孟昭杰， 巴雅爾， 張 明， 陳 立

(1中山大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院， 廣東 廣州 510275； 2深圳市海普瑞藥業(yè)股份有限公司， 廣東 深圳 518057；3吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理系， 吉林 長(zhǎng)春 130021； 4包頭市腫瘤醫(yī)院綜合內(nèi)科， 內(nèi)蒙古 包頭 014030)

?

黃連素通過調(diào)節(jié)miRNA-146a促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞凋亡*

孟昭杰1, 2, 3， 巴雅爾4， 張 明3△， 陳 立3

(1中山大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院， 廣東 廣州 510275；2深圳市海普瑞藥業(yè)股份有限公司， 廣東 深圳 518057；3吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理系， 吉林 長(zhǎng)春 130021；4包頭市腫瘤醫(yī)院綜合內(nèi)科， 內(nèi)蒙古 包頭 014030)

目的： 探討黃連素對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。方法：乳腺癌細(xì)胞MCF-7采用含10%小牛血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、黃連素低劑量組、黃連素中劑量組和黃連素高劑量組。給藥處理24 h后，采用MTT法檢測(cè)各組中MCF-7細(xì)胞的存活率；Hoechst 33258染色及流式細(xì)胞技術(shù)觀察細(xì)胞的凋亡情況；采用Western blot法檢測(cè)各組MCF-7細(xì)胞中NF-κB P65磷酸化水平及促凋亡蛋白Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平；RT-qPCR法檢測(cè)細(xì)胞中microRNA-146a(miRNA-146a)的水平。為進(jìn)一步探討黃連素影響乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)還檢測(cè)了轉(zhuǎn)染miRNA-146a siRNA后黃連素對(duì)促凋亡蛋白Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2的mRNA水平的影響。結(jié)果：MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，黃連素中、高劑量給藥組MCF-7細(xì)胞的存活率明顯降低，且呈一定的劑量依賴性(P<0.01)；Hoechst 33258染色觀察到給藥組細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染；流式細(xì)胞技術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示，黃連素給藥組MCF-7細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.05)；Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，黃連素給藥組的p-P65和Bcl-2表達(dá)水平明顯降低，Bax表達(dá)水平明顯升高，且呈一定的劑量依賴性(P<0.05)；RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，黃連素給藥組的miRNA-146a表達(dá)水平明顯升高，且呈一定的劑量依賴性(P<0.05)。黃連素給藥聯(lián)合轉(zhuǎn)染miRNA-146a siRNA后，與黃連素單獨(dú)給藥組相比，MCF-7細(xì)胞中Bax mRNA水平顯著下降(P<0.05)，Bcl-2 mRNA水平顯著上調(diào)(P<0.05)。結(jié)論：黃連素能夠促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能有部分是通過miRNA-146a抑制NF-κB P65磷酸化，最終影響凋亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2的表達(dá)。

黃連素； MicroRNA-146a； 乳腺癌； 細(xì)胞凋亡

乳腺癌已成為女性較為常見的惡性腫瘤之一，近年來(lái)其發(fā)生發(fā)展日趨年輕化，發(fā)病率和死亡率也逐年增高，預(yù)計(jì)到2021年將會(huì)達(dá)到百分之一[1-2]。因此，研究和開發(fā)具有高效的抗乳腺癌的藥物是我們亟待解決的問題。

微小RNA(microRNA，miRNA，miR)是一類長(zhǎng)約19～22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性的非編碼小分子RNA，在細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化及凋亡等方面起到關(guān)鍵作用。近年來(lái)研究證實(shí)，miR-146a的表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、凋亡等密切相關(guān)[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中過表達(dá)miR-146a可以抑制NF-κB信號(hào)通路，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，降低乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力[4]。

黃連素又名小檗堿(berberine,BBR)，是從我國(guó)傳統(tǒng)中藥黃連中提取的一種重要的生物堿，具有顯著的抑菌、抗炎、降糖、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理活性。近來(lái)研究顯示，黃連素能夠提高乳腺癌細(xì)胞MCF-7的藥物敏感性，抑制乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的凋亡[5]，亦有研究顯示黃連素可抑制NF-κB的表達(dá)[6]，但其是否能以miR-146a為靶點(diǎn)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的凋亡還有待進(jìn)一步研究。

材 料 和 方 法

1 細(xì)胞、試劑和儀器

MCF-7細(xì)胞系購(gòu)自上海復(fù)旦細(xì)胞庫(kù)。黃連素(東北制藥廠)；RPMI-1640培養(yǎng)基、小牛血清和0.25%胰蛋白酶(Gibco)；噻唑蘭(MTT)(Sigma)；Annexin V-FITC流式檢測(cè)試劑盒(上海生物科技有限公司)；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)；抗NF-κB(P65)、p-P65、Bax、Bcl-2、GAPDH Ⅰ抗及相應(yīng)的Ⅱ抗(Abcam)；miRNA-146a siRNA(上海吉瑪生物股份有限公司)；RT-qPCR試劑盒(TaKaRa)。低溫超速離心機(jī)(Thermo)；Westen blot電泳系統(tǒng)(Bio-Rad)；凝膠成像系統(tǒng)(Tanon)；相差顯微鏡(Olympus)；分析天平(Mettler Toledo)；超凈工作臺(tái)(SIEMENS)；細(xì)胞培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀(Sanyo)；流式細(xì)胞儀(Beckman)。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 MCF-7細(xì)胞采用含雙抗(100 mg/L鏈霉素和1×105U/L 青霉素)的RPMI-1640培養(yǎng)基加10%小牛血清培養(yǎng)，置于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3 d換液，待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)分為4組，分別為對(duì)照組(control組)、黃連素低劑量(low dose,L;2.5 μmol/L)組(BBR-L組)、黃連素中劑量(medium dose,M;5 μmol/L)組(BBR-M組)和黃連素高劑量(high dose,H;10 μmol/L)組(BBR-H組)，給藥處理24 h后收集細(xì)胞。

2.2 MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力 將MCF-7細(xì)胞接種于96孔板中，每孔5×103個(gè)，細(xì)胞貼壁后給予黃連素處理24 h，每孔加入5 g/L MTT溶液，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2～4 h。孵育結(jié)束后棄去上清，每孔加入150 μL DMSO,置于酶標(biāo)儀(490 nm)讀取吸光度(A)值。細(xì)胞存活率(%)=(實(shí)驗(yàn)組A值-空白組A值)/(對(duì)照組A值-空白組A值)×100%。

2.3 Hoechst 33258染色 將MCF-7細(xì)胞接種于鋪有蓋玻片的6孔板中，每孔2×105個(gè)，細(xì)胞貼壁后給予黃連素處理24 h， PBS洗滌細(xì)胞 1 min、3次，每孔加入中性多聚甲醛，室溫下固定15 min， PBS洗滌1 min、3次，之后加入500 μL Hoechst 33258染色液(5 mg/L)避光染色10 min，PBS洗滌1 min、3次，之后取出蓋玻片倒扣于滴加了抗熒光淬滅劑的載玻片上，封片，熒光顯微鏡下觀察。

2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞凋亡情況 MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，換含不同劑量黃連素的血清及對(duì)照血清繼續(xù)培養(yǎng)24 h，胰酶消化，收集培養(yǎng)液；1 000 r/min 4℃離心10 min，棄上清；加入1 mL PBS重懸細(xì)胞，輕輕振蕩使細(xì)胞懸浮，300目尼龍網(wǎng)過濾細(xì)胞；離心，棄上清；按Annexin V細(xì)胞凋亡試劑盒步驟操作，同時(shí)以不加Annexin V-FITC及PI的MCF-7細(xì)胞作為陰性對(duì)照。

2.5 Western blot法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá) 提取細(xì)胞總蛋白，用BCA蛋白濃度試劑盒測(cè)定樣品蛋白含量，配制5%濃縮膠和15%分離膠，上樣，電泳，之后將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，并于5%脫脂奶粉或5% 牛血清白蛋白封閉液中室溫下封閉2 h，洗膜，加 I 抗Bax(1∶1 000)、Bcl-2(1∶1 000)、NF-κB(1∶1 000)、p-P65(1∶1 000)、GAPDH(1∶5 000)，室溫孵育2 h，洗膜，加Ⅱ抗(1∶10 000)室溫孵育2 h，洗膜，采用ECL化學(xué)發(fā)光法顯色，使用Quantity One軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理分析。

2.6 mRNA水平檢測(cè) 不同劑量黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞miR-146a影響的檢測(cè)：MCF-7細(xì)胞使用不同劑量BBR處理24 h后提取RNA;轉(zhuǎn)染miR-146a siRNA后相關(guān)mRNA檢測(cè)：細(xì)胞以每孔2×104個(gè)接種于24孔板，轉(zhuǎn)染6 h后去除轉(zhuǎn)染試劑，給予5 μmol/L黃連素處理24 h，采用TRIzol法抽提MCF-7細(xì)胞總RNA,并按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。miR-146a的上游引物為5’-CCGATGTGTATCCTCAGC-TTTG-3’,下游引物為5’-GCTGAAGAACTGAATTT-CAGAGGTC-3’;U6的上游引物為5’-CTCGCTTCGGC-AGCACATA-3’,下游引物為5’-AACGCTTCACGAATTGCG-3’;Bcl-2的上游引物為5’-GGGGCTACGAGTGGGATGCTGGAGA-3’，下游引物為5’-TGCACA-GCGGGCATTGGGTT-3’;Bax的上游引物為5’-CA-GGGTTTCATCCAGGATCGAGCAGG-3’,下游引物為5’-CGGGGGGAGTCCGTGTCCACGTCAG-3’。擴(kuò)增條件為：95 ℃ 10 min;95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min,40個(gè)循環(huán)；95 ℃ 15 s、60 ℃ 30 s、95 ℃ 15 s。檢測(cè)結(jié)果以2-ΔΔCt法計(jì)算，并將對(duì)照組的表達(dá)水平歸化為1后計(jì)算相對(duì)表達(dá)水平。

2.7 miR-146a siRNA轉(zhuǎn)染效率檢測(cè) 將對(duì)數(shù)期的MCF-7細(xì)胞接種于6孔板中，采用無(wú)雙抗培養(yǎng)基培養(yǎng)。24 h后按照Lipo2000轉(zhuǎn)染說(shuō)明，采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法將1 μg miR-146a siRNA和陰性對(duì)照siRNA轉(zhuǎn)染至乳腺癌細(xì)胞MCF-7中，轉(zhuǎn)染6 h后去除轉(zhuǎn)染試劑，熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，多組間比較采用單因素方差(one-way ANOVA)分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞存活率的影響

MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，BBR-L組的細(xì)胞存活率與control組比較未有顯著性差異，而BBR-M和BBR-H組的細(xì)胞存活率與control組相比則顯著降低(P<0.01)。

2 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞細(xì)胞核的影響

Hoechst 33258染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，control組細(xì)胞的細(xì)胞核邊緣光滑整齊，呈藍(lán)色，均勻淡染；BBR給藥組細(xì)胞的細(xì)胞核固縮，邊緣不整齊，呈碎塊狀致密濃染，甚至可見裂解的細(xì)胞核；隨給藥濃度的增大，細(xì)胞核改變更為明顯，見圖2。

Figure 1.The viability of the MCF-7 cells in each group. Mean±SEM.n=6.**P<0.01vscontrol.

圖1 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞存活率的影響

Figure 2.The effect of berberine on the morphological changes of the nucleus in the MCF-7 cells (×400).

圖2 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞細(xì)胞核形態(tài)的影響

3 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡的影響

采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示， BBR-L組的細(xì)胞凋亡率為(9.15±1.31)%，與control組比較無(wú)顯著性差異；BBR-M和BBR-H組細(xì)胞凋亡率分別為(15.77±1.20)%和(22.37±0.89)%，與對(duì)照組相比均顯著升高(P<0.05),見圖3。

4 黃連素對(duì)MCF-7相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與control組相比，黃連素給藥組p-P65和Bcl-2表達(dá)水平降低，且呈一定的劑量依賴性。BBR-M和BBR-H組p-P65的表達(dá)與control組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與control組相比，黃連素給藥后促凋亡蛋白Bax蛋白表達(dá)水平升高，且呈一定的劑量依賴性。BBR-M和BBR-H組Bax蛋白表達(dá)水平與control組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖4。

Figure 3.The effect of berberine on apoptosis in the MCF-7 cells. Mean±SEM.n=6.*P<0.05,**P<0.01vscontrol.

圖3 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡的影響

5 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞miR-146a表達(dá)水平的影響

與control組相比，黃連素給藥后miRNA-146a的表達(dá)水平升高，呈一定的劑量依賴性。BBR-M組和BBR-H組的miRNA-146a表達(dá)水平與control組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖5。

6 MCF-7細(xì)胞中miR-146a siRNA轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)

采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染miR-146a siRNA于MCF-7細(xì)胞24 h后在熒光顯微鏡下觀察miR-146a siRNA的轉(zhuǎn)染效率，約有60%以上的細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白。與此同時(shí)，RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示轉(zhuǎn)染miR-146a siRNA 24 h后，MCF-7細(xì)胞中miR-146a的表達(dá)明顯降低，說(shuō)明可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),見圖6。

7 黃連素通過miR-146a調(diào)控對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2的mRNA水平的影響

與control組相比，轉(zhuǎn)染miRNA-146a siRNA后24 h，MCF-7細(xì)胞中促凋亡蛋白Bax的mRNA表達(dá)水平明顯降低，抑凋亡蛋白Bcl-2的mRNA表達(dá)水平明顯升高；與BBR組相比，miRNA-146a siRNA與黃連素聯(lián)合應(yīng)用后，大大削弱了黃連素促進(jìn)MCF-7細(xì)胞凋亡的效應(yīng)，Bax的mRNA表達(dá)水平明顯降低，抑凋亡蛋白Bcl-2的mRNA表達(dá)水平明顯升高。說(shuō)明黃連素能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的凋亡，至少部分是通過miRNA-146a實(shí)現(xiàn)的，見圖7。

Figure 4.The effect of berberine on the protein expression of Bax, Bcl-2 and p-P65 in the MCF-7 cells. Mean±SEM.n=6.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

圖4 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞Bax、Bcl-2和p-P65蛋白表達(dá)的影響

Figure 5.The effect of berberine on the expression of miRNA-146a in the MCF-7 cells. Mean±SEM.n=6.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

圖5 黃連素對(duì)MCF-7細(xì)胞miRNA-146a表達(dá)的影響

討 論

乳腺癌是嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤，是全世界排名第二的腫瘤疾病，每年有近50萬(wàn)女性患者死于乳腺癌[7]。諸多因素參與了乳腺癌的形成、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，microRNA 是其重要的影響因素之一，并且可能用于乳腺癌的早期診斷[8]。miR-155和miR-21是具有促癌作用的microRNA。Zhang 等[9]證實(shí)，miR-155可直接與腫瘤蛋白53誘導(dǎo)核蛋白1(Tp53INP1，一種抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的蛋白)3’-UTR區(qū)結(jié)合，使Tp53INP1表達(dá)減少，從而抑制癌細(xì)胞分化周期G1期的停滯，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖。

Figure 6.The efficiency of miR-146a siRNA transfection detected by RT-qPCR. siRNA: miR-146 siRNA. Mean±SEM.n=6.**P<0.01vscontrol group.

圖6 MCF-7細(xì)胞中miR-146a siRNA轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)

Figure 7.The effect of berberine and know-down of miR-146a on the mRNA expression of Bax and Bcl-2. siRNA: miR-146a siRNA. Mean±SEM.n=6.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;△P<0.05vsBBR group.

圖7 黃連素通過miR-146a調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平

Li 等[10]發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移率高的乳腺癌中miR-21 的表達(dá)明顯高于轉(zhuǎn)移率低的乳腺癌。近年來(lái)研究證實(shí)，miRNA-146a是一個(gè)典型的多功能microRNA，參與炎癥、自身免疫性疾病和腫瘤等的發(fā)生發(fā)展。Kumar等[11]證實(shí)，與健康志愿者相比，乳腺癌患者血清中miR-146a水平顯著升高，這一點(diǎn)可以用作乳腺癌的診斷指標(biāo)。但乳腺癌患者血清中高水平的miR-146a是如何產(chǎn)生并進(jìn)一步影響乳腺癌病程的發(fā)生和發(fā)展目前尚沒有報(bào)道。另有大量研究報(bào)道，NF-κB是miR-146a的靶蛋白[12]，miR-146a通過調(diào)節(jié)NF-κB的表達(dá)對(duì)炎癥、免疫疾病、糖脂代謝異常及腫瘤等疾病進(jìn)行調(diào)節(jié)。

近年來(lái)，黃連素作為傳統(tǒng)的治療腹瀉藥物，被廣泛地證明具有抗炎、降糖、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理活性。黃連素抑制乳腺癌增殖作用亦被廣泛報(bào)道。Li等[13]研究表明，黃連素可以下調(diào)乳腺癌MDA-MA-231細(xì)胞中NF-κB的表達(dá)，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖；Pazhang等[6]證實(shí)，黃連素可以通過調(diào)節(jié)NF-κB的表達(dá)，進(jìn)而影響環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)的表達(dá)，達(dá)到促進(jìn)人乳腺導(dǎo)管上皮腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。然而，黃連素在乳腺癌細(xì)胞中是否對(duì)miR-146a具有調(diào)節(jié)作用，以及更進(jìn)一步通過miR-146a調(diào)節(jié)NF-κB誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡目前尚無(wú)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示黃連素處理細(xì)胞后，MCF-7細(xì)胞凋亡率顯著增加，Bax表達(dá)明顯升高、Bcl-2表達(dá)水平明顯降低，呈劑量依賴性，且p-P65的表達(dá)水平隨黃連素濃度的增加而降低，miRNA-146a表達(dá)水平明顯增加。本實(shí)驗(yàn)研究也顯示將miRNA-146a 沉默后，黃連素促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的水平明顯降低。說(shuō)明黃連素能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的凋亡至少部分是通過miR-146a實(shí)現(xiàn)的。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 余小慧)

Berberine promotes apoptosis of human breast cancer cells by regulating miRNA-146a

MENG Zhao-jie1, 2, 3, BA Ya-er4, ZHANG Ming3, CHEN Li3

(1SchoolofMaterialsScienceandEngineering,SunYat-senUniversity,Guangzhou510275,China;2ShenzhenHepalinkPharmaceuticalCo.,Ltd,Shenzhen518057,China;3DepartmentofPharmacology,CollegeofBasicMedicalScience,JilinUniversity,Changchun130021,China;4ComprehensiveMedicineDepartment,BaotouCancerHospital,Baotou014030,China.E-mail:zhangming_00@126.com)

AIM: To observe the effect of berberine on apoptosis of MCF-7 cells and its potential mechanism. METHODS: The MCF-7 cells were divided into control group and the groups with 3 different doses of berberine. The cell viability was detected by MTT assay, while the cell apoptosis was measured by Hoechst 33258 staining and flow cytometry assay. The protein levels of p-P65, Bax and Bcl-2 were Western blot. The levels of microRNA-146a(miRNA-146a) in the MCF-7 cells were detected by RT-qPCR. The miRNA-146a siRNA was transfected to the MCF-7 cells after an evaluation of transfection efficacy, which was co-incubated with berberine to observe its effects on the mRNA levels of Bax and Bcl-2. RESULTS: Compared with control group, the cell viabilities were decreased significantly in medium and high doses of berberine treatment groups with a dose-dependent manner (P<0.01). The cell apoptosis was increased significantly in medium and high doses of berberine treatment groups dose-dependently (P<0.05). The protein levels of Bax were up-regulated, while those of Bcl-2 and p-P65 were down-regulated significantly by the treatment of berberine (P<0.05). In addition, the miRNA-146a levels were increased significantly in medium and high doses of berberine treatment groups (P<0.05) and showed a dose-dependent manner. The mRNA levels of Bax were decreased, while the mRNA levels of Bcl-2 were increased after transfection with miRNA-146a siRNA and co-incubated with berberine. CONCLUSION: Berberine promotes apoptosis of MCF-7 cells. The mechanism may be related to inhibit the activity of NF-κB by incresing the levels of miRNA-146a.

Berberine; MicroRNA-146a; Breast cancer; Apoptosis

1000- 4718(2016)11- 1966- 06

2016- 09- 09

2016- 10- 13

吉林省科委基金(No. 20140203011YY; No. 20150311013YY)

R730.23

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.11.008

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