蔡林森

(青海省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，青海西寧810001)

青稞酒中甜蜜素檢測方法的研究

蔡林森

(青海省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，青海西寧810001)

采用氣相色譜法測定青稞酒中甜蜜素的含量，通過優(yōu)化衍生化條件，建立了青稞酒中甜蜜素準(zhǔn)確定量的檢測方法。甜蜜素在酸性條件下和亞硝酸鈉發(fā)生反應(yīng)，生成易氣化的環(huán)己醇亞硝酸酯。若衍生化條件控制不當(dāng)，衍生產(chǎn)物將產(chǎn)生2個色譜峰，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化甜蜜素的提取條件和衍生化條件，建立了一種準(zhǔn)確檢測青稞酒中甜蜜素的方法，同時(shí)用青稞酒配制甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液，有效減小了基質(zhì)效應(yīng)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。將不同濃度的甜蜜素加入青稞酒中進(jìn)行回收率和精密度分析，回收率范圍為92.5%～105.0%，RSD為1.50%。

甜蜜素； 青稞酒； 氣相色譜法； 檢測

環(huán)己基氨基磺酸鈉（俗名甜蜜素 Sodium Cyclamate是一種常用的甜味劑，屬于非營養(yǎng)型添加劑，其甜度是蔗糖的40～50倍[1]。由于其價(jià)格低，而且用量過多時(shí)也無苦味，因此廣泛應(yīng)用在酒、果汁、糕點(diǎn)等食品中。已有實(shí)驗(yàn)證明食用過多會致癌，因此在使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制其用量[2]。

目前，檢測食品中甜蜜素的方法最常用的是氣相色譜法[3-6]。有文獻(xiàn)報(bào)道采用氣相質(zhì)譜法[7]，高效液相色譜法[8-9]，液質(zhì)聯(lián)用法測定食品中甜蜜素的含量[10]。由于衍生化的溫度控制不好，測定反應(yīng)產(chǎn)物會出現(xiàn)2個色譜峰不能夠準(zhǔn)確定量。

本實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化甜蜜素的提取條件和衍生化條件建立了一種能夠準(zhǔn)確檢測青稞酒中甜蜜素的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

青稞酒，互助青稞酒廠提供；正己烷，默克股份兩合公司；氯化鈉/亞硝酸鈉，天津市永大化學(xué)試劑有限公司；硫酸，西隴化工股份有限公司；甜蜜素標(biāo)品，中國計(jì)量科學(xué)研究院。

儀器設(shè)備：Agilent7890A氣相色譜儀，安捷倫公司，附氫火焰離子化檢測器；漩渦混合器，江蘇新康醫(yī)療器械有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent19091J-413石英毛細(xì)管柱（30m× 320μm×0.25μm）。

色譜條件：氣化室溫度180℃；FID檢測器溫度180℃；程序升溫80℃，保持6m in；以10℃/min的速率，升到150℃，保持2m in；分流比10∶1；氫氣流量為40m L/min，空氣流量為400m L/m in，尾吹氮?dú)饬髁繛?0m L/min。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

10mg/m L甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制：準(zhǔn)確稱取100mg/m L的甜蜜素固體標(biāo)品，用青稞酒定容至10m L，即配得10mg/m L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，待用。

標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制：從10mg/m L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液中分別吸取10μL、20μL、50μL、80μL、100μL、150μL、200μL于10m L容量瓶中，用青稞酒定容，即配得濃度分別為0.1 mg/m L、0.2 mg/m L、0.5 mg/m L、0.8 mg/m L、1.0mg/m L、1.5mg/m L、2.0mg/m L的溶液，置于冰水浴中保存待用。

1.3.2 青稞酒樣品前處理

準(zhǔn)確吸取適量的青稞酒于100m L帶塞比色管中，放置于冰水浴中，靜置5m in，再加入5m L一定濃度的硫酸，5m L的50 g/L亞硝酸鈉溶液，搖勻，置于冰柜中，每隔一定時(shí)間取出旋渦搖勻，重復(fù)幾次，使其充分反應(yīng)，然后加入10m L的正己烷。

1.3.3 青稞酒中甜蜜素的測定

按照1.2和1.3.2的實(shí)驗(yàn)條件和前處理后，直接取正己烷上機(jī)測試。

1.3.4 樣品前處理對甜蜜素測定的影響

1.3.4.1 硫酸濃度的影響

吸取100μL 10mg/m L的甜蜜素標(biāo)液于帶塞比色管中，分別加入5m L的40 g/L、60 g/L、80 g/L、100 g/L、120 g/L、140 g/L的硫酸。按照1.2和1.3.2的實(shí)驗(yàn)條件和前處理后，直接取正己烷上機(jī)測試。研究不同pH值對甜蜜素含量的影響。

1.3.4.2 衍生化時(shí)間的影響

按照1.2和1.3.2的實(shí)驗(yàn)條件和前處理，控制衍生化時(shí)間，待衍生化進(jìn)行15min、20m in、25m in、30m in、35m in、40m in上機(jī)測定。研究不同衍生化時(shí)間對甜蜜素含量的影響。

1.3.4.3 衍生物穩(wěn)定性的測定

將0.5mg/m L的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液按照1.2和1.3.2的實(shí)驗(yàn)條件和前處理后，取正己烷層上機(jī)測試。間隔時(shí)間為0、0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h測定其鋒面積的大小，研究放置時(shí)間對甜蜜素測定的影響。

1.3.4.4 回收率及精密度實(shí)驗(yàn)

加入不同濃度的甜蜜素標(biāo)品，按照1.2和1.3.2的實(shí)驗(yàn)條件和前處理后，直接取正己烷上機(jī)測試。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到甜蜜素的含量，與加標(biāo)值進(jìn)行比較，可計(jì)算其回收率。

將0.5mg/m L的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品，按照1.2和1.3.2的實(shí)驗(yàn)條件和前處理后，直接取正己烷上機(jī)測試，重復(fù)測定6次，計(jì)算精密度。

2 結(jié)果與分析

2.1 冰水浴的優(yōu)化

在2500m L的燒杯中裝入一些碎冰，加入20 g的氯化鈉，再加入一定量的水，將冰塊淹沒即可。將比色管插到冰里進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，能夠保證溫度在零度以下。用這種方法進(jìn)行衍生化，操作方便簡單。能夠保證反應(yīng)完全，無副產(chǎn)物生成，經(jīng)測定只有1個色譜峰。若直接用冰袋，溫度控制不好，衍生化不完全，有副產(chǎn)物生成，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。

2.2 硫酸濃度的影響

甜蜜素在酸性條件下能和亞硝酸鈉反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，采用不同濃度的硫酸調(diào)pH值，其測定結(jié)果見表1。

表1 pH值對甜蜜素含量的影響

由表1可知，加入5m L的120 g/L硫酸時(shí)其峰面積最大，靈敏度最高，因此采用加入5m L的120 g/L硫酸作為調(diào)節(jié)pH值的最佳值。

2.3 衍生化時(shí)間的影響

甜蜜素在酸性條件下發(fā)生衍生化，因此衍生化時(shí)間直接影響衍生化產(chǎn)物的含量。當(dāng)時(shí)間較短時(shí)，衍生化不充分，使測定結(jié)果偏低；當(dāng)衍生化時(shí)間過長時(shí)，會產(chǎn)生雜峰。不同衍生化時(shí)間對結(jié)果的影響見表2。

表2 衍生化時(shí)間對甜蜜素含量的影響

由表2可知，衍生化時(shí)間為25m in較為合適，因此采用衍生化時(shí)間為25m in。

2.4 衍生物穩(wěn)定性的影響（表3）

表3 pH衍生物穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

由表3可知，在8 h內(nèi)衍生物基本無變化，峰面積下降0.35%。顯示其在室溫下穩(wěn)定，能滿足分析測試要求。

2.5 回收率及精密度測試結(jié)果

通過加標(biāo)回收計(jì)算，得回收率為92.5%～105.0%，經(jīng)重復(fù)測定RSD為1.50%（表4）。

表4 回收率實(shí)驗(yàn)

0.5mg/m L甜蜜素青稞酒樣重復(fù)測定6次的測定值（mg/m L）為0.48、0.47、0.51、0.49、0.48、0.47，平均值為0.48mg/m L，RSD=1.5%。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)方法通過優(yōu)化衍生化條件，得到的衍生產(chǎn)物只有一個色譜峰，通過用基質(zhì)標(biāo)的方法配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，降低了其他物質(zhì)對甜蜜素測定的干擾，因此，使測定結(jié)果更加準(zhǔn)確。得到的線性方程為y=29670X-18630，R2= 0.9992。通過加標(biāo)回收計(jì)算，得到回收率為92.5%～105.0%；經(jīng)重復(fù)性測定，得到RSD=1.50%。

[1] 劉寧,沈明浩,食品毒理學(xué)[M].北京：中國輕工業(yè)出版社, 2007：307.

[2] 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會.食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：GB 2760—2014[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2015.

[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部.食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定：GB/T 5009.97—2003[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004.

[4] 宋瑞霞,謝翔燕.毛細(xì)管氣相色譜法測定食品中甜蜜素[J].食品研究與開發(fā),2008,29(1)：28.

[5] 顧建華,徐愛萍.毛細(xì)管色譜柱氣相色譜法測定黃酒中的甜蜜素的含量[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2007,17(5)：940-941.

[6] 劉劍波,廖燕芝.毛細(xì)管氣相色譜法測定蛋白飲料中甜蜜素的改進(jìn)研究[J].食品與機(jī)械,2007,23(3)：138.

[7] 王佩,王宏.食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉-氣相色譜法測定原理探究[J].食品科學(xué),2008,29(2)：324-327.

[8] 邵鐵峰,李雪岷,陳勤偉,等.高效液相色譜法測定酒中甜蜜素[J].中國釀造,2004(12)：31-32.

[9] 呂國良.高效液相色譜法測定白酒中甜蜜素[J].釀酒科技,2008 (3)：95-99.

[10] 徐春祥,秦金平.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用直接測定白酒中的甜蜜素[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2006,32(2)：106-107.

Determ ination of Sodium Cyclamate in Highland Barley Liquor

CAILinsen
(QinghaiProductQuality Supervision and Inspection Institute,Xining,Qinghai810001,China)

The contentof sodium cyclamate in highland barley liquorwas determ ined by gas chromatography.Sodium cyclamate reacted w ith sodium nitrite under acid conditions and further formed easily gasified cyclohexanol nitrite.Inappropriate control of derivatization conditions may produce two chromatographic peaksof derivatives,whichwould result in inaccurate quantitation.In theexperiment,through the optimization of the extracting conditions and the derivatization of sodium cyclamate,amethod for accurate determ ination of sodium cyclamate in highland barley liquorhad been developed.Meanwhile,the preparation of cyclamate standard solution could effectively reducematrix effects.Sodium cyclamate of different concentration was added in highland barley liquor for recovery rate and RSD analysis,and the recovery rate was 92.5%to 105.0%,and RSD was1.50%.

sodium cyclamate;highland barley liquor;gas chromatography;detection

TS262.3；TS261.7；TS261.4

A

1001-9286（2016）12-0056-03

10.13746/j.njkj.2016274

2016-09-07

蔡林森（1986-），男，重慶開縣人，碩士研究生，助理研究員，研究方向?yàn)椴牧匣瘜W(xué)和食品分析。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2016-11-04；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20161104.1426.006.htm l。