張 文 玄 靜 張穎穎 唐心恬

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【實(shí)驗(yàn)研究】

新鮮仙人掌和蘆薈的抑菌實(shí)驗(yàn)研究*

張 文1玄 靜1張穎穎2唐心恬3

目的 測(cè)定新鮮仙人掌和蘆薈對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌等5種常見(jiàn)細(xì)菌的抑菌作用，以及二者在抑菌方面的差異。方法 采用MH(B)營(yíng)養(yǎng)肉湯遞倍稀釋法，分別研究二者在醇提與水煎兩種方法下對(duì)五種常見(jiàn)細(xì)菌的最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果 經(jīng)醇提得到的兩種藥液，其抑菌效果明顯高于水煎液，而仙人掌醇提液對(duì)幾種常見(jiàn)細(xì)菌均有抑制作用，并且對(duì)金葡萄球菌的抑菌效果明顯高于其它藥液，蘆薈醇提液對(duì)銅綠假單胞菌抑菌效果較明顯。結(jié)論 此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為臨床治療某些致病菌引起的感染時(shí)，選擇仙人掌還是蘆薈藥物提供參考依據(jù)。

仙人掌；蘆薈；醇提液；水煎液；最小抑菌濃度

蘆薈屬百合科蘆薈屬的多年生草本植物，其中含有多種生物活性成分，具有健膚美容、健胃消炎等作用，臨床研究表明，其有抑菌、抗病毒、抗氧化等作用[1]，多用于保健和治療疾病[2]；仙人掌屬仙人掌科仙人掌屬植物，味淡性寒，《陸川本草》中記載其有消炎解毒、排膿解肌的作用，并可食用和藥用[2～4]。兩種藥物在功用上具有很大的相似性，在某種病的治療上可相互替代。本實(shí)驗(yàn)主要研究比較二者經(jīng)不同方法提取所得的藥液在相同致病菌條件下各自的抑菌效果，從而為臨床上某些疾病或感染治療時(shí)選擇仙人掌或蘆薈藥液提供參考依據(jù)，以及為抗金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌等5種細(xì)菌的新藥開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用等提供一定參考依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥物 新鮮仙人掌、新鮮庫(kù)拉索蘆薈。供試菌株：金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003、銅綠假單胞菌CMCC(B)10104，變形桿菌CMCC(B)49027、肺炎克雷伯菌CMCC(B)46117、傷寒沙門菌CMCC(B)14028，由山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。MH(B)營(yíng)養(yǎng)肉湯購(gòu)自北京奧博星生物公司。

1.2 儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，低溫循環(huán)(真空)泵，SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，電子精密天平，由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 提取物制備 醇提液：將蘆薈30 g、仙人掌30 g分別用80%乙醇浸泡24 h，經(jīng)回流、抽濾和旋蒸后最終得到29 ml仙人掌提取液(0.3869 g/ml)、30 ml蘆薈提取液(1.2103 g/ml)，并經(jīng)0.22微米無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾后備用。水煎液：將蘆薈30 g、仙人掌30 g分別進(jìn)行煎煮，冷卻后得到提取液，余下殘?jiān)诙渭铀逯螅?次液體合并、抽濾后得到34 ml仙人掌水煎液(0.1488 g/ml)、38 ml蘆薈水煎液(0.2534 g/ml)，并經(jīng)0.22微米無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾后備用。

1.3.2 MIC測(cè)定 ①細(xì)菌培養(yǎng)基的制備：MH(B)營(yíng)養(yǎng)肉湯分裝后于121℃高壓滅菌20 min。②實(shí)驗(yàn)菌液的制備：以比濁管調(diào)整菌液濃度為1×106CFU/ml。③微量稀釋法抑菌實(shí)驗(yàn)：參照NCCLS標(biāo)準(zhǔn)采用微量稀釋法進(jìn)行。在96孔板中每孔加入培養(yǎng)基100μl，然后在第1行中加入100μl藥液，從第1行中吸取100μl混合液加入第2行，依次類推至第6行，得到2、4、8、16、32、64倍稀釋的藥物。第7行每孔加入雙抗10μl作為陽(yáng)性對(duì)照，第8行直接加入菌液作為陰性對(duì)照。同時(shí)設(shè)立藥物稀釋梯度和培養(yǎng)基空白作為對(duì)照。每種藥物重復(fù)2次。分別加入各菌液10μl，37℃培養(yǎng)24 h后取出觀察現(xiàn)象。

2 結(jié)果

醇提液的抑菌效果明顯高于水煎液。仙人掌醇提液對(duì)幾種常見(jiàn)細(xì)菌均有抑制效果，其對(duì)金葡萄球菌有明顯的抑制作用，其最小抑菌濃度(MIC)為0.0121 g/ml；蘆薈醇提液對(duì)銅綠假單胞菌的抑制效果強(qiáng)于仙人掌醇提液，其最小抑菌濃度(MIC)為0.1513 g/ml，但其對(duì)肺炎克雷伯菌則無(wú)明顯效果。MIC測(cè)定陰性對(duì)照中細(xì)菌生長(zhǎng)良好，陽(yáng)性對(duì)照孔無(wú)明顯生長(zhǎng)，培養(yǎng)基空白無(wú)污染。仙人掌醇提液、仙人掌水煎液以及蘆薈醇提液、蘆薈水煎液最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 四種藥液對(duì)5種常見(jiàn)細(xì)菌的MIC

注：“—”表示無(wú)有效數(shù)據(jù)

3 討論

當(dāng)前，醫(yī)療濫用抗生素現(xiàn)象在中國(guó)非常普遍，然而抗生素的濫用更加劇了細(xì)菌的耐藥性，其會(huì)導(dǎo)致更多種多重耐藥菌的出現(xiàn)[5]。通過(guò)研究中草藥，從中藥中提取有效抗菌成分，利用中藥來(lái)研究抗生素類物質(zhì)可緩解新型抗生素研發(fā)的壓力，甚至為開(kāi)發(fā)新型治療藥物提供可能。本實(shí)驗(yàn)的抑菌研究結(jié)果表明，仙人掌的醇提液對(duì)幾種常見(jiàn)細(xì)菌如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌等均有抑制作用，且對(duì)金葡球菌有明顯抑制效果，所以在臨床上對(duì)由金葡球菌引起的化膿性感染、毛囊感染等采用含仙人掌成分的藥物治療，可取得較好的療效。蘆薈的醇提液對(duì)銅綠假單胞菌的抑制效果明顯強(qiáng)仙人掌，故在臨床上，對(duì)由綠膿假單胞菌引起的手術(shù)傷口感染、燒傷創(chuàng)面感染等采用含蘆薈成分的藥物治療，同樣可取得較好療效。本研究成果將為把仙人掌與蘆薈用于抗金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌等5種細(xì)菌的新藥開(kāi)發(fā)以及臨床應(yīng)用等提供一定的參考依據(jù)。

[1] 孫振紅，魏凱，譚燕玲，等.蘆薈粗提物抑菌及抗病毒作用的研究[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，33(9)：694-698.

[2] 李婷，宮春波，侯曉東，等.蘆薈汁抑菌作用研究[J].華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，12(3)：36-39.

[3] 趙聲蘭，陳朝銀，段家貴.仙人掌提取物的抑菌作用研究[J].食品工業(yè)科技，2003，24(5)：40-43.

[4] 葉波.仙人掌醇提物的抑菌實(shí)驗(yàn)[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，20(3)：80-82.

[5] 梁士兵，王育純，孫娜，等.中草藥蘆薈、苦參對(duì)五種常見(jiàn)細(xì)菌的體外抑菌研究[J].光明中醫(yī)，2016，31(4)：498-499.

Study and comparison on the flesh Chinese Herbal Medicine Aloe and Cactus extracorporeal inhibition

ZHANG Wen1XUAN Jing1ZHANG Yingying2TANG Xintian2

(Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Ji Nan,Shan Dong,250355,China)

Objective Using the flesh herbs ,to mensurate and compare the extracorporeal inhibition effect Of the Aloe vera extraction and Cactus extraction in two different ways for Staphylocaccus aureus, P.aeruginosa and the other three kinds of common bacterium.Methods using MH(B) dilution methods that dilute the consistence of nutritive gravy by decreasing times to mensurate the minimal inhibitory concentration(MIC)that the aloe extraction and cactus extraction in two different ways engender the foundation of inhibition for the five common bacteria.Results Both of them had the inhibiting foundation for the given common bacterium.But the inhibition effect of two herbs extracted by ethanol is better than that extracted by water.And the inhibition of the cactus extracted by ethanol is better than the others for the given five common bacteria,especially for Staphylocaccus aureus,the inhibition of the aloe extracted by ethanol is much significant for P.aeruginosa.Conclusion The experimental results can provide a reference to choose the Aloe or Cactus for the clinical treatment of infection caused by Staphylocaccus aureus and P.aeruginosa.

Aloe;Cactus;alcohol extract;water decortion;minimal inhibitory concentration.

山東中醫(yī)藥大學(xué)SRT項(xiàng)目(No.2015501)

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院本科生2014級(jí)(濟(jì)南 250355)；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室(濟(jì)南 250355)；3.山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院導(dǎo)員辦公室(濟(jì)南 250355)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.24.019

1003-8914(2016)-24-3579-02

?集會(huì)

2017-10-10)