張巧鳳

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·診治分析·

結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗與結(jié)核抗體試驗對肺外結(jié)核的診斷價值分析

張巧鳳

目的 分析結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(T-SPOT.TB)試驗與結(jié)核抗體試驗對肺外結(jié)核的診斷價值。方法 選取2014年4月—2016年3月包頭市九原區(qū)醫(yī)院收治的疑診肺外結(jié)核患者173例(最終確診為肺外結(jié)核125例，非肺外結(jié)核48例)，分別進行T-SPOT.TB試驗及結(jié)核抗體試驗，比較兩種方法的陽性檢出率及診斷價值。結(jié)果 以痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果作為診斷肺外結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)，T-SPOT.TB試驗對肺外結(jié)核的陽性檢出率為73.99%，高于結(jié)核抗體試驗的62.43%(P<0.05)。T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度為99.20%，特異度為91.67%，診斷符合率為97.11%；結(jié)核抗體試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度為81.60%，特異度為87.50%，診斷符合率為83.24%；T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核的特異度、靈敏度、診斷符合率高于結(jié)核抗體試驗(P<0.05)。結(jié)論 T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度、特異度和診斷符合率高于結(jié)核抗體試驗。

結(jié)核??；結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗；結(jié)核抗體；診斷

張巧鳳.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗與結(jié)核抗體試驗對肺外結(jié)核的診斷價值分析[J].實用心腦肺血管病雜志，2016，24(10)：78-80.[www.syxnf.net]

ZHANG Q F.Diagnostic value of T-SPOT.TB test and tuberculosis antibody test on extrapulmonary tuberculosis[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2016，24(10)：78-80.

結(jié)核病是一種慢性傳染病，可侵犯全身多個系統(tǒng)，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，缺乏特異性，且早期起病具有隱匿性，故早期診斷難度較大[1-2]。目前，臨床診斷結(jié)核病主要依據(jù)X線及痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果，其中痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查是目前公認(rèn)的結(jié)核病診斷金標(biāo)準(zhǔn)[3]。但痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查診斷結(jié)核病存在痰涂片抗酸染色陽性率較低的情況，需要多次反復(fù)送檢，不利于結(jié)核病的早期診斷。肺外結(jié)核是指除肺結(jié)核以外的結(jié)核病，其起病隱匿且臨床癥狀不典型，極易造成誤診。結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(T-SPOT.TB)試驗是以特異性抗原〔分泌性靶抗原(ESAT-6)，培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP-10)〕為刺激源，采用酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(ELISPOT)診斷結(jié)核病的新方法[4-5]。本研究旨在分析T-SPOT.TB試驗與結(jié)核抗體試驗對肺外結(jié)核的診斷價值，為肺外結(jié)核的早期診斷提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年4月—2016年3月包頭市九原區(qū)醫(yī)院收治的疑診肺外結(jié)核患者173例，其中男90例，女83例；年齡20～65歲，平均年齡(37.2±5.6)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)一般人口學(xué)資料完整；(2)有明確痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果；(3)患者及其家屬知情同意并簽署知情同意書。排除有認(rèn)知功能障礙及意識不清患者。經(jīng)痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查，并依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會制定的《臨床診療指南·結(jié)核病分冊》[6]和中國防癆協(xié)會結(jié)核病臨床專業(yè)委員會提出的結(jié)核病臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)及方法進行診斷[7]，最終確診為肺外結(jié)核125例(盆腔結(jié)核2例，腸結(jié)核3例，支氣管結(jié)核10例，結(jié)核性腦膜炎12例，淋巴結(jié)核17例，結(jié)核性胸膜炎81例)，非肺外結(jié)核48例〔非結(jié)核性疾病16例(主要為肺占位性病變和肺炎)，肺結(jié)核32例〕。

1.2 方法

1.2.1 T-SPOT.TB試驗 主要試劑及儀器：T-SPOT.TB試劑盒由上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司惠贈(Oxford Immunotec Ltd.公司生產(chǎn))；1640培養(yǎng)液由美國GIBCOBRL公司生產(chǎn)；淋巴細(xì)胞分離液由上海恒信化學(xué)試劑有限公司提供；酶聯(lián)免疫斑點分析儀由美國CTL公司中國銷售部提供；Countstar自動細(xì)胞計數(shù)儀(Countess C10227)由艾力特國際貿(mào)易有限公司生產(chǎn)；8孔反應(yīng)板條架、Ⅱ級生物安全柜、水平離心機等均由濟南愛環(huán)醫(yī)療器械有限公司提供。

樣本采集：采集患者外周靜脈血5 ml，置于含有抗凝劑(肝素)的試管中，樣本采集后保存時間不超過4 h，后按照試劑盒說明書分離外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，采用Countstar自動細(xì)胞計數(shù)儀收集PBMC，配制每100 μl含有25萬個細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)溶液500 μl備用。

實驗方法：(1)檢驗步驟：①微孔培養(yǎng)板取出夠數(shù)的8孔反應(yīng)板條恢復(fù)至室溫待用；②取出結(jié)核特異性抗原早期ESAT-6(抗原A)和CFP-10(抗原B)待用，準(zhǔn)備好試劑、器材并做好實驗各項準(zhǔn)備工作；③每個檢測樣本需微孔培養(yǎng)板4孔，排列方式為空白對照孔→測試孔A→測試孔B→陽性質(zhì)控對照孔；④每個空白對照孔加入50 μl細(xì)胞培養(yǎng)液，每個測試孔A加入50 μl抗原A溶液，每個測試孔B加入50 μl抗原B溶液，每個陽性質(zhì)控對照孔加入50 μl植物血凝素(PHA)，每個反應(yīng)孔加入100 μl細(xì)胞終溶液(含25萬個活細(xì)胞)，后置于37 ℃培養(yǎng)箱孵育18 h。(2)斑點計數(shù)：①從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板，去除細(xì)胞培養(yǎng)液，恢復(fù)至室溫；②采用磷酸鹽緩沖液(PBS)反復(fù)洗滌3～4次，采用PBS 200倍稀釋濃縮標(biāo)記抗體試劑；③每個反應(yīng)孔加入500 μl標(biāo)記抗體工作液，在4～6 ℃下孵育1 h，后棄標(biāo)記抗體工作液，PBS反復(fù)洗滌2～3次，每個反應(yīng)孔加入50 μl底物顯色溶液后室溫孵育7 min；④采用去離子水徹底洗滌培養(yǎng)板終止反應(yīng)，吹風(fēng)或室溫干燥培養(yǎng)板，記錄每個反應(yīng)孔內(nèi)深藍色清晰斑點數(shù)目。(3)陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：空白對照孔斑點數(shù)≤5個，測試孔A或測試孔B斑點數(shù)≥6個，也判斷為陽性；空白對照孔斑點數(shù)≥6個，測試孔A或測試孔B斑點數(shù)≥2倍空白對照孔斑點數(shù)，判斷為陽性。

1.2.2 結(jié)核抗體試驗 采集患者外周靜脈血5 ml置于含有抗凝劑(肝素)的試管中(若采血后即刻進行試驗則無需抗凝)，常規(guī)分離后取血清進行檢測。采用廣州健倉生物科技有限公司生產(chǎn)的結(jié)核分枝桿菌抗體診斷試劑盒(膠體金法)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作，具體如下：(1)檢測前試劑及標(biāo)本恢復(fù)至室溫；(2)從原包裝袋中取出試劑(1 h內(nèi)使用)，用加樣環(huán)的環(huán)形體蘸取標(biāo)本(約1.0 μl)垂直加于試劑的加樣孔，后于緩沖液孔垂直滴加3滴(約120 μl)緩沖液，開始計時；(3)等待紫紅色條帶出現(xiàn)，測試結(jié)果需在5～10 min內(nèi)讀取，10 min后讀取無效。結(jié)果判斷：出現(xiàn)兩條紫紅色條帶，一條位于測試區(qū)，另一條位于質(zhì)控區(qū)，判斷為陽性；僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶，測試區(qū)內(nèi)無紫紅色條帶，判斷為陰性。

1.3 觀察指標(biāo) (1)比較T-SPOT.TB試驗與結(jié)核抗體試驗的陽性檢出率。(2)T-SPOT.TB試驗與結(jié)核抗體試驗的診斷價值：計算T-SPOT.TB試驗、結(jié)核抗體試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度、特異度和診斷符合率；靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%，特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%，診斷符合率=(真陽性+真陰性)/總例數(shù)。(3)比較T-SPOT.TB試驗與結(jié)核抗體試驗診斷肺外結(jié)核的特異度、靈敏度和診斷符合率。

2 結(jié)果

2.1 陽性檢出率 采用T-SPOT.TB試驗檢出肺外結(jié)核128例，陽性檢出率為73.99%；采用結(jié)核抗體試驗檢出肺外結(jié)核108例，陽性檢出率為62.43%。T-SPOT.TB試驗對肺外結(jié)核的陽性檢出率高于結(jié)核抗體試驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.358，P<0.05)。

2.2 診斷價值 T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度為99.20%，特異度為91.67%，診斷符合率為97.11%；結(jié)核抗體試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度為81.60%，特異度為87.50%，診斷符合率為83.24%，詳見表1、2。T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度、特異度、診斷符合率高于結(jié)核抗體試驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值分別為4.631、3.946、65.430，P<0.05)。

表1 T-SPOT.TB試驗對肺外結(jié)核的診斷價值

表2 結(jié)核抗體試驗對肺外結(jié)核的診斷價值

3 討論

肺外結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染病，嚴(yán)重威脅患者的生命健康，早期診斷是保證治療成功的關(guān)鍵。目前，臨床診斷結(jié)核病的方法主要包括痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查、結(jié)核病影像學(xué)診斷、結(jié)核病免疫學(xué)診斷、結(jié)核分子生物學(xué)診斷、結(jié)核病介入診斷及結(jié)核病病理學(xué)診斷等[8]，其中痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查為肺外結(jié)核的診斷金標(biāo)準(zhǔn)[9]，但該方法檢出率較低，敏感性較差，且不易區(qū)分結(jié)核分枝桿菌為活菌還是死菌；另外，痰液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查受患者資料的全面性、檢查醫(yī)師的經(jīng)驗及體液樣本采集情況(如采集樣本時患者未處于排菌窗口期或采集樣本部位較淺等)等影響較大，增加了臨床診斷的難度。

T-SPOT.TB試驗與結(jié)核抗體試驗是近年新興起的肺外結(jié)核診斷方法，已廣泛應(yīng)用于臨床。本研究中疑診肺外結(jié)核患者采用T-SPOT.TB試驗檢測肺外結(jié)核的陽性檢出率為73.99%，高于結(jié)核抗體試驗的62.43%，與崔魴等[10]、鐘一鳴等[11]、劉曉鶯等[12]、王鳳平等[13]研究結(jié)果一致。提示與結(jié)核抗體試驗相比，T-SPOT.TB試驗可提高肺外結(jié)核的檢出率。孫雯雯等[14]研究顯示，T-SPOT.TB試驗對肺外結(jié)核的陽性檢出率為89.74%，高于本研究的73.99%，分析原因可能是由于研究樣本量和研究對象選擇差異造成的。本研究中T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度、特異度、診斷符合率均高于結(jié)核抗體試驗，與萬榮等[15]、鄭臻等[16]、FERGUSON等[17]、ESCALANTE等[18]研究結(jié)果一致。提示T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核的診斷準(zhǔn)確率較高，誤診率和漏診率較低。

綜上所述，T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核的靈敏度、特異度和診斷符合率高于結(jié)核抗體試驗，值得臨床推廣應(yīng)用。但本研究未分析T-SPOT.TB試驗對肺外結(jié)核的鑒別診斷價值，仍有待進一步研究；另外，采用T-SPOT.TB試驗診斷肺外結(jié)核仍存在誤診、漏診情況，臨床需根據(jù)實際情況采用T-SPOT.TB試驗和結(jié)核抗體試驗進行聯(lián)合診斷，當(dāng)兩種方式診斷結(jié)果不一致時，臨床醫(yī)師根據(jù)患者具體情況做出最后判斷，以降低漏診率、誤診率。

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(本文編輯：李潔晨)

Diagnostic Value of T-SPOT.TB Test and Tuberculosis Antibody Test on Extrapulmonary Tuberculosis

ZHANGQiao-feng.HospitalofJiuyuanDistrict，Baotou，Baotou014060，China

Objective To analyze the diagnostic value of T-SPOT.TB test and tuberculosis antibody test on extrapulmonary tuberculosis.Methods From April 2014 to March 2016，a total of 173 suspected extrapulmonary tuberculosis patients were selected in the Hospital of Jiuyuan District，Baotou，finally 125 cases diagnosed as extrapulmonary tuberculosis，48 cases were not extrapulmonary tuberculosis；all of them received T-SPOT.TB test and tuberculosis antibody test，positive detection rate and diagnostic value were compared between the two methods.Results We take the bacteriological examination results of sputum specimen as the gold standard for extrapulmonary tuberculosis，the positive detection rate of T-SPOT.TB test was 73.99%，that was statistically significantly higher than of tuberculosis antibody test of 62.43%(P<0.05).The sensitivity of T-SPOT.TB test in diagnosing extrapulmonary tuberculosis was 99.20%，the specificity was 91.67%，the diagnostic accordance rate was 97.11%；the sensitivity of tuberculosis antibody test in diagnosing extrapulmonary tuberculosis was 81.60%，the specificity was 87.50%，the diagnostic accordance rate was 83.24%；the sensitivity，specificity and diagnostic accordance rate of T-SPOT.TB test was statistically significantly higher than that of tuberculosis antibody test in diagnosing extrapulmonary tuberculosis，respectively(P<0.05).Conclusion The sensitivity，specificity and diagnostic accordance rate of T-SPOT.TB test are statistically significantly higher than those of tuberculosis antibody test in diagnosing extrapulmonary tuberculosis.

Tuberculosis；T cells spot test of tuberculosis infection；Tuberculosis antibody；Diagnosis

014060內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市九原區(qū)醫(yī)院

R 52

B

10.3969/j.issn.1008-5971.2016.10.022

2016-05-06；

2016-09-29)