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        高堿度和高氨對達(dá)里湖瓦氏雅羅魚耗氧率和排氨率的影響

        2016-12-23 00:38:39常玉梅蘇寶鋒梁利群
        生物學(xué)雜志 2016年6期
        關(guān)鍵詞:排氨率耗氧率堿度

        何 強(qiáng),常玉梅,蘇寶鋒,孫 博,閆 浩,梁利群

        (1.淡水魚類育種國家地方聯(lián)合工程實驗室 農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)生物技術(shù)與遺傳育種重點實驗室 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院特殊生境魚類種質(zhì)特性與抗逆育種重點實驗室 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院 黑龍江水產(chǎn)研究所,哈爾濱 150070; 2.上海海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院,上海 201306)

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        高堿度和高氨對達(dá)里湖瓦氏雅羅魚耗氧率和排氨率的影響

        何 強(qiáng)1,2,常玉梅1,蘇寶鋒1,孫 博1,閆 浩1,2,梁利群1

        (1.淡水魚類育種國家地方聯(lián)合工程實驗室 農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)生物技術(shù)與遺傳育種重點實驗室 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院特殊生境魚類種質(zhì)特性與抗逆育種重點實驗室 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院 黑龍江水產(chǎn)研究所,哈爾濱 150070; 2.上海海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院,上海 201306)

        采用靜水密閉的方法,比較了體質(zhì)量為(72.62±3.70 )g達(dá)里湖瓦氏雅羅魚(LeuciscuswaleckiiDybowski,簡稱雅羅魚)在高堿度(NaHCO350 mmol/L)和高氨(NH4CO31.5 mmol/L)脅迫下處理4個時間點(2 h、4 h、6 h和8 h)耗氧率和排氨率的變化。耗氧率實驗結(jié)果表明:與淡水組相比,高堿度和高氨顯著抑制了雅羅魚的耗氧率(P<0.05);高堿度組與高氨組相比,雅羅魚耗氧率除了在監(jiān)測的第1個時間點內(nèi)存在顯著性差異外(P<0.05),其他時間點無明顯差異(P>0.05)。排氨率實驗結(jié)果顯示:與淡水組相比,高堿度和高氨均顯著抑制了雅羅魚的排氨率(P<0.05)。其中高氨組排氨率在所監(jiān)測的4個時間點內(nèi)全部下降,并與淡水組和高堿度組相比存在極顯著差異(P<0.01)。能量代謝研究發(fā)現(xiàn),淡水組和高堿度組氧氮比均無顯著差異(P>0.05);與淡水對照組和高堿度組比較,高氨組氧氮比差異極顯著(P<0.01)。

        瓦氏雅羅魚;碳酸鹽堿度;耗氧率;排氨率;氧氮比

        瓦氏雅羅魚(以下簡稱雅羅魚)亦稱東北雅羅魚,隸屬鯉形目、鯉科、雅羅魚亞科、雅羅魚屬[1]。主要分布在我國西北、華北和東北一些水域,能在pH 9.0以上的鹽堿水域中生存,具有很強(qiáng)的耐鹽堿特性。如生活在內(nèi)蒙古達(dá)里湖的雅羅魚,可在堿度53.57 mmol/L,pH值高達(dá)9.69的惡劣水域環(huán)境中生存[2]。

        呼吸和排泄不僅能反映魚類的生理狀態(tài),也能夠反映出環(huán)境條件的改變對自身的影響,因此了解魚類的耗氧以及排氨能力是非常重要的。魚類耗氧率和排氨率除受自身影響外,還受水溫[3]、pH值[4]和鹽度[5]等影響,國內(nèi)外學(xué)者已在這一領(lǐng)域做了大量的研究。近年來,針對雅羅魚耐高鹽堿的特性,我國學(xué)者主要從生理生化[6]、群體遺傳學(xué)[7-8]、轉(zhuǎn)錄組學(xué)[9-10]等方面對其開展了一些研究。由于在實際養(yǎng)殖過程中,如高密度的人工養(yǎng)殖系統(tǒng)中,水體氨氮濃度的增加可能會影響魚類的生長,甚至導(dǎo)致死亡的情況時有發(fā)生,因此,研究魚類在氨氮脅迫時的生理變化非常重要。

        本研究通過比較達(dá)里湖雅羅魚在淡水、高碳酸鹽堿度(模擬自然水體)和高氨脅迫下的耗氧率、排氨率以及氧氮比的變化,初步了解達(dá)里湖雅羅魚對不同環(huán)境脅迫的適應(yīng)能力,為該物種在我國西北、華北、東北的養(yǎng)殖開發(fā)提供基礎(chǔ)資料。

        1 材料與方法

        1.1 實驗材料

        雅羅魚為課題組2009年從內(nèi)蒙古達(dá)里湖引進(jìn),實驗魚為人工繁育獲得的F3。選取大小一致,體質(zhì)量為(72.62±3.70)g,全長為(17.25±0.65)cm,生命力強(qiáng)的F3個體30尾放在室內(nèi)循環(huán)水族箱中(96.5 cm×52.5 cm×45.5 cm)暫養(yǎng)7 d。實驗水為過濾、曝氣24 h的自來水,水溫(20±2)℃,pH 7.25,氨氮0.33 mg/L,總堿度為0.43 mmol/L。實驗前48 h停止投食。

        1.2 實驗水質(zhì)的配置

        本研究共設(shè)置高氨組、高堿度組和淡水對照組3組。對照組為過濾、曝氣24 h的自來水。為了保證實驗過程中魚體不出現(xiàn)死亡,經(jīng)過預(yù)實驗,高氨組為過濾、曝氣24 h的自來水添加一定量的NH4CO3分析純配制成氨氮含量為1.5 mmol/L的水體,高堿度組為過濾、曝氣24 h的自來水添加一定量的NaHCO3分析純配置而成,滴定堿度為50mmol/L。實驗前進(jìn)行水質(zhì)監(jiān)測,采用YSI多功能水質(zhì)分析儀(professional plus)測定溫度、pH值、氨氮含量和溶氧,采用酸堿滴定法[11]測定堿度。

        1.3 實驗設(shè)計

        設(shè)置碳酸鹽堿度(50 mmol/L)和高氨(1.5 mmol/L)2個處理組,淡水作為對照組。每個實驗組分別設(shè)置3個平行組。耗氧率和排氨率實驗采用靜水密閉的方法在16 L容積的呼吸室中進(jìn)行。每個呼吸室放入規(guī)格相近的雅羅魚4尾。正式試驗開始前,使其在各呼吸室曝氣適應(yīng)1 h,水溫保持在(19±0.5)℃,待魚處于自然狀態(tài)時,排凈呼吸室中的空氣,密閉呼吸室。密閉開始時利用虹吸法收集各呼吸室水樣分別置于溶氧瓶和15 mL離心管中(立即放入-20℃保存用以測定氨氮),密閉1 h后,用相同方法再取水樣1次;更換新水,適應(yīng)1 h,密閉1 h,連續(xù)測定4次。分別在第2、第4、第6和第8小時密閉前后采集水樣。采用碘量法[12]測定水樣中的溶解氧和納氏試劑分光光度法[13]測定水樣中的氨氮含量。

        1.4 耗氧率和排氨率的計算

        RO2=(D1-D2)×V/T/m;

        RNH3=(N2-N1)/×V/T/m

        其中RO2為耗氧率(mg/g·h),D1和D2分別為試驗初始時和試驗結(jié)束時的溶氧濃度(mg/L);RNH3為氨氮排泄率(μg/g·h),N1和N2分別為試驗初始時和試驗結(jié)束時的氨氮濃度(mg/L);V為呼吸室內(nèi)水體的體積(L);T為2次取水樣間隔的試驗時間(h);m為試驗魚的總重(g)。

        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

        所得數(shù)據(jù)為3個平行組數(shù)據(jù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤,使用Excel和SPASS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。組間差異采用Duncan’s多重比較,顯著水平為P<0.05,極顯著水平為P<0.01。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 高堿度和高氨對雅羅魚耗氧率的影響

        由表1可知,與淡水組比較,高堿度組和高氨組雅羅魚的耗氧率均被顯著抑制(P<0.05),除了高堿度組最后1次監(jiān)測點外(第8小時);與高堿度組相比,高氨組只在第2小時時間點有顯著性差異(P<0.05),其余時間點的耗氧率均無顯著性差異(P>0.05)。

        表1 高堿度和高氨對雅羅魚耗氧率的影響

        Table 1 Effects of high carbonate alkalinity water and high ammonia wateron oxygen consumption rate ofL.waleckiiDybowski mg/g·h

        注:數(shù)值表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤,同行相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。下同

        2.2 高堿度和高氨對雅羅魚排氨率的影響

        由表2可知,與淡水組比較,高堿度組和高氨組的排氨率均被顯著性抑制(P<0.05);與其他兩組相比,高氨組的排氨率在所有監(jiān)測點全部顯著性下降(P<0.01),基本達(dá)到一個不排泄氨氮的地步。

        表2 高堿度和高氨對雅羅魚排氨率的影響

        Table 2 Effects of high carbonate alkalinity water and high ammonia wateron ammonia excretion rate ofL.waleckiiDybowski μg/g·h

        2.3 高堿度和高氨對雅羅魚能量代謝的影響

        由表3可知,雅羅魚在淡水組和高堿度組氧氮比值無顯著性差異(P>0.05);與淡水組和高堿度組比較,高氨組氧氮比值極顯著上升(P<0.01)。

        表3 高堿度和高氨對雅羅魚氧氮比的影響

        Table 3 Effects of high carbonate alkalinity water and high ammoniawater on O:N ofL.waleckiiDybowski

        時間點(h)淡水組(O:N)堿度組(O:N)高氨組(O:N)229.065a35.557a207.703b425.115a33.645a286.343b625.765a31.475a286.031b823.395a32.821a306.180b

        3 討論

        3.1 高堿度和高氨對雅羅魚耗氧率的影響

        堿度、鹽度以及溫度等對魚類的生理活動有著重要的影響,是反映魚類能量代謝的重要指標(biāo)。目前,在魚類對鹽度脅迫下耗氧率的研究比較多。如唐賢明等[14]研究發(fā)現(xiàn),大菱鲆(Scophamusmaximus)幼魚向低鹽度以及高鹽度突變后,耗氧率出現(xiàn)不同程度的升高趨勢,并在24 h達(dá)到最大值。但隨著幼魚對鹽度的適應(yīng),48 h后恢復(fù)到突變前的水平,說明大菱鲆對鹽度脅迫有一個適應(yīng)過程。江麗華等[15]在研究廣鹽性美國紅魚(Sciaenopsocellatus)時發(fā)現(xiàn),美國紅魚的耗氧率隨著鹽度的增加而小幅波動,說明美國紅魚對鹽度有較強(qiáng)的耐受性。但在高堿度和高氨脅迫下魚類耗氧率變化規(guī)律的研究比較少。鄭偉剛等[16]研究發(fā)現(xiàn),彭澤鯽(Carassiusauratusvar.pengsesis)幼魚耗氧率隨著堿度的升高而上升,這說明堿度對彭澤鯽幼魚耗氧率有顯著影響。劉濟(jì)源等[17]對青海湖裸鯉(Gymnocyprisprzewalskii)研究發(fā)現(xiàn),堿度組與淡水組相比,青海湖裸鯉的耗氧率隨時間的變化只有小范圍的波動,這說明青海湖裸鯉對碳酸鹽堿度具有較強(qiáng)的耐受性。本實驗結(jié)果與青海湖裸鯉相似。與淡水組相比,高堿度組雅羅魚耗氧率明顯下降(P<0.05),隨著對堿度的適應(yīng),雅羅魚耗氧率逐漸恢復(fù)到接近淡水組的穩(wěn)定水平(表1)。究其原因,可能是雅羅魚長期生活在堿度為50 mmol/L左右的達(dá)里湖中,體內(nèi)早已產(chǎn)生了耐高堿應(yīng)答機(jī)制,對堿度脅迫有較強(qiáng)的適應(yīng)調(diào)節(jié)能力。

        本研究第一次把高氨脅迫作為一個影響因素,初步探究了高氨脅迫對雅羅魚耗氧率所產(chǎn)生的影響。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),高氨脅迫顯著抑制了雅羅魚的耗氧率。但隨著時間的延長,耗氧率是否會恢復(fù)到淡水組的水平,尚待進(jìn)一步的實驗驗證。從本實驗可以得出,堿度對雅羅魚耗氧率影響不顯著(P>0.05),耗氧率隨時間的變化只有小范圍的波動,而高氨脅迫則對雅羅魚耗氧率有顯著影響(P<0.05)。

        3.2 高堿度和高氨對雅羅魚排氨率的影響

        大多數(shù)不耐高氨的魚類,水體高氨也會消除或抑制“血液-水”的氨分壓梯度,從而導(dǎo)致體內(nèi)血氨含量上升,引發(fā)氨中毒導(dǎo)致死亡。盡管如此,有一些魚類對氨氮有較大的耐受性并能及時采取相應(yīng)的策略逃避氨氮的毒性,保持排泄能力[26]。如Levi等[27]發(fā)現(xiàn),當(dāng)金魚(Carassiusauratus)暴露于0.75 mmol/L的NH4Cl 24 h時,其大腦中的谷氨酸酰胺明顯上升,當(dāng)暴露時間延長至48 h時,腦中的谷氨酰胺比在24 h時增加了10倍,這說明金魚是通過轉(zhuǎn)化部分氨氮合成谷氨酸鹽來減少氨氮對其的毒性。Ching B等[28]研究氨氮對彈涂魚(Boleophthalmusboddarti)鰓和腦組織氧化脅迫發(fā)現(xiàn),彈涂魚能通過提高生成谷胱甘肽復(fù)合物以及GSH的含量,以此來緩解氨氮暴露給其腦部帶來的損傷,這說明彈涂魚對氨氮脅迫具有較強(qiáng)的耐受性。本實驗中,高氨組與淡水組和高堿度組相比,雅羅魚的氨氮排泄率被顯著性抑制(P<0.01),甚至基本不排泄氨氮(表2)。但由于監(jiān)測時間短,尚不能說明在高氨脅迫下雅羅魚的排氨率能否得到部分恢復(fù)。不過,已有研究表明,耐鹽堿魚類通常對高氨具有極強(qiáng)的耐受性[19],這與他們長期生活在高鹽堿高pH值的環(huán)境進(jìn)化出特殊的排氨機(jī)制密不可分。

        3.3 高堿度和高氨對雅羅魚能量代謝的影響

        氧氮比作為衡量生物體代謝中能源物質(zhì)的一個重要指標(biāo),可以反映機(jī)體內(nèi)3種營養(yǎng)物質(zhì)(蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物)提供能量的比例,比值越大表明機(jī)體內(nèi)主要是以脂肪和碳水化合物提供能量,比值越小表明機(jī)體內(nèi)主要是以蛋白質(zhì)提供能量。Mayzaud等[29]研究表明,氧氮比的值在3~16之間蛋白質(zhì)氧化分解占主導(dǎo)地位;Ikeda指出氧氮比為24時,主要是蛋白質(zhì)和脂肪供能[30];Conover等[31]提出如果完全以脂肪或碳水化合物提供能量,氧氮比將無窮大。近年來研究發(fā)現(xiàn),如鹽度對莫荷羅非魚(Oreochromismossambicus×O.urolepishornorum)幼魚[32]、日本皇姑魚(Nibeajaponica)幼魚[33]等發(fā)現(xiàn)氧氮比基本符合上述變化規(guī)律。本研究中,雅羅魚在淡水組和高堿度組中氧氮比無顯著變化(P>0.05),表明雅羅魚不需要消耗過多的能源物質(zhì)即可實現(xiàn)生理穩(wěn)態(tài),這與達(dá)里湖雅羅魚長期生活在高鹽堿水域有關(guān)。在高氨組中,氧氮比顯著上升(P<0.01),表明這時雅羅魚主要是以消耗脂肪和碳酸化合物來滿足機(jī)體的能量供應(yīng),而減少蛋白質(zhì)的消耗,以此降低氨氮在體內(nèi)的積累,避免氨中毒。

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        Effects of high carbonate alkalinity water and high ammonia wateron oxygen consumption and ammonia excretion inLeuciscuswaleckiiDybowski

        HE Qiang1,2,CHANG Yu-mei1,SU Bao-feng1,SUN Bo1,YAN Hao1,2,LIANG Li-qun1

        (1.National & Local United Engineering Laboratory of Freshwater fish Breeding; Key Laboratory of Freshwater AquaticBiotechnology and Genetic Breeding,Ministry of Agriculture; Key Laboratory of Fish Stress Resistance Breeding and Germplasm Characteristics on Special Habitats,Chinese Academy of Fishery Sciences; Heilongjiang River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070; 2.College of Fisheries and Life Science,Shanghai Ocean University,Shanghai 201306,China)

        Using hydrostatic water in sealed chamber for measurement,this study compared the change of oxygen consumption rate and ammonia excretion rate ofLeuciscuswaleckiiDybowski (72.62±3.70)g exposed in high carbonate alkalinity water (CA50 mmol/L) and high ammonia water (NH4CO31.5 mmol/L) for 4 time points (2 h,4 h,6 h and 8 h) measurement.Oxygen consumption rate was significantly inhibited in carbonate alkalinity water and high ammonia water when compared that in fresh water (P<0.05).No significant difference of the oxygen consumption rate between carbonate alkalinity and ammonia water treated fish was detected for the last three tested time points,4,6,and 8 except for the first testing time point.Results of ammonia excretion rate showed that compared with those in fresh water,the ammonia excretion rate of fish exposed in carbonate alkalinity water and ammonia water was significantly inhibited (P<0.05).In ammonia water,the ammonia excretion rate ofL.waleckiiDybowski for all 4 time points decreased,which had an extremely significant difference compared with fresh water and carbonate alkalinity water.Energy metabolism (O:N) study found that there had no significant difference in oxygen-nitrogen ratio in fish between fresh water and carbonate alkalinity water.However,compared with fish in fresh water and carbonate alkalinity water,fish in ammonia water had an extremely significant difference in oxygen-nitrogen ratio.

        LeuciscuswaleckiiDybowski; carbonate alkalinity; oxygen consumption rate; ammonia excretion rate; oxygen-nitrogen ratio

        2016-01-25;

        2016-02-25

        收稿日期:國家自然基金項目 (31461163004);黑龍江省科技攻關(guān)項目(GCI2B307)

        何 強(qiáng),碩士研究生,專業(yè)方向為魚類分子生物學(xué),E-mail: hqiang215@163.com

        梁利群,研究員,博士生導(dǎo)師,研究方向為水產(chǎn)動物基因工程育種,E-mail: llq-1019@163.com

        10.3969/j.issn.2095-1736.2016.06.048

        S917.4

        A

        2095-1736(2016)06-0048-04

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