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        ELISA聯(lián)合NAT技術(shù)對血液篩查的應(yīng)用價(jià)值和輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)的對比分析

        2016-12-22 01:00:25林玉蓓魯思文項(xiàng)漢城詹曉燕
        貴州醫(yī)藥 2016年11期
        關(guān)鍵詞:窗口期獻(xiàn)血者陽性率

        林玉蓓 魯思文△ 項(xiàng)漢城 詹曉燕

        (1.江蘇省中醫(yī)院輸血科,江蘇 南京 210029;2.江蘇省血液中心供血科,江蘇 南京 210000)

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        ELISA聯(lián)合NAT技術(shù)對血液篩查的應(yīng)用價(jià)值和輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)的對比分析

        林玉蓓1魯思文1△項(xiàng)漢城2詹曉燕1

        (1.江蘇省中醫(yī)院輸血科,江蘇 南京 210029;2.江蘇省血液中心供血科,江蘇 南京 210000)

        目的 探討ELISA聯(lián)合NAT技術(shù)對血液篩查的應(yīng)用價(jià)值并對其輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行對比分析。方法 選擇無償獻(xiàn)血者標(biāo)本共計(jì)58 810人份為研究對象,采用兩種不同廠家生產(chǎn)的ELISA試劑盒進(jìn)行乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、丙肝抗體(抗-HCV)及艾滋病抗體(抗-HIV)的檢測,并采用核酸擴(kuò)增技術(shù)(NAT)進(jìn)行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的檢測,對ELISA陰性、NAT陽性的標(biāo)本進(jìn)行追蹤分析。結(jié)果 58 810人份血清中ELISA檢測結(jié)果為陽性有607例,陽性率1.03%,其中HBsAg陽性率0.52%(305/58 810),抗-HCV陽性率0.32%(188/58 810),抗-HIV陽性率0.19%(114/58810);NAT檢測結(jié)果為陽性有260例,陽性率0.44%,其中HBV DNA陽性率0.22%(128/58 810),HCV RNA陽性率為0.14%(80/58 810),HIV RNA陽性率0.09%(52/58 810)。對14例ELISA陰性、NAT陽性標(biāo)的獻(xiàn)血者進(jìn)行定期采血隨訪分析,其中8例證實(shí)為窗口期HBV感染,6例證實(shí)為隱匿性乙型肝炎。結(jié)論 ELISA檢測對HBV感染存在一定的漏檢率,在血液篩查中,取消一遍ELISA 檢測,增加一遍NAT檢測,可有效降低輸血感染殘余風(fēng)險(xiǎn),提高輸血安全。

        酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn); 核酸擴(kuò)增技術(shù); 血液篩查; 殘余風(fēng)險(xiǎn)

        輸血傳染病的預(yù)防和控制是血液安全最重要的關(guān)注點(diǎn)之一。本文旨在分析ELISA聯(lián)合NAT技術(shù)對血液篩查的應(yīng)用價(jià)值并通過對ELISA陰性、NAT陽性標(biāo)本的追蹤分析,探討NAT檢測技術(shù)對降低輸血傳播疾病殘余風(fēng)險(xiǎn)的可行性。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選擇2011年1月至2013年1月來自江蘇省血站無償獻(xiàn)血者標(biāo)本共計(jì)58 810人份。其中男32 453人份(55.2%),女26 357人份(44.8%),年齡18~55歲,平均年齡(28.3±18.9)歲,所有獻(xiàn)血者均符合國家標(biāo)準(zhǔn)GB 18467-2001《獻(xiàn)血者健康檢查要求》后方可獻(xiàn)血。每位獻(xiàn)血者均平行采集兩管血液,離心后一管采用ELISA法進(jìn)行檢測,另一管采用NAT法進(jìn)行檢測。

        1.2 檢測方法 按照標(biāo)準(zhǔn)要求,采用ELISA法進(jìn)行乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、丙肝抗體(抗-HCV)及艾滋病抗體(抗-HIV)的檢測。采用不同試劑廠家檢測2遍,HBsAg試劑盒購自上??迫A生物工程股份有限公司、廈門英科新創(chuàng)科技有限公司,抗-HCV試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、珠海麗珠生物試劑有限公司,抗-HIV試劑盒購自荷蘭生物梅立埃、北京萬泰生物藥業(yè)有限公司。采用NAT技術(shù)進(jìn)行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的檢測,檢測試劑購自美國諾華診斷公司,為三聯(lián)熒光病毒TMA 核酸檢測試劑盒,可同時(shí)檢測 HBV、HCV、HIV三種病毒。主要檢測儀器:STAR全自動(dòng)進(jìn)樣儀、FAME2420 全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀、熒光PCR儀、核酸提取儀等。

        1.3 對ELISA陰性、NAT陽性標(biāo)本的隨訪分析 對于ELISA陰性、NAT陽性的患者,通過省血站及時(shí)與獻(xiàn)血者取得聯(lián)系,重新采集血樣進(jìn)行乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗體(抗-HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗體(抗-HBe)、乙肝核心抗體(抗-HBc)、抗-HCV及抗-HIV的檢測,于第0,7,14,21,28天進(jìn)行采樣追蹤分析,監(jiān)測感染的狀態(tài)及血清學(xué)的轉(zhuǎn)換。

        2 結(jié) 果

        2.1 ELISA檢測結(jié)果 陽性607例(1.03%),其中有12份標(biāo)本HBsAg與抗-HCV同時(shí)陽性,其中HBsAg陽性率0.52%(305/58 810),抗-HCV陽性率0.32%(188/58 810),抗-HIV陽性率0.19%(114/58 810)。

        2.2 NAT檢測結(jié)果 陽性260例(0.44%),其中有8份標(biāo)本HBV DNA與HCV RNA同時(shí)陽性,其中HBV DNA陽性率0.22%(128/58 810),HCV RNA陽性率0.14%(80/58 810),HIV RNA陽性率0.09%(52/58 810)。

        2.3 ELISA與NAT檢測結(jié)果對比 607例ELISA檢測為陽性的標(biāo)本中,有361例經(jīng)NAT檢測為陰性,其中HBV DNA陰性者180例,占49.9%,HCV RNA陰性者110例,占30.5%,HIV RNA陰性者71例,占19.7%。58 203例ELISA檢測為陰性的標(biāo)本中,有14例經(jīng)NAT檢測為陽性,均為HBV DNA陽性。見表1。

        表1 ELISA與NAT檢測結(jié)果對比

        2.4 對ELISA陰性、NAT陽性標(biāo)本的隨訪分析 對14例ELISA陰性、NAT陽性標(biāo)的獻(xiàn)血者由省血站進(jìn)行定期采血追蹤分析,14例獻(xiàn)血者均為HBV DNA陽性,第0天,乙肝五項(xiàng)陰性、HBV DNA陽性的有8例,經(jīng)第0,7,14,21,28天的追蹤分析,均表現(xiàn)為HBsAg陽性,其中大三陽者5例,小三陽3例,追蹤期間ALT升高明顯,HBV DNA陽性,病毒載量持續(xù)增高,證實(shí)為窗口期HBV感染;另有6例雖HBsAg陰性,但HBcAb持續(xù)陽性,證實(shí)為隱匿性乙型肝炎。

        3 討 論

        2012年初,國家衛(wèi)生部頒布新的《血站技術(shù)操作規(guī)程》,對血液篩查的檢測方法有了新的要求,即允許采供血機(jī)構(gòu)采用 ELISA檢測技術(shù)和NAT檢測技術(shù)對血液進(jìn)行安全檢測,NAT技術(shù)在我國逐步推廣,對降低輸血風(fēng)險(xiǎn)有重要意義。作為臨床用血單位,面臨患者用血安全問題,更應(yīng)支持兩種方法的“雙保險(xiǎn)”檢測。

        本研究發(fā)現(xiàn),樣本無償獻(xiàn)血者中,ELISA檢測陽性率1.03%,其中HBsAg陽性率0.52%,抗-HCV陽性率0.32%,抗-HIV陽性率0.19%。NAT檢測陽性率0.44%,其中HBV DNA陽性率0.22%,HCV RNA陽性率0.14%,HIV RNA陽性率0.09%。說明研究樣本獻(xiàn)血者中不合格的指標(biāo)主要是乙型肝炎病毒。本研究發(fā)現(xiàn),607例ELISA檢測為陽性的標(biāo)本中,有361例經(jīng)NAT檢測為陰性,其中HBV DNA陰性者180例,占49.9%,HCV RNA陰性者110例,占30.5%,HIV RNA陰性者71例,占19.7%。58 203例ELISA檢測為陰性的標(biāo)本中,有14例經(jīng)NAT檢測為陽性,均為HBV DNA陽性,說明ELISA檢測有漏檢標(biāo)本,存在一定的輸血傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)。

        ELISA與NAT 檢測技術(shù)在血液篩查中存在互補(bǔ)作用,主要體現(xiàn)在以下兩個(gè)方面:(1)NAT可降低窗口期對用血安全的影響。ELISA是以血液中抗體、抗原為檢測對象的,而病毒從進(jìn)入人體到產(chǎn)生足夠數(shù)量的抗體時(shí)往往需要較長的時(shí)間,此為窗口期。有研究發(fā)現(xiàn),70%的HCV及 90%的HBV及HIV及漏檢是由于窗口期引起的[1],而NAT是以血液中病原體的核酸為檢測對象的,大大縮短了窗口期,而且在感染早期,保護(hù)性抗體尚未產(chǎn)生,病毒載量很高,傳染性很強(qiáng),因此NAT可降低窗口期對用血安全的影響[2]。(2)ELISA可彌補(bǔ)NAT的漏檢情況。雖然抗體在機(jī)體出現(xiàn)的時(shí)間較晚,但持續(xù)時(shí)間較長,而病毒在外周血中的存在有間歇性現(xiàn)象, ELISA可彌補(bǔ)NAT的漏檢情況,因此NAT也不能完全替代ELISA在血液篩查中的作用,兩者結(jié)合更能提高臨床用血的安全性[3-4]。

        [1] 曾勁峰,鄭欣,許曉絢. ELISA 檢測與 NAT 在血液篩查應(yīng)用中的互補(bǔ)性研究[J].中國輸血雜志,2012,25(10):1012-1015.

        [2] 吳敬林,周仲民. 核酸檢測降低輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)研究現(xiàn)狀[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,35(8):1198-1199.

        [3] 莫丕立,吳軍軍,馬聯(lián).核酸檢測技術(shù)在采供血機(jī)構(gòu)中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2011,24(9) : 821-823.

        [4] 王芳,欒燕,劉顯智.核酸檢測技術(shù)(NAT)在獻(xiàn)血者人類免疫缺陷病毒篩查中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2010,23(10):892-894.

        R446.1

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        1000-744X(2016)11-1212-03

        2016-06-11)

        △通信作者,E-mail:lusiwen_1969@126.com,13776668755

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