陳蓉艷,劉繼來,高芳琳,李揚(yáng)宇,賴雯斕
(福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,福建福州350004)
冷凍血漿在血漿黏度室內(nèi)質(zhì)控中的應(yīng)用及評價(jià)
陳蓉艷,劉繼來,高芳琳,李揚(yáng)宇,賴雯斕
(福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,福建福州350004)
目的自制混合冷凍血漿(來源于健康體檢人群)以及臨床上報(bào)廢的濾白冷凍新鮮血漿(來源于獻(xiàn)血者)用于血液流變學(xué)中血漿黏度的室內(nèi)質(zhì)量控制,并對其進(jìn)行評價(jià)。方法收集健康體檢人群的血漿充分混合后、-20℃低溫保存自制混合冷凍血漿,同時(shí)采用無償獻(xiàn)血者報(bào)廢濾白冷凍新鮮血漿,用于室內(nèi)質(zhì)控檢測,并對其進(jìn)行精密度和穩(wěn)定性評價(jià)。結(jié)果健康體檢人群混合冷凍血漿的血漿黏度定值范圍為1.548±0.025(CV:1.622%),180d以內(nèi)穩(wěn)定性良好,無償獻(xiàn)血者報(bào)廢濾白冷凍新鮮血漿的血漿黏度的定值范圍為1.182±0.008(CV:0.688%),兩者的室內(nèi)質(zhì)控均未見失控。結(jié)論兩種冷凍質(zhì)控血漿的精密度與穩(wěn)定性均良好。
血漿黏度;室內(nèi)質(zhì)量控制;應(yīng)用評價(jià)
國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院檢驗(yàn)科所進(jìn)行的血液流變學(xué)檢測中血漿黏度的室內(nèi)質(zhì)控為空白,也無商品血漿黏度質(zhì)控物可購買。為了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠,我們應(yīng)用健康體檢人群的混合冷凍血漿以及無償獻(xiàn)血者的報(bào)廢濾白冷凍新鮮血漿作為血漿黏度測定的室內(nèi)質(zhì)控物,建立本科室的血漿黏度室內(nèi)質(zhì)量控制體系。
1.1 儀器與試劑SA7000血液流變儀(北京賽科希德);低溫冰箱(日本三洋);TS-8振蕩器(海門其林貝爾);電熱恒溫水浴箱(江蘇新康出);純水機(jī)(杭州天創(chuàng))。其余試劑均為北京賽科希德公司產(chǎn)品。
1.2 質(zhì)控血漿的制備
1.2.1 健康體檢人群的冷凍混合血漿的配制一次性收集一天內(nèi)健康體檢人群(HBsAg、HCV、HIV、RPR陰性,血清蛋白、肝功、血脂、血糖正常,血漿黏度在正常參考值范圍內(nèi))的肝素鋰抗凝血漿,排除脂血、黃疸、溶血標(biāo)本,收集血漿于一個(gè)潔凈大燒杯中,充分混勻,并經(jīng)56℃、30min滅活后備用,取出5ml用于定值,其余以每支500μl分裝于EP管中,置低溫冰箱-20℃保存,分裝過程血漿置于TS-8振蕩器上持續(xù)混勻并在2h內(nèi)完成。
1.2.2 無償獻(xiàn)血者報(bào)廢濾白冷凍新鮮血漿分裝將確定報(bào)廢的血漿及時(shí)地取出5ml用于定值,其余以每支500μl分裝于EP管中,置低溫冰箱-20℃保存,分裝過程血漿置于TS-8振蕩器上持續(xù)混勻并在2h內(nèi)完成。
1.2.3 純水的定值純水機(jī)配置的純水分裝到干凈檢測管內(nèi)用于日常校準(zhǔn)及定值。
1.3 質(zhì)控血漿的定值SA7000血液流變儀經(jīng)日常維護(hù)后,對血漿黏度進(jìn)行定標(biāo)校準(zhǔn),取上述健康體檢人群的混合冷凍血漿、無償獻(xiàn)血者的報(bào)廢濾白冷凍血漿在37℃電熱恒溫水浴箱內(nèi)溫浴15~ 30min,同純水一起重復(fù)測定20次,分別計(jì)算得出均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)作為各自的定值范圍。
1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)間隔若干工作日取質(zhì)控血漿20份樣本,分別在3d、30d、60d、120d、180d后完成相同數(shù)量的檢測,由于無償獻(xiàn)血者報(bào)廢濾白冷凍新鮮血漿只收集到200ml,分別在3d、30d、60d進(jìn)行了檢測。而后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,用以反應(yīng)隨時(shí)間推移冷凍血漿的穩(wěn)定性變化。
1.5 冷凍血漿室內(nèi)質(zhì)控的應(yīng)用利用均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)確定Levey-Jennings質(zhì)控圖的x±2s上下警告線和x±3s質(zhì)控上下限,每天常規(guī)檢測開展室內(nèi)質(zhì)控。同一批號的冷凍血漿每月的室內(nèi)質(zhì)控上下警告線和質(zhì)控上下限采用數(shù)據(jù)累計(jì)的方法來確定。采用Westgard規(guī)則質(zhì)控方法進(jìn)行判斷。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
2.1 質(zhì)控血漿的定值健康體檢人群的混合冷凍血漿(n=20):1.548±0.025(CV:1.622%);無償獻(xiàn)血者的報(bào)廢濾白冷凍新鮮血漿(n=20):1.182±0.008(CV:0.688%);純水(n=20):0.709±0.006(CV:0.779%)。2.2穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見表1、表2、表3。
2.3 室內(nèi)質(zhì)控的應(yīng)用見圖1、圖2、圖3。
血液流變學(xué)中的血漿黏度用于評估血漿黏度的異常,許多因素會影響血漿黏度,血漿蛋白是影響血漿黏度的主要因素,纖維蛋白原、免疫球蛋白和其它血漿蛋白含量、分子構(gòu)成和大小都是影響血漿黏度的主要因素,洪流等[2]在研究不同臨床類型冠心病診療纖溶系統(tǒng)標(biāo)志物的變化時(shí)發(fā)現(xiàn)血漿Fg、FDP、D-D含量明顯升高,有顯著性差異(P<0.01),認(rèn)為患者血漿纖溶系統(tǒng)失衡,其中AMI和UAP患者存在異常激活的高凝狀態(tài)。王秋豐[3]Culleton BF[4]等也注意到某些心血管疾病患者Fbg有升高的趨勢。劉繼來等[5]在探討血漿纖維蛋白原、血脂血糖與血黏度的相關(guān)性時(shí)提出纖維蛋白原與血漿黏度具有顯著線性相關(guān),一元及多元回歸分析均顯示其與血漿黏度的相關(guān)系數(shù)最大,相關(guān)性較其它指標(biāo)更明顯。此外,膽固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白的含量與黏度成正比;血糖升高,血漿黏度升高;杜貴萍[6]等提出脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)在心肌梗死早期診斷中有重要意義。鄧榮春等[7,8]提出血清non-HDL-C及apoB/apoA1比值的升高與心血管事件發(fā)生危險(xiǎn)性明顯正相關(guān),而冠心病患者血清HDL-C和ApoAl水平明顯降低。白血病患者由于血液內(nèi)存在大量白細(xì)胞,裂解后血漿中出現(xiàn)大量核酸,血漿黏度也會升高。而血漿黏度升高可以引起全血黏度的升高,因?yàn)檠獫{不僅以其固有黏度影響全血黏度,更重要的是其蛋白的橋接作用造成紅細(xì)胞的聚集。血液流變學(xué)血漿黏度測定現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床[9,10],特別是在代謝綜合征高血脂、糖尿病、冠心病、動脈粥樣硬化中起到重要的輔助診斷作用,同時(shí)對亞健康狀態(tài)也有提示意義[11]。
表1 健康體檢人群的冷凍混合血漿穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
表2 無償獻(xiàn)血者的報(bào)廢濾白冷凍新鮮血漿穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
表3 純水穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
圖1 2016年3月份健康體檢人群的混合冷凍血漿室內(nèi)質(zhì)控圖(CV=3.017%)
圖2 2016年3月份無償獻(xiàn)血者報(bào)廢濾白冷凍新鮮血漿室內(nèi)質(zhì)控圖(CV=2.435%)
圖3 2016年3月份純水室內(nèi)質(zhì)控圖(CV=2.257%)
做好血漿黏度的室內(nèi)質(zhì)量控制是保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠,更好服務(wù)于臨床和患者的重要前提。本科室使用北京賽科希德SA7000全自動血液流變儀測定血漿黏度,所采用的方法為毛細(xì)血管法,利用標(biāo)準(zhǔn)毛細(xì)管在相同條件下,液體黏度不同,流過一定體積的液體所需時(shí)間不同,黏度越大所需時(shí)間越長的原理,測量結(jié)果為同水的比黏度。目前血液流變學(xué)全血黏度已經(jīng)有了商品的非牛頓質(zhì)控物,衛(wèi)生部臨檢中心及各省臨檢中心也有開展針對全血黏度的室間質(zhì)評,而作為牛頓流體的血漿,商品血漿黏度質(zhì)控物仍是空白。這一空白已引起了大家的關(guān)注,孫麗萍等[12]采用聚乙二醇600作為血漿黏度檢測的質(zhì)控品,李迎旭等[13]則采用了乙基淀粉。還有一部分實(shí)驗(yàn)室[14,15]采用移動值法對血漿黏度進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。使用冷凍血漿來開展室內(nèi)質(zhì)控,相較于各類化學(xué)試劑有便于獲取、變廢為寶、經(jīng)濟(jì)方便的優(yōu)點(diǎn),而移動均值法不能完成替代傳統(tǒng)的質(zhì)控樣本,特別是對于一些沒有配備LIS系統(tǒng)和標(biāo)本量不大的基層醫(yī)院,移動均值法有其固有的缺陷。
從以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析可知,不論是健康體檢者自制混合冷凍血漿還是臨床上報(bào)廢的濾白冷凍新鮮血漿均能滿足了室內(nèi)質(zhì)量控制的要求,其CV值在5%以內(nèi),變異系數(shù)低,滿足了室內(nèi)質(zhì)量控制的要求,前者在180d后穩(wěn)定性良好,后者在60d后穩(wěn)定性也是良好的,應(yīng)用于每日的室內(nèi)質(zhì)控也獲得良好的效果,此外使用純水進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控,穩(wěn)性性和室內(nèi)質(zhì)控效果相較于前兩種質(zhì)控品更為顯著。比較這三種室內(nèi)質(zhì)控的方法,各自均有優(yōu)缺點(diǎn),純水每天新鮮配置,穩(wěn)定性最好,在37℃其定值更是穩(wěn)定在0.69左右,與文獻(xiàn)相符[16],室內(nèi)質(zhì)控效果最佳,但其不含各種血漿成分,雖然同為牛頓液體,與血漿的黏度特性還是有相當(dāng)程度的差異,故而用于血漿黏度的室內(nèi)質(zhì)控并不合理。健康體檢者自制混合冷凍血漿采自新鮮血液分裝冷凍后配置而成,其定值結(jié)果在正常參考值范圍內(nèi),這便于我們對正常人群進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控(中值質(zhì)控),但是該類標(biāo)本需通過甄選,除了體檢者需滿足HBs Ag、HCV、HIV、RPR陰性,血清蛋白、肝功、血脂、血糖正常,血漿黏度在正常參考值范圍內(nèi)等指標(biāo)要求,還需排除脂血、黃疸、溶血等異常性狀標(biāo)本,同時(shí)還需經(jīng)56℃、30min滅活后方能放心使用,程序繁瑣,不易堅(jiān)持開展下去。臨床上報(bào)廢的冷凍新鮮血漿則無需經(jīng)過以上繁瑣步驟可直接使用,但不易長期獲得,且經(jīng)血液中心保存液稀釋后,并冷凍處理后,其定值常常在正常參考值低限,更適用于低值質(zhì)控而不適用于中值質(zhì)控,此外,聯(lián)合使用移動均值法,也是到血漿黏度的室內(nèi)質(zhì)控一種有益的補(bǔ)充。
綜上為本科室對血漿黏度室內(nèi)質(zhì)控的嘗試,我們將進(jìn)一步觀察其更長時(shí)長的穩(wěn)定性及室內(nèi)質(zhì)控的效果,尋求穩(wěn)定性好、操作簡便的方法,建立適合本科室特點(diǎn)的血漿黏度室內(nèi)質(zhì)控體系。
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Establishment and Analysis on IQC of plasma viscosity by frozen plasma
CHEN Rongyan,LIU Jilai,GAO Fanglin,LI Yangyu,LAI Wenlan.
Department of Clinical Laboratory,the People’s Hospital Affiliated to Fujian University of Traditional Chinese Medicine,F(xiàn)uzhou 350004,China.
ObjectiveTo establish and analysis internal quality control(IQC)of plasma viscosity by using frozen plasma from the healthy people and blood donors.MethodsThe plasma which was collected from the healthy people was mixed and stored in cryopreservation(-20℃)and then was used as IQC.And meantime the clinically scrapped frozen plasma from blood donors also was detected as IQC.ResultsRespectively,the value ranges of IQC are 1.548±0.025(CV:1.622%)and 1.182±0.008(CV:0. 688%).And plasma is stable within 180 days.ConclusionTwo types of frozen plasma have good precision and stability,and it could be used for plasma viscosity internal quality control in clinical laboratory.
plasma viscosity;internal quality control;application evaluation
R446.11+1,R457.1+2
A
1674-1129(2016)06-0710-03
10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.004
2016-06-13;
2016-11-11)
福建中醫(yī)藥大學(xué)校管課題,編號:XB2015002
陳蓉艷,女,1980年6月生,碩士,主治醫(yī)師/助教,目前從事臨床血液學(xué)專業(yè)。