王 杏，王 超，宋光耀，費雯婕，劉小娜，張 哲，馬 歡

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·論著·

氧化苦參堿對高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗載脂蛋白E基因敲除小鼠肝臟膽固醇代謝調(diào)控基因的影響

王 杏，王 超，宋光耀，費雯婕，劉小娜，張 哲，馬 歡

目的 探討氧化苦參堿對高脂飲食誘導(dǎo)載脂蛋白E(ApoE)基因敲除(ApoE-/-)小鼠模型肝臟膽固醇代謝調(diào)控基因的影響。方法 2014年4月—2015年1月，將17只SPF級C57BL/6J小鼠作為正常組(NC組)，給予基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)；68只SPF級ApoE-/-小鼠給予高脂飼料飼養(yǎng)；均喂養(yǎng)16周后，再將高脂飼料喂養(yǎng)的ApoE-/-小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為胰島素抵抗模型組(IR組)、氧化苦參堿低劑量組(OXYL組)、氧化苦參堿中劑量組(OXYM組)、氧化苦參堿高劑量組(OXYH組)，每組17只，OXYL、OXYM、OXYH組分別給予氧化苦參堿25 mg·kg-1·d-1、50 mg·kg-1·d-1、100 mg·kg-1·d-1連續(xù)灌胃8周，各組實驗過程中均給予等體積的純水。分別檢測各組小鼠葡萄糖輸注率(GIR)，空腹血糖(FBG)水平，血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平，空腹胰島素(FINS)水平，并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，并檢測肝臟組織TC水平。采用RT-qPCR和Western blotting法檢測肝臟組織固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-2(SREBP-2)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、胰島素誘導(dǎo)基因-2(INSIG2)、羥甲基戊二酸單酚輔酶A還原酶(HMGCR)、低密度脂蛋白受體(LDLr)mRNA及其蛋白水平。結(jié)果 IR組FBG水平，血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均高于NC組(P<0.05)；OXYL組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均低于IR組，OXYM、OXYH組FBG水平，血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均低于IR組(P<0.05)。IR組GIR低于NC組，OXYL組、OXYM組、OXYH組GIR均高于IR組(P<0.05)。IR組FINS水平、HOMA-IR均高于NC組(P<0.05)；OXYL組HOMA-IR低于IR組(P<0.05)；OXYM、OXYH組FINS水平、HOMA-IR均低于IR組(P<0.05)。IR組肝臟組織SREBP-2、HMGCR、LDLr mRNA及其蛋白水平低于NC組，SCAP、INSIG2 mRNA及其蛋白水平高于NC組(P<0.05)；OXYL組肝臟組織LDLr mRNA及其蛋白水平高于IR組(P<0.05)；OXYM、OXYH組SREBP-2、HMGCR、LDLr mRNA及其蛋白水平高于IR組，SCAP、INSIG2 mRNA及其蛋白水平低于IR組(P<0.05)。結(jié)論 氧化苦參堿能通過調(diào)控肝臟膽固醇相關(guān)基因的表達(dá)改善高脂飲食誘導(dǎo)ApoE-/-的血糖、血脂和胰島素抵抗情況。

氧化苦參堿；膳食，高脂；ApoE-/-小鼠；胰島素抵抗；膽固醇

王杏，王超，宋光耀，等.氧化苦參堿對高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗載脂蛋白E基因敲除小鼠肝臟膽固醇代謝調(diào)控基因的影響[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2016，19(33)：4067-4072.[www.chinagp.net]

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氧化苦參堿(oxymatrine)是豆科植物苦參的主要生物堿之一，具有提高免疫、抗感染、保護(hù)肝細(xì)胞、降脂等藥理作用[1]，在臨床上主要用于脂肪肝的治療。任路平等[2]研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿可改善高果糖誘導(dǎo)的胰島素抵抗，但作用機(jī)制尚不清楚。胰島素抵抗的最早表現(xiàn)和重要特征是脂代謝紊亂[3]，而動脈粥樣硬化和血管病變的病理基礎(chǔ)是膽固醇代謝紊亂。近年研究表明，固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBPs)代謝通路在體內(nèi)膽固醇代謝平衡中起重要作用[4]。本實驗采用高脂喂養(yǎng)具有脂代謝紊亂遺傳背景的載脂蛋白E(ApoE)基因敲除(ApoE-/-)小鼠建立胰島素抵抗模型[5]，觀察胰島素抵抗后肝臟固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-2-固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白-胰島素誘導(dǎo)基因-2(SREBP-2-SCAP-INSIG2)代謝通路的改變及下游膽固醇代謝重要基因3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGCR)和低密度脂蛋白受體(LDLr)表達(dá)的變化。同時，研究氧化苦參堿對高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗ApoE-/-小鼠肝膽固醇代謝調(diào)控基因的影響，為尋找改善胰島素抵抗的藥物及闡明其機(jī)制提供新的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物與飼料 雄性SPF級8周齡C57BL/6J小鼠17只、ApoE-/-小鼠68只，體質(zhì)量18～20 g，購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部，動物合格證號SCXK(京)2011-0012。基礎(chǔ)飼料熱量：蛋白質(zhì)24.2%，脂肪10.3%，碳水化合物65.5%；高脂飼料熱量：蛋白質(zhì)20.1%，脂肪59.8%，碳水化合物20.1%。

1.1.2 實驗藥品與試劑 氧化苦參堿(苦參素膠囊)購于正大天晴藥業(yè)股份有限公司；胰島素放射免疫試劑盒購自上海研晶生物科技有限公司；SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr抗體購于abcam公司；引物購自生工生物工程(上海)股份有限公司。

1.1.3 實驗儀器 DFM-96型放射免疫γ計數(shù)器購自眾成機(jī)電技術(shù)開發(fā)有限責(zé)任公司；凝膠成像分析儀購自美國Biorad公司；ABI 7300實時熒光定量PCR儀。

1.2 方法

1.2.1 動物分組與給藥 2014年4月—2015年1月，將C57BL/6J小鼠作為正常組(NC組)，給予基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)；ApoE-/-小鼠給予高脂飼料飼養(yǎng)；均喂養(yǎng)16周后將高脂飼料喂養(yǎng)的ApoE-/-小鼠68只按照隨機(jī)數(shù)字表法分為胰島素抵抗模型組(IR組)、氧化苦參堿低劑量組(OXYL組)、氧化苦參堿中劑量組(OXYM組)、氧化苦參堿高劑量組(OXYH組)，每組17只，OXYL、OXYM、OXYH組分別給予氧化苦參堿25 mg·kg-1·d-1、50 mg·kg-1·d-1、100 mg·kg-1·d-1連續(xù)灌胃8周(用純水溶解混懸)，各組實驗過程中給予等體積的純水。

1.2.2 高胰島素-正葡萄糖鉗夾實驗 NC組、IR組、OXYL組、OXYM組、OXYH組分別隨機(jī)抽取7只小鼠，采用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，Dow Corning Silastic鉑金硅膠管進(jìn)行右頸動脈、右頸靜脈插管，導(dǎo)管經(jīng)皮下由耳后引出并固定于頸后皮膚，肝素封管。待小鼠恢復(fù)后，清醒狀態(tài)下測定基礎(chǔ)血糖值，以4 mU·kg-1·min-1勻速靜脈滴注胰島素和30%葡萄糖溶液，使血糖維持在(5.0±0.5)mmol/L，取穩(wěn)態(tài)下5次葡萄糖輸注率(GIR)的平均值作為小鼠胰島素敏感性的評價指標(biāo)。

1.2.3 血清生化指標(biāo)、空腹胰島素(FINS)、肝臟組織膽固醇含量測定及胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)計算 取各組剩余的10只小鼠，先稱重，后采集血清和肝臟組織。采用全自動生化分析儀檢測各組小鼠空腹血糖(FBG)水平，血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平，放射免疫法檢測FINS水平；HOMA-IR=FBG×FINS/22.5。制備肝臟組織勻漿，酶法檢測肝臟組織TC水平。

1.2.4 RT-qPCR檢測肝臟組織SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr mRNA表達(dá)水平 取肝臟組織勻漿，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄后，采用ABI 7300實用熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。SREBP-2引物中上游引物：5′-GGCTTCTCTCCCTATTCCATT-3′，下游引物：5′-TCATCCTTGACCTTTGCG-3′，產(chǎn)物片段71 bp；SCAP引物中上游引物：5′-CAAAGAGGAGATTGGCATTG-3′，下游引物：5′- TGCGTGTGGAGAAGTAGATGT-3′，產(chǎn)物片段86 bp；INSIG2引物中上游引物：5′-TGTCCGTTCTTGGTTGCC-3′，下游引物：5′-GCATTCATACATTGCCAGTTGA-3′，產(chǎn)物片段85 bp；HMGCR引物中上游引物：5′-ACCTGGCTTGAAACACCTG-3′，下游引物：5′-CCTGGACTGGAAACGGATA-3′，產(chǎn)物片段132 bp；LDLr引物中上游引物:5′-TGAAGAATGTGGTGGCTCTC-3′，下游引物：5′-ACTGATGATGGTGTCGTAGGA-3′，產(chǎn)物片段131 bp；GAPDH引物中上游引物：5′-GACCCCTTCATTGACCTCAAC-3′，下游引物：5′-CGCTCCTGGAAGATGGTGAT-3′，產(chǎn)物片段138 bp。PCR反應(yīng)條件：95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，共30個循環(huán)；最后72 ℃延伸5 min。以GAPDH為內(nèi)參，對照組設(shè)為1，采用相對定量法(2-ΔΔCt法)計算目的基因mRNA水平。

1.2.5 Western blotting法檢測肝臟組織SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr蛋白表達(dá)水平 取肝臟組織勻漿100 mg，加入組織細(xì)胞裂解液進(jìn)行裂解，提取總蛋白，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，采用半干轉(zhuǎn)膜法將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂奶粉封閉，加入一抗，孵育過夜，洗膜，加入相應(yīng)的二抗反應(yīng)，化學(xué)發(fā)光法檢測，凝膠成像分析儀分析條帶中的灰度值，計算目的條帶與以GAPDH為內(nèi)參的條帶的灰度比值，即各蛋白的水平。

2 結(jié)果

2.1 5組小鼠體質(zhì)量及血清生化指標(biāo)比較 5組體質(zhì)量、FBG水平及血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中IR組體質(zhì)量、FBG水平及血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYL組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均低于IR組，OXYM、OXYH組體質(zhì)量、FBG水平及血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均低于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

表1 5組小鼠體質(zhì)量和血清生化指標(biāo)比較Table 1 Comparsion of body mass and serum biochemical indexes among 5 groups

2.2 5組小鼠GIR、FINS水平、HOMA-IR比較 NC組、IR組、OXYL組、OXYM組、OXYH組GIR分別為(26.65±2.88)、(16.46±1.62)、(18.53±1.62)、(20.13±1.84)、(21.33±2.26)，5組GIR比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=26.65，P<0.01)；其中IR組GIR低于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYL組、OXYM組、OXYH組GIR均高于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。5組FINS水平、HOMA-IR比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中IR組FINS水平、HOMA-IR均高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYL組HOMA-IR低于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYM、OXYH組FINS水平、HOMA-IR均低于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表2)。2.3 5組小鼠肝臟組織TC水平比較 5組肝臟組織TC水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中IR組肝臟組織TC水平高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYL、OXYM、OXYH組肝臟組織TC水平均低于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表3)。

表2 5組小鼠FINS水平、HOMA-IR比較Table 2 Comparison of FINS level,HOMA-IR among 5 groups

表3 5組小鼠肝臟組織TC水平比較Table 3 Comparison of TC level in liver tissue among 5 groups

2.4 5組小鼠肝臟組織SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr mRNA水平比較 5組肝臟組織SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr mRNA水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中IR組肝臟組織SREBP-2、HMGCR、LDLr mRNA水平低于NC組，SCAP、INSIG2 mRNA水平高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYL組肝臟組織LDLr mRNA水平高于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYM、OXYH組SREBP-2、HMGCR、LDLr mRNA水平高于IR組，SCAP、INSIG2 mRNA水平低于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表4)。

2.5 5組小鼠肝臟組織SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr蛋白水平比較 5組小鼠肝臟組織SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr蛋白水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中IR組肝臟組織SREBP-2、HMGCR、LDLr蛋白水平低于NC組，SCAP、INSIG2水平高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYL組肝臟組織SCAP水平低于IR組，LDLr蛋白水平高于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；OXYM、OXYH組SREBP-2、HMGCR、LDLr蛋白水平高于IR組，SCAP、INSIG2蛋白水平低于IR組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表5、圖1)。

表4 5組小鼠肝臟組織SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr mRNA水平比較Table 4 Comparison of expression levels of SREBP-2,SCAP,INSIG2,HMGCR and LDLr mRNA in liver tissues among 5 groups

表5 5組小鼠肝臟組織SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr蛋白水平比較Table 5 Comparison of expression levels of SREBP-2,SCAP,INSIG2,HMGCR and LDLr in liver tissues among 5 groups

注：NC組=正常組，IR組=胰島素抵抗模型組，OXYL組=氧化苦參堿低劑量組，OXYM組=氧化苦參堿中劑量組，OXYH組=氧化苦參堿高劑量組，SREBP-2=固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-2，SCAP=固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白，INSIG2=胰島素誘導(dǎo)基因-2，HMGCR=3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶，LDLr=低密度脂蛋白受體

圖1 Western blotting法檢測5組小鼠SREBP-2、SCAP、INSIG2、HMGCR、LDLr的表達(dá)

Figure 1 Expressions of SREBP-2,SCAP,INSIG2,HMGCR and LDLr were detected by Western blotting

3 討論

胰島素抵抗是多基因缺陷和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[6]，目前其發(fā)生、發(fā)展機(jī)制仍未闡明。ApoE-/-小鼠由于對富含膽固醇的脂蛋白清除障礙，因此機(jī)體會出現(xiàn)血脂代謝紊亂[7]，但并不能導(dǎo)致胰島素抵抗。本研究采用高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠后發(fā)現(xiàn)，小鼠FBG水平、血清TC水平、血清TG水平、血清LDL-C水平、血清HDL-C水平及FINS水平均升高，而HDL-C水平的升高可能與ApoE-/-遺傳背景有關(guān)。GIR是評價胰島素抵抗發(fā)生的金標(biāo)準(zhǔn)[8]，本研究通過高胰島素-正葡萄糖鉗夾實驗證實高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠出現(xiàn)了明顯的胰島素抵抗特征，與金鑫等[9]研究結(jié)果一致。膽固醇是人體不可或缺的重要物質(zhì)，其異常升高會引起動脈粥樣硬化，導(dǎo)致冠心病、心肌梗死等疾病的發(fā)生[10]。高脂飼料喂養(yǎng)的ApoE-/-小鼠血清和肝臟組織中TC水平均明顯升高，與湯世國等[5]報道的高脂飼料喂養(yǎng)的ApoE-/-胰島素抵抗小鼠中存在TC的合成和攝取紊亂相一致。因此，對胰島素抵抗小鼠肝臟組織中TC代謝相關(guān)基因進(jìn)行了進(jìn)一步檢測和研究。

SREBPs是一類位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的膜連接蛋白家族，具有核轉(zhuǎn)錄因子活性，與SCAP緊密結(jié)合形成復(fù)合體，其作為固醇感受器，可調(diào)節(jié)膽固醇的合成[11]。其中，SREBP-2是膽固醇合成反饋調(diào)節(jié)的主要形式[12]，SCAP是SREBP-2在細(xì)胞內(nèi)運輸?shù)谋匾?，兩者結(jié)合形成SREBP-2-SCAP復(fù)合物，升高的膽固醇會與SCAP敏感區(qū)結(jié)合發(fā)生構(gòu)象變化，促進(jìn)復(fù)合物在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上與INSIG2結(jié)合，終止了SREBPs的活化，導(dǎo)致脂質(zhì)合成減少[13-14]。本研究結(jié)果顯示，IR組小鼠血清TC水平較NC組升高，肝臟組織SREBP-2 mRNA及其蛋白水平均較NC組降低，SCAP、INSIG2 mRNA及其蛋白水平均較NC組升高，表明胰島素抵抗小鼠中SREBP-2-SCAP-INSIG2復(fù)合物將SREBP-2錨定在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，通過反饋調(diào)節(jié)減少內(nèi)源性膽固醇的生物合成，有利于緩解外周及細(xì)胞內(nèi)的高膽固醇狀態(tài)。

進(jìn)一步觀察SREBP-2下游HMGCR和LDLr的表達(dá)情況。HMGCR是膽固醇合成的限速酶和膽固醇代謝的關(guān)鍵酶之一，其合成減少從而增加了2型糖尿病的發(fā)生風(fēng)險[15]。LDLr是一種位于細(xì)胞表面的跨膜受體，大部分膽固醇與低密度脂蛋白結(jié)合，再經(jīng)肝細(xì)胞表面LDLr代謝和清除[16]。本研究結(jié)果顯示，IR組小鼠肝臟組織中HMGCR和LDLr mRNA及其蛋白水平均低于NC組，推測是由于TC水平升高導(dǎo)致SREBP-2水平降低，引起下游HMGCR、LDLr水平降低。

本研究進(jìn)一步分析不同濃度的氧化苦參堿對高脂飼料喂養(yǎng)的ApoE-/-小鼠血糖、血脂、胰島素抵抗的影響發(fā)現(xiàn)，OXYL組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均低于IR組，OXYM、OXYH組體質(zhì)量、FBG水平、血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均低于IR組；OXYL組HOMA-IR低于IR組，GIR高于IR組；OXYM、OXYH組FINS水平、HOMA-IR均低于IR組，GIR均高于IR組；OXYL、OXYM、OXYH組肝臟組織TC水平均低于IR組；OXYL組肝臟組織LDLr mRNA水平高于IR組；OXYM、OXYH組SREBP-2、HMGCR、LDLr mRNA水平高于IR組，SCAP、INSIG2 mRNA水平低于IR組；表明氧化苦參堿能降低高脂飼料喂養(yǎng)的ApoE-/-小鼠的血糖、血脂水平，改善胰島素抵抗，降低血清和肝臟組中的TC水平，上調(diào)肝臟組織中SREBP-2 mRNA及其蛋白水平，下調(diào)SCAP、INSIG2 mRNA及其蛋白水平，分析原因為氧化苦參堿能解救錨定在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)SREBP-2-SCAP-INSIG2復(fù)合物中的SREBP-2，減少TC的合成；同時氧化苦參堿還能上調(diào)SREBP-2下游的HMGCR、LDLr mRNA及其蛋白水平，促進(jìn)膽固醇的內(nèi)攝，有效調(diào)控細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平，為臨床用藥和尋找新的藥物提供了重要的理論依據(jù)。

綜上所述，氧化苦參堿可調(diào)控高脂飲誘導(dǎo)ApoE-/-小鼠肝臟膽固醇相關(guān)基因的表達(dá)，改善血糖、血脂和胰島素抵抗情況，但其具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

作者貢獻(xiàn)：王杏、王超進(jìn)行實驗設(shè)計與實施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對文章負(fù)責(zé)；費雯婕、劉小娜、張哲、馬歡進(jìn)行實驗實施、評估、資料收集；宋光耀進(jìn)行質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：毛亞敏)

Effect of Oxymatrine on Hepatic Cholesterol Metabolism Regulated Genes in Insulin Resistance ApoE-/-Mice Induced by High Fat Diet

WANGXing，WANGChao,SONGGuang-yao,FEIWen-jie，LIUXiao-na，ZHANGZhe,MAHuan.KeyLaboratoryofGeriatricMedicine,HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,ChinaCorrespondingauthor:SONGGuang-yao,DepartmentofEndocrinolo,HebeiGeneralHospital,Shijiazhuang050051,China；E-mail:sguangyao2@163.com

Objective To investigate the effect of oxymatrine on genes regulated hepatic cholesterol metabolism in ApoE-/-mice induced by high fat diet.Methods From April 2014 to January 2015,seventeen SPF grade C57BL/6J mice were selected as normal control(NC)group and fed on the basal diet.Sixty-eight SPF grade ApoE-/-mice fed on high fat diet.After 16 weeks of feeding,according to the random number table method,ApoE-/-mice were averagely divided into insulin resistance model group(IR group),low oxymatrine dose group(OXYL group),middle oxymatrine dose group(OXYM group) and high oxymatrine dose group(OXYH group).There were seventeen mice in each group.In OXYL group,OXYM group and OXYH group,25 mg·kg-1·d-1,50 mg·kg-1·d-1and 100 mg·kg-1·d-1oxymatrine were given by continuous oral gavage for 8 weeks,and all groups were given equal volume of pure water.Glucose infusion rate (GIR),blood glucose (FBG)level,serum leves of total cholesterol (TC),three glycerol (TG),low density lipoprotein cholesterol (LDL-C),high density lipoprotein cholesterol (HDL-C),fasting insulin (FINS) level in each group of mice were measured,and the insulin resistance index (HOMA-IR) was calculated,and the TC level of liver tissue was detected.The expression of SREBP-2,SCAP,INSIG2,HMGCR and LDLr mRNA and its protein were detected using RT-qPCR and western-blotting methods in mice liver tissue.Results The FBG level，serum levels of TC,TG,LDL-C and HDL-C in IR group was significantly higher than NC group (P<0.05).The serum levels of TC,TG,LDL-C and HDL-C in OXYL group was significantly lower than IR group(P<0.05).The FBG level,serum levels of TC,TG,LDL-C and HDL-C of in OXYM and OXYH group were significantly lower than IR group(P<0.05).GIR in IR group was lower than NC group(P<0.05)；GIR in OXYL group，OXYH group and OXYM group was higher than IR group(P<0.05)；The FINS level and HOMA-IR in IR group were higher than NC group (P<0.05).The HOMA-IR in OXYL group was lower than IR group(P<0.05).The FINS level,HOMA-IR in OXYH group and OXYM group were lower than IR group(P<0.05).The TC level in mice liver tissue of IR group was higher than NC group (P<0.05).The TC level in mice liver tissue of OXYL group,OXYM group and OXYH group was lower than IR group (P<0.05).The expressions of SREBP-2,HMGCR,LDLr mRNA and their protein in mice liver tissue of IR group were lower than NC group,and the expressions of SCAP,INSIG2 mRNA and their protein in mice liver tissue of IR group were higher than NC group (P<0.05).The expression of LDLr mRNA and its protein in mice liver tissue of OXYL group were higher than IR group (P<0.05).The expressions of SREBP-2,HMGCR,LDLr mRNA and their protein in mice liver tissue of OXYH group and OXYM group were higher than IR group,and the expressions of SCAP,INSIG2 mRNA and their protein in mice liver tissue of OXYH group and OXYM group were lower than IR group (P<0.05).Conclusion Oxymatrine could regulate the expression of genes related hepatic cholesterol and improve the blood glucose,lipid and insulin resistance in ApoE-/-mice induced by high fat diet.

Oxymatrine；Diet,high fat；ApoE-/-mice；Insulin resistance；Cholesterol

國家自然科學(xué)基金資助項目(81370900)；河北省重大醫(yī)學(xué)科研項目(zd2013002，zd2013004)

050051河北省石家莊市，河北省人民醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)重點實驗室(王杏，王超，張哲，馬歡)，內(nèi)分泌科(宋光耀，費雯婕，劉小娜)

宋光耀，050051河北省石家莊市，河北省人民醫(yī)院內(nèi)分泌科；E-mail:sguangyao2@163.com

R 364.2

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.33.009

2016-06-06；

2016-09-23)