胡金偉,張 麗,桑國(guó)耀,顧 挺
(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心,新疆烏魯木齊830054)
·論著·
γ-干擾素體外釋放試驗(yàn)在結(jié)核性疾病中的診斷價(jià)值
胡金偉,張 麗,桑國(guó)耀,顧 挺
(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心,新疆烏魯木齊830054)
目的探討結(jié)核分枝桿菌相關(guān)γ-干擾素體外釋放試驗(yàn)(Interferon Gamma Release Assays,IGRA)在結(jié)核性疾病中的診斷價(jià)值。方法采用TB-IGRA方法檢測(cè)經(jīng)本院臨床證實(shí)的235例結(jié)核病患者,101例非結(jié)核性患者外周血γ-干擾素釋放水平,同時(shí)與涂片抗酸染色、結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)及結(jié)核抗體結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果經(jīng)比較,TB-IGRA對(duì)結(jié)核性疾病診斷的靈敏度86.4%,均高于其他幾種結(jié)核病檢測(cè)方法,且具有較高的特異度,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值95.7%,陰性預(yù)測(cè)值為74.2%。結(jié)論體外γ-干擾素釋放試驗(yàn)是一種輔助診斷結(jié)核病的快速、有效的方法,具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。
γ-干擾素;結(jié)核性疾??;診斷價(jià)值
結(jié)核性疾病是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)所致的以呼吸系統(tǒng)感染為主的慢性傳染病,嚴(yán)重危害著人類健康,據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì),全世界約三分之一的人群感染了結(jié)核分枝桿菌,每年約有800萬(wàn)新發(fā)病例,約140萬(wàn)人死于結(jié)核病。我國(guó)是結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家,發(fā)病率位居全球第二位[1]。對(duì)結(jié)核病的有效控制則有賴于對(duì)結(jié)核分枝桿菌的快速檢測(cè)[2],結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)γ-干擾素體外釋放試驗(yàn)(TB-IGRA)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)[3]。人體感染結(jié)核分枝桿菌后能產(chǎn)生特異性T淋巴細(xì)胞,當(dāng)外周血中的T淋巴細(xì)胞再次遇到結(jié)核抗原后被激活、增值并分泌γ-干擾素(IFN-γ)。IGRAs即采用結(jié)核分枝桿菌特異性重組抗原(卡介苗、其他分枝桿菌沒有的缺失區(qū)域RD1編碼的ESAT-6和CPF-10蛋白)在體外刺激全血標(biāo)本中特異性T細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答[4],并根據(jù)特異性免疫應(yīng)答的水平進(jìn)行定量分析來(lái)判斷患者結(jié)核分枝桿菌感染的情況。本研究采用IGRAs對(duì)結(jié)核病患者標(biāo)本進(jìn)行了檢測(cè),并與其它結(jié)核實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法進(jìn)行比較,對(duì)此技術(shù)在臨床中的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行評(píng)估,現(xiàn)報(bào)道如下。
1.1 一般資料收集2015年6月至2016年6月我院門診及住院患者樣本336例,男215例,女121例,年齡16~55歲。根據(jù)患者臨床癥狀、痰涂片、痰培養(yǎng)等指標(biāo)將樣本分為肺結(jié)核組178例(又分為菌陰肺結(jié)核組103例和菌陽(yáng)肺結(jié)核組75例、肺外結(jié)核組57例(包括骨結(jié)核8例、脊柱結(jié)核11例、結(jié)核性胸膜炎17例、結(jié)核性腹膜炎21例)及其他非結(jié)核組101例(包括慢性阻塞性肺疾病38例、高血壓23例、糖尿病12例、腎病綜合征17例、白血病11例等)。結(jié)核病診斷依據(jù)≤中華人民共和國(guó)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS288-2008)≥[5]。
1.2 主要儀器與試劑主要儀器為艾德康E180酶標(biāo)儀,37℃恒溫箱,低速離心機(jī),TB-IGRA診斷試劑盒由北京萬(wàn)泰藥業(yè)股份有限公司提供。涂片抗酸染色液由珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)試劑由北京博奧有限公司生產(chǎn),結(jié)核抗體試劑由珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司生產(chǎn)。
1.3 方法
1.3.1 采集肝素抗凝靜脈血>4ml,在2h之內(nèi)將全血標(biāo)本輕柔顛倒混勻3~5次后分裝到本底對(duì)照管(N)、測(cè)試管(T)、陽(yáng)性對(duì)照管(P)三種培養(yǎng)管中,每管1ml新鮮全血,輕柔顛倒混勻后放入37℃恒溫箱培養(yǎng)22±2h,培養(yǎng)后的全血以3000~5000r/min離心10min,吸取血漿,以ELISA方法(雙抗體夾心法)檢測(cè)IFN-γ水平,所有操作均嚴(yán)格按照TB-IGRA診斷試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。結(jié)果判定:如果本底對(duì)照管≤400pg/ml,測(cè)試管-本底對(duì)照管≥14pg/ml且≥N/4即為陽(yáng)性,如果本底對(duì)照管≤400pg/ml,陽(yáng)性對(duì)照管-測(cè)試管≥20pg/ml,測(cè)試管-本底對(duì)照管<14pg/ml或者測(cè)試管-本底對(duì)照管≥14pg/ml但<N/4即為陰性。
1.3.2 涂片抗酸染色、結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)及結(jié)核抗體檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 TB-IGRA靈敏度與特異度分析在確診178例肺結(jié)核患者中156例TB-IGRA檢測(cè)陽(yáng)性,57例肺外結(jié)核中47例TB-IGRA陽(yáng)性,101例非結(jié)核病的病例中92例TB-IGRA檢測(cè)陰性,TB-IGRA診斷結(jié)核的靈敏度為86.4%,特異度為91.1%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為95.7%,陰性預(yù)測(cè)值為74.2%,見表1。
2.2 菌陰肺結(jié)核與菌陽(yáng)肺結(jié)核比較103例菌陰肺結(jié)核與75例菌陽(yáng)肺結(jié)核TB-IGRA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率分別為87.1%和89.3%,兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。
2.3 TB-IGRA診斷價(jià)值分析臨床確診的178例肺結(jié)核病例中,涂片抗酸染色陽(yáng)性為75例,靈敏度為42.1%,結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)陽(yáng)性114例,靈敏度為62.91%,結(jié)核抗體陽(yáng)性為103例,靈敏度為57.9%;57例肺外結(jié)核病例中,涂片抗酸染色陽(yáng)性10例,靈敏度為17.5%,結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)22例,靈敏度為38.6%,結(jié)核抗體陽(yáng)性21例,靈敏度為36.8%;與TB-IGRAs檢測(cè)肺結(jié)核與肺外結(jié)核靈敏度87.6%和82.4%相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見表3。
表1 結(jié)核組與非結(jié)核組TB-IGRA檢測(cè)結(jié)果
表2 菌陰與菌陽(yáng)肺結(jié)核TB-IGRA檢測(cè)結(jié)果比較
表3 TB-IGRA試驗(yàn)與涂片抗酸染色、結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)及結(jié)核抗體在患者中的比較情況[陽(yáng)性例數(shù)(%)]
結(jié)核病是一種感染結(jié)核分枝桿菌的傳染性疾病,目前臨床對(duì)結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要有涂片抗酸染色、結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)及分枝桿菌培養(yǎng)等,但是這些檢測(cè)方法存在敏感性低、操作復(fù)雜及檢測(cè)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)[6]。結(jié)核菌感染的免疫反應(yīng)主要是細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),Dosanjh[7]等研究說(shuō)明IFN-γ可以反映人體結(jié)核的細(xì)胞免疫情況。體外γ-干擾素釋放試驗(yàn)就是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種結(jié)核分枝桿菌特異性免疫檢測(cè)方法,能夠在體外快速檢測(cè)結(jié)核效應(yīng)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子IFN-γ,來(lái)判斷是否存在結(jié)核分枝桿菌感染。目前該方法已在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家得到廣泛臨床應(yīng)用[8,9]。
本實(shí)驗(yàn)對(duì)178例肺結(jié)核、57例肺外結(jié)核及101例非結(jié)核性疾病患者外周血進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,TB-IGRA在結(jié)核性疾病診斷中具有較高的靈敏度(86.4%)和特異度(91.1%),且對(duì)肺結(jié)核與肺外結(jié)核的檢測(cè)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而涂片抗酸染色、結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)及結(jié)核抗體在結(jié)核診斷的靈敏度分別為35.3%、57.9%、52.7%,與TB-IGRA相比,TB-IGRA靈敏度明顯高于以上三種檢測(cè)方法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與國(guó)內(nèi)外報(bào)道基本一致[10-12]。說(shuō)明TB-IGRA明顯優(yōu)于其他結(jié)核檢測(cè)方法,可作為結(jié)核病診斷的較敏感指標(biāo)。我們還對(duì)菌陰肺結(jié)核與菌陽(yáng)肺結(jié)核患者進(jìn)行了比較,結(jié)果顯示TB-IGRA檢測(cè)的陽(yáng)性率分別為87.1%和89.3%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明TB-IGRA可以作為菌陰肺結(jié)核診斷的方法之一。
國(guó)內(nèi)許多報(bào)道應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(Eispot)進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌特異性T細(xì)胞檢測(cè)作為結(jié)核診斷的方法[13-15],而該方法直接進(jìn)行全血培養(yǎng),省去了Eispot方法中分離細(xì)胞及培養(yǎng)步驟,并且利用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量檢測(cè)而非鏡檢,結(jié)果更容易判斷。
綜上所述,TB-IGRA作為靈敏度高、特異度高的結(jié)核分枝桿菌免疫學(xué)檢測(cè)方法,對(duì)于臨床診斷結(jié)核具有極大的推廣應(yīng)用價(jià)值,但是該方法檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性僅提示患者存在結(jié)核分枝桿菌感染,尚不能區(qū)分是活動(dòng)性、潛伏性、還是陳舊性結(jié)核,需與患者其他臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查等相結(jié)合來(lái)綜合分析。
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The diagnosis value of interferon-gamma in vitro release assay in patients with tuberculosis
HU Jinwei,ZHANG Li,SANG Guoyao,GU Ting.
Department of Clinical Laboratory,F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,Urumqi 830054,China.
ObjectiveTo evaluate the diagnosis value of interferon gamma(IFN-γ)release assay(IGRA)associated with Mycobacterium tuberculosis in patients with tuberculosis(TB).MethodsThe level of IFN-γ release in peripheral blood were detected in 235 patients who were clinically diagnosed tuberculosis,101 patients with non-tuberculosis,and the results were compared with results of the sputum smear,DNA testing and tuberculosis antibody detection,respectively.ResultsThe diagnostic sensitivity and specificity of TB-IGRA were higher than other tests(P<0.05).The positive predictive value and negative predictive value were 95.7%,74.2%,respectively.ConclusionThe TB-IGRA with a higher clinical value might be a quick and effective tool for diagnosis of TB infection.
Interferon-gamma;Tuberculosis;Diagnosis value
R378.91+1,R52
A
1674-1129(2016)06-0704-03
10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.002
2016-09-06;
2016-11-20)
新疆維吾爾自治區(qū)聯(lián)合基金(2016D01C293)。
胡金偉,女,1983年7月11日生,檢驗(yàn)醫(yī)師,研究方向?yàn)楦腥久庖摺?/p>
顧挺,男,1973年6月1日生,主管技師,主要從事臨床免疫檢驗(yàn)。