劉宏超

(山西師范大學(xué)，山西 臨汾 041004)

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花椒水煮液對炎癥痛大鼠模型疼痛的影響

劉宏超

(山西師范大學(xué)，山西 臨汾 041004)

目的 探討不同濃度的花椒對炎癥大鼠的鎮(zhèn)痛作用。方法 制備炎癥大鼠模型，對炎癥大鼠分別采用不同濃度花椒水煮液，灌胃5 ml，利用熱板和壓板測痛儀,采用行為學(xué)測痛的方法分別測試5、10、15、20、30、45和60 min大鼠后爪的縮爪反應(yīng)潛伏期(HWL)作為痛覺調(diào)節(jié)標(biāo)志，并與生理鹽水進(jìn)行比較。結(jié)果 灌胃花椒水煮液后的大鼠HWL明顯延長，痛閾值明顯增加。其中灌注5 mg/ml花椒水煮液的炎癥大鼠左右兩爪的熱刺激HWL均顯著增大(P<0.001)，大鼠左爪的機(jī)械刺激HWL顯著增加(P<0.001)，而大鼠右爪的機(jī)械刺激HWL明顯增加(P<0.01)；10 mg/ml花椒水煮液炎癥大鼠左爪的熱刺激和機(jī)械刺激HWL均顯著增大(P<0.001)，而大鼠右爪的熱刺激和機(jī)械刺激HWL均明顯增大(P<0.01)；20 mg/ml花椒水煮液炎癥大鼠左右兩爪的熱刺激HWL均明顯增大(P<0.01)，而大鼠左右兩爪的機(jī)械刺激HWL均顯著增加(P<0.001)；40 mg/ml花椒水煮液炎癥大鼠左右兩爪的熱刺激和機(jī)械刺激HWL均顯著增大(P<0.001)。花椒水煮液對炎癥大鼠鎮(zhèn)痛作用具有劑量依賴性，且在15 min時效果最為明顯。結(jié)論 花椒水煮液明顯延長炎癥大鼠的HWL，具有鎮(zhèn)痛作用。

花椒水煮液；灌胃；炎癥；鎮(zhèn)痛

花椒又名秦椒或山椒等〔1〕，為蕓香科、花椒屬落葉灌木或小喬木，花椒不僅是很好的調(diào)味品，更是常用的中藥材。花椒性溫，味辛，有溫中散寒、健胃除濕、解毒理氣功效，其提取物有麻醉、抗菌、抗腫瘤、行氣鎮(zhèn)痛等多種藥理作用〔2，3〕。目前國內(nèi)外多是研究花椒的揮發(fā)油的鎮(zhèn)痛作用，而花椒水煮液對鹿角菜膠處理的炎癥大鼠鎮(zhèn)痛作用的研究少見報道。本實(shí)驗(yàn)旨在探索花椒水煮液對炎癥大鼠鎮(zhèn)痛的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 9只成年雄性大鼠，體重180～200 g, 由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動物中心提供，整個實(shí)驗(yàn)期間均在飼養(yǎng)室分籠飼養(yǎng)，正常光照光暗周期各12 h，自由進(jìn)食和飲水。飼養(yǎng)溫度約(16～24)℃，相對濕度40%～50%，觀察大鼠的狀態(tài)，篩選出精神狀態(tài)健康的大鼠。試劑藥品有花椒(四川成都)、鹿角菜、生理鹽水等。實(shí)驗(yàn)儀器有熱板測痛儀(YLS-6B)，電子壓痛儀(LYS-3E)，均由濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。0.1、5 ml注射器，智能電子天平，大小燒杯，手套，計時秒表等。

1.2 模型建立 依據(jù)孫衍剛等〔4〕方法，訓(xùn)練時間1 w，選擇達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的健康大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。為了減少實(shí)驗(yàn)誤差，動物所處的受試環(huán)境，訓(xùn)練環(huán)境，技術(shù)操作要點(diǎn)應(yīng)保持一致。

1.3 花椒水煮液的制備 取花椒50 g與375 ml水混合加熱水煮30 min后，過濾，封口包裝待用。花椒干燥2.5 h，稱量，計算出此次花椒水煮液的濃度。稀釋制備出符合實(shí)驗(yàn)用的濃度，4℃冷藏備用。

1.4 受試物濃度的確定 先取出9只大鼠，按估算量灌胃有明顯反應(yīng)，減半再測，以此反復(fù)測出最小濃度和最大濃度的測試量。

1.5 致炎劑的制備 用精密儀器稱取鹿角菜200 mg,加入生理鹽水至10 ml。鹿角菜膠單獨(dú)使用即可誘導(dǎo)局部組織炎癥〔5〕，炎癥過程在第一次注射后1 h內(nèi)開始，動物后爪明顯紅腫等癥狀，這些癥狀一般能持續(xù)至第一次注射后12 h以上，24 h后基本復(fù)原。每次實(shí)驗(yàn)都需重新制備，測試前1 h，應(yīng)向每一只大鼠的爪掌內(nèi)皮下注射2%的致炎劑0.1 ml，使大鼠致炎。

1.6 痛閾測定和行為學(xué)觀察 向大鼠胃內(nèi)灌注不同濃度花椒水煮液前，先測試大鼠的縮爪反應(yīng)潛伏期(HWL)作為基礎(chǔ)值，即空白對照。灌注花椒水煮液后各時間點(diǎn)的HWL以相對于基礎(chǔ)值的變化百分比記錄。為了避免對組織的損傷，應(yīng)設(shè)定測試時間不超過15 s。在灌注花椒水煮液后特定的時間點(diǎn)(5、10、15、20、30、45和60 min)測量大鼠的HWL。①熱板痛覺測試：將大鼠的待測后爪緊貼于預(yù)熱溫度維持在52℃的熱板測痛儀上，待大鼠后爪感覺到疼痛，主動回縮離開熱板時停止計時。記錄數(shù)據(jù)，作為痛覺調(diào)節(jié)的標(biāo)志。重復(fù)測定時應(yīng)稍稍移動測定點(diǎn)，防止組織損傷。②壓板痛覺測試：使用壓力測痛儀對大鼠進(jìn)行壓力測試，使小楔形有機(jī)玻璃壓在鼠爪的跗趾關(guān)節(jié)處，施加壓力，待大鼠感覺到疼痛時，即后爪主動往回收縮，記錄該壓力值，作為痛覺調(diào)節(jié)的標(biāo)志。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t、F檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

灌注5 mg/ml花椒水煮液炎癥大鼠與生理鹽水相比，左右兩爪熱刺激HWL均顯著增大(P<0.001)，左爪機(jī)械刺激HWL顯著增加(P<0.001)，而對右爪機(jī)械刺激HWL明顯增加(P<0.01)；灌注10 mg/ml花椒水煮液炎癥大鼠與生理鹽水相比，大鼠左爪熱刺激和機(jī)械刺激HWL均顯著增加(P<0.001)，而右爪熱刺激和機(jī)械刺激HWL均明顯增大(P<0.01)；灌注20 mg/ml花椒水煮液炎癥大鼠與生理鹽水相比，大鼠左右爪熱刺激HWL均明顯增大(P<0.01)，而左右爪機(jī)械刺激HWL均顯著增加(P<0.001)；灌注40 mg/ml花椒水煮液炎癥大鼠與生理鹽水相比，大鼠左右爪熱刺激和機(jī)械刺激HWL均顯著增大(P<0.001)?；ń匪笠簩ρ装Y大鼠鎮(zhèn)痛作用具有劑量依賴性，且15 min時效果最明顯，見表1。

組別部位HWL(s)灌胃5min10min15min20min30min45min60minF值P值5mg/ml熱板測試花椒水煮液組左側(cè)1.45±0.0415.11±4.4937.00±3.0641.10±3.7335.44±5.5819.58±5.8015.02±4.217.49±4.353)22.5966110.000469右側(cè)2.96±0.077.77±2.3618.41±2.7822.21±2.8919.24±2.3911.26±2.567.01±2.28-1.80±2.463)34.6370550.000741生理鹽水組左側(cè)1.32±0.10-1.62±5.622.81±6.02-7.86±4.71-0.61±10.283.37±7.16-0.84±6.872.60±4.33右側(cè)2.76±0.08-1.88±1.680.14±2.291.54±2.62-1.64±3.611.72±2.333.61±2.411.57±2.55壓板測試花椒水煮液組左側(cè)100.35±31.6612.71±2.3918.42±2.2420.17±2.5918.70±1.8313.11±2.607.16±1.182.01±0.852)39.0470170.000062右側(cè)138.75±1.604.80±1.756.23±2.775.27±1.724.24±2.001.52±2.131.48±1.52-0.50±1.701)11.3366900.005601生理鹽水組左側(cè)87.76±27.830.06±4.92-1.63±3.39-2.98±4.13-4.17±3.130.71±7.855.29±5.434.46±4.80右側(cè)133.56±1.33-2.84±2.441.21±1.33-1.35±2.07-2.91±1.700.82±2.062.59±1.68-0.05±2.2710mg/ml熱板測試花椒水煮液組左側(cè)1.41±0.0929.89±8.2462.21±8.7666.04±9.6152.57±9.0638.93±8.4521.20±4.289.89±3.023)22.9863690.000437右側(cè)2.96±0.0410.53±2.1426.34±4.2236.62±4.7822.44±4.9712.92±1.749.08±1.663.25±0.842)11.1679490.005867生理鹽水組左側(cè)1.32±0.10-1.62±5.622.81±6.02-7.86±4.71-0.61±10.283.37±7.16-0.84±6.872.60±4.33右側(cè)2.76±0.08-1.88±1.680.14±2.291.54±2.62-1.64±3.611.72±2.333.61±2.411.57±2.55壓板測試花椒水煮液組左側(cè)100.16±31.5318.11±4.1327.57±2.4730.03±2.9928.23±3.6022.43±2.9114.37±2.484.38±1.693)25.5986720.000280右側(cè)14.2.36±1.104.19±1.608.78±2.0911.09±1.317.40±1.435.04±0.852.27±0.53-0.58±0.602)11.8647340.004853生理鹽水組左側(cè)87.76±27.830.06±4.92-1.63±3.39-2.98±4.13-4.17±3.130.71±7.855.29±5.434.46±4.80右側(cè)133.56±1.33-2.84±2.441.21±1.33-1.35±2.07-2.91±1.700.82±2.062.59±1.68-0.05±2.2720mg/ml熱板測試花椒水煮液組右側(cè)1.20±0.0646.93±6.1672.46±14.6174.29±5.7451.61±9.9428.77±8.8020.65±12.6711.78±9.012)21.0924400.001618左側(cè)2.89±0.0529.72±4.3930.05±5.8938.64±3.5332.64±6.238.68±3.494.73±4.255.04±2.392)13.3773210.003281生理鹽水組左側(cè)1.32±0.10-1.62±5.622.81±6.02-7.86±4.71-0.61±10.283.37±7.16-0.84±6.872.60±4.33右側(cè)2.76±0.08-1.88±1.680.14±2.291.54±2.62-1.64±3.611.72±2.333.61±2.411.57±2.55壓板測試花椒水煮液組左側(cè)91.28±28.9830.48±3.7244.74±3.8950.56±2.4936.70±3.0929.81±4.6418.47±2.1011.49±2.813)25.2227770.000298右側(cè)138.41±2.329.27±1.4712.95±2.9419.91±2.2013.78±2.7412.63±3.827.83±1.903.00±1.643)19.7071030.000807生理鹽水組左側(cè)87.76±27.830.06±4.92-1.63±3.39-2.98±4.13-4.17±3.130.71±7.855.29±5.434.46±4.80右側(cè)133.56±1.33-2.84±2.441.21±1.33-1.35±2.07-2.91±1.700.82±2.062.59±1.68-0.05±2.2740mg/ml熱板測試花椒水煮液組左側(cè)1.32±0.0753.64±7.3984.28±16.6582.69±13.1565.42±8.0345.02±5.7927.70±6.2920.85±7.593)26.4068270.000245右側(cè)2.87±0.0537.75±5.6554.33±6.0761.14±5.6550.59±5.8224.04±7.7017.42±5.9714.27±5.563)19.9099180.000776生理鹽水組左側(cè)1.32±0.10-1.62±5.622.81±6.02-7.86±4.71-0.61±10.283.37±7.16-0.84±6.872.60±4.33右側(cè)2.76±0.08-1.88±1.680.14±2.291.54±2.62-1.64±3.611.72±2.333.61±2.411.57±2.55壓板測試花椒水煮液組左側(cè)91.91±28.9139.43±5.6048.67±7.2654.15±6.5346.85±7.4737.26±7.0816.05±6.7812.87±5.213)32.1326370.000104右側(cè)138.92±1.8023.83±3.2227.54±3.3731.36±4.1226.45±4.4420.64±2.767.64±3.451.03±2.753)24.6622640.000327生理鹽水組左側(cè)87.76±27.830.06±4.92-1.63±3.39-2.98±4.13-4.17±3.130.71±7.855.29±5.434.46±4.80右側(cè)133.56±1.33-2.84±2.441.21±1.33-1.35±2.07-2.91±1.700.82±2.062.59±1.68-0.05±2.27

與生理鹽水相比:1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001

3 討 論

炎癥所致的疼痛是一種復(fù)雜的生理活動，慢性痛是臨床上最常見的癥狀之一，是一種信號，可促使生物體采取應(yīng)激行為〔6〕。而某些長期的劇烈疼痛，對機(jī)體已成為一種難以忍受的折磨。傳統(tǒng)鎮(zhèn)痛藥雖然鎮(zhèn)痛效果顯著，但嚴(yán)重的毒副作用和成癮性限制了其使用〔7〕。梁輝等〔8〕研究表明，花椒的化學(xué)成分很復(fù)雜，主要包括揮發(fā)油、生物堿、酰胺、黃酮、烴類和脂肪酸類等，藥理作用的研究主要集中在揮發(fā)油、生物堿等物質(zhì)上〔9〕?；ń返逆?zhèn)痛作用與生物堿有關(guān)〔10〕，汪倪萍等〔11〕發(fā)現(xiàn)生物堿能明顯抑制鹿角菜膠所致的足腫脹，減少炎癥滲出物中的前列腺素E(PGE)含量〔12〕。趙秀玲〔13〕研究發(fā)現(xiàn)花椒中所含的茵芋堿是鎮(zhèn)痛的有效成分?；ń匪嵋耗軐菇遣嫒R膠引起的大鼠足趾腫脹〔14〕。臨床上有學(xué)者用花椒揮發(fā)油等代替丁香油對齲齒進(jìn)行消炎止痛〔15〕。綜上，花椒水煮液生物堿等成分確實(shí)對炎癥大鼠有鎮(zhèn)痛作用，但其他成分是否參與鎮(zhèn)痛作用有待研究。

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〔2015-13-19修回〕

(編輯 苑云杰)

劉宏超(1981-)，男，講師，碩士，主要從事運(yùn)動人體科學(xué)研究。

R436

A

1005-9202(2016)23-5829-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.024