冰浴中迅速切片，切片厚度3 mm，37 ℃避光TTC染色約30 min，取出腦片，拍照，用Image-Pro Plus 6.0軟件處理圖片，計(jì)算各組梗死體積比，同時(shí)計(jì)算缺血側(cè)大腦水腫度[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較采用LSD法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組治療前后神經(jīng)功能障礙評(píng)分、平衡木行走實(shí)驗(yàn)得分比較 見(jiàn)表1。

表1 各組治療前后神經(jīng)功能障礙評(píng)分、平衡木行走實(shí)驗(yàn)得分比較(分，

2.2 各組治療前后自發(fā)活動(dòng)次數(shù)和抓力測(cè)量結(jié)果比較 見(jiàn)表2。

2.3 各組治療后腦梗死體積比和缺血側(cè)大腦水腫度比較 見(jiàn)表3。

表2 各組治療前后自發(fā)活動(dòng)次數(shù)和抓力比較

表3 各組治療后腦梗死體積比和缺血側(cè)大腦水腫度比較

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為中風(fēng)的發(fā)生與“風(fēng)、火、痰、瘀、虛”密切相關(guān)。其中痰是人體水液代謝失常而形成的病理產(chǎn)物，是中風(fēng)發(fā)生過(guò)程中重要的致病因素，并能影響疾病的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸?，F(xiàn)代研究表明，CIR損傷是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多級(jí)聯(lián)的病理生理過(guò)程，與自由基的過(guò)度形成、神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、興奮性氨基酸的細(xì)胞毒作用、炎性反應(yīng)和細(xì)胞凋亡等多種機(jī)制相關(guān)[1]。目前研究應(yīng)用的神經(jīng)保護(hù)劑多是針對(duì)CIR損傷中的某一個(gè)環(huán)節(jié)起效[7]，但由于CIR損傷機(jī)制的復(fù)雜性，可能使用任何阻斷單一環(huán)節(jié)的藥物療效不佳。中藥復(fù)方具有化學(xué)成分多樣性、生物活性廣泛性的特性，在阻斷CIR損傷發(fā)生發(fā)展中可從多靶點(diǎn)、多層次、多環(huán)節(jié)發(fā)揮作用。

滌痰湯主治“中風(fēng)痰迷心竅，舌強(qiáng)不能言”，臨床對(duì)急性缺血性腦卒中的治療有確切療效[8]。本研究采用加味滌痰湯，方中半夏燥濕化痰，膽南星祛風(fēng)痰而止痙，共為君藥；橘紅化痰理氣，枳實(shí)主降氣、行痰濕，石菖蒲祛痰開(kāi)竅；梔子清熱瀉火，大黃瀉熱通便，水蛭活血逐瘀通絡(luò)；諸藥合用具有豁痰開(kāi)竅、醒神通絡(luò)的功效。本研究發(fā)現(xiàn)，中藥高、低劑量組、西藥組大鼠在用藥周期結(jié)束后神經(jīng)功能障礙評(píng)分、平衡木行走實(shí)驗(yàn)得分、10 min內(nèi)自發(fā)活動(dòng)次數(shù)及抓力均較模型組有所改善，表明滌痰湯無(wú)論高、低劑量均能有效改善MCAO大鼠神經(jīng)功能，提高受累肢體肌力，恢復(fù)受累肢體精巧運(yùn)動(dòng)功能。從藥物應(yīng)用劑量上看，中藥高、低劑量組均有明顯神經(jīng)保護(hù)作用，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，無(wú)明顯的量效關(guān)系。中藥高、低劑量組及西藥組均能有效減少腦梗死體積，中藥低劑量組、西藥組缺血側(cè)大腦水腫度明顯降低，但中藥高劑量組腦水腫度未見(jiàn)明顯降低，這與神經(jīng)行為學(xué)指標(biāo)的改善并不完全一致。實(shí)驗(yàn)中往往以腦梗死體積的變化作為評(píng)估干預(yù)藥物藥效的首選標(biāo)準(zhǔn)，但亦常會(huì)有腦缺血模型動(dòng)物的行為變化與腦組織病理改變間難以找到相關(guān)的聯(lián)系[9]，可能與壞死周?chē)[區(qū)神經(jīng)細(xì)胞功能未完全喪失有關(guān)。

本研究證實(shí)，加味滌痰湯灌胃對(duì)CIR損傷大鼠神經(jīng)功能有保護(hù)作用，能提高受累肢體肌力、恢復(fù)精巧運(yùn)動(dòng)、減少腦梗死體積。

[1] Buja LM. Myocardial ischemia and reperlusion injury[J]. Cardiovasc Pathol, 2005(14):170-175.

[2] Clark WM, Lessov NS, Dixon MP, et al. Monofilament intrauminal middle cerebral artery occlusion in the mouse[J]. Neurol Res, 1997,19(6):641-648.

[3] Yunoki T, Deguchi K, Omote Y, et al. Anti-oxidative nutrient rich diet protects against acute ischemic brain damage in rats [J]. Brain Res, 2014,1587(2):33-39.

[4] Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without cranientomy in rats[J]. Stroke, 1989,20(1):84-91.

[5] Altumbabic M, Peeling J, Bigio MR, et al．Intracerebral hemorrhage in the rat: effects of hematoma aspiration[J]. Stroke, 1998,29(7):1917-1923．

[6] Hua Q, Zhu XL, Li PT, et al. The inhibitory effects of cholalic acid and hyodeoxycholalic acid on the expression of TNFalpha and IL-1beta after cerebral ischemia in rats[J]. Arch Pharm Res, 2009,32(1):65-73.

[7] Martinmez Vila E, Sieira PI. Acute stroke therapy: translating preclinical neuroprotection to therapeutic reality[J]. Cerebrovasc Dis, 2001,11(5):60-70.

[8] 王忠仁.加味滌痰湯配合西醫(yī)療法治療急性缺血性中風(fēng)60例臨床觀察[J].河北中醫(yī),2003,25(9):701-702.

[9] Hattori K, Lee H, Hurn PD, et al. Cognitive Deficits After Focal Cerebral Ischemia in Mice Editorial Comment[J]. Stroke, 2000,31(9):1939-1944.

陳澤濤(E-mail:zetaochen2007@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.41.010

R651.1

A

1002-266X(2016)41-0036-03

2016-05-14)