王紅建 封偉

(衡水市第二人民醫(yī)院檢驗科，河北 衡水 053000)

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EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病診斷中的應(yīng)用價值

王紅建 封偉

(衡水市第二人民醫(yī)院檢驗科，河北 衡水 053000)

目的 研究EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病診斷中的應(yīng)用價值。方法 選取80例EBV感染患兒作為觀察組，100例健康兒童作為對照組，所有兒童均檢測EBV-IgM及DNA。比較兩組兒童上述指標的陽性率，并分析EBV-IgM及DNA檢測在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病中的診斷價值。結(jié)果 觀察組EBV-IgM陽性率31.25%，EBV-DNA陽性率36.25%；對照組EBV-IgM陽性率11.00%，EBV-DNA陽性率15.00%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。EBV-IgM靈敏度31.25%，特異度89.00%，約登指數(shù)0.1925；EBV-DNA靈敏度36.25%，特異度85.00%，約登指數(shù)0.2125。結(jié)論 EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EBV感染相關(guān)疾病診斷中具有應(yīng)用價值。

EBV感染； 兒童； EB病毒IgM； EB病毒DNA

EB病毒(EBV)屬于皰疹病毒科，是小兒常見的感染病毒，90%以上的3～5歲兒童曾感染過EBV[1]。該病毒首先在口咽部上皮細胞內(nèi)增殖，繼而進入呼吸道引起呼吸道感染，并可長期潛伏在組織中并在機體免疫力降低時引起復(fù)發(fā)感染，感染可累及多系統(tǒng)及器官，患兒臨床表現(xiàn)復(fù)雜，容易造成誤診或漏診，給臨床治療工作帶來困難[2]。目前，臨床上多采用EBV抗體定性測定和EBV-DNA定量測定檢測EBV感染，本次研究旨在分析EB病毒IgM及EBV-DNA檢測在兒童EB病毒感染相關(guān)疾病中的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年12月至2015年10月期間我院收治的80例患兒作為觀察組，其中男43例，女37例，年齡6個月至14歲，平均(4.1±2.9)歲。80例患兒中，上呼吸道感染者29例，傳染性單核細胞增多癥21例，支氣管炎及肺炎17例，病毒性心肌炎13例。所有患兒均符合以下標準：(1)患兒均因不明原因發(fā)熱、咽炎、皮疹、心律失常、肝脾腫大等疑似EB病毒感染的臨床表現(xiàn)；(2)排除其他病原體感染的患兒，如肝炎病毒、人巨細胞病毒、肺炎支原體或肺炎衣原體的感染；(3)所有患兒監(jiān)護人均自愿參與本次研究，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)原則。選取同一時期來我院進行疫苗接種的健康兒100例作為對照組，其中男58例，女42例，年齡6個月至13歲，平均(3.8±3.0)歲。兩組的性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 標本采集 所有患兒在未用藥之前于清晨于清晨經(jīng)抽取空腹血5 mL，置于抗凝管中，標記后保存于-80 ℃冰箱中，批量送檢。

1.3 觀察指標及檢測方法 (1)EB病毒(EBV)的IgM檢查采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，試劑盒由上?；脤崢I(yè)有限公司提供，操作嚴格按照說明書進行。樣本的吸光度值：標準品的吸光度值≥1.1為陽性。(2)EBV-DNA檢查采用熒光定量PCR，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，ABI Prism7300熒光定量PCR儀購自上海迪普生物技術(shù)有限公司。將咽拭子或全血標本按照說明書進行處理和DNA提取并加入26 μL的DNA檢測體系中，將反應(yīng)管放入樣品槽中進行擴增及檢測：循環(huán)包括50 ℃預(yù)反應(yīng)2 min，94 ℃預(yù)變性5 min，每個循環(huán)包括94 ℃ 10 s，60 ℃ 40 s，共進行50個循環(huán)。標本熒光強度曲線達到閾值時所需循環(huán)數(shù)(Ct值)≤39為陽性。比較EBV-IgM及EBV-DNA檢測在不同疾病患兒中的檢出結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 不同疾病EBV-IgM及DNA的檢測值 不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA的檢測值的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1

表1 不同疾病EBV-IgM及DNA的檢測值

注：與對照組相比，*P<0.05。

2.2 不同疾病EBV-IgM及DNA的陽性率 不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA陽性率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。患兒的EBV-IgM及DNA檢出率均明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同疾病EBV-IgM及DNA的陽性率[n(%)]

注：與對照組相比，*P<0.05。

2.3 EBV-IgM及DNA的診斷價值 EBV-IgM診斷EB感染的靈敏度為32.25%，特異度為89.00%，約登指數(shù)0.192 5。EBV-DNA診斷EB病毒感染的靈敏度為36.25%，特異度為85.00，約登指數(shù)為0.212 5。

3 討 論

EBV病毒通過空氣-飛沫途徑在人群中傳播，感染者以兒童多見，患者癥狀較為多樣，預(yù)后多良好，但免疫力低下者可出現(xiàn)嚴重并發(fā)癥[3]。

目前，臨床上最常用的EBV檢測方法是血清學(xué)抗體檢測，具有簡便、快捷的優(yōu)點，其中EBV-IgM是EB病毒感染的患兒在感染后早期即可表現(xiàn)為陽性，一般持續(xù)4～8周，是急性感染的可靠指標[4]。熒光定量PCR檢測EBV-DNA是近些年來發(fā)展的技術(shù)，可以定量反應(yīng)體內(nèi)的EBV-DNA水平，并準確反應(yīng)EB病毒感染和病毒的復(fù)制情況。EBV-DNA的載量與器官損害程度及疾病種類、疾病的嚴重程度及病死率呈正相關(guān)，臨床上可以根據(jù)EB-DNA拷貝數(shù)大小來判斷病情嚴重程度，從而進行更好的用藥量的控制，達到理想的治療效果；且其擴增及產(chǎn)物檢測一步完成，整個檢測過程處于全密封環(huán)境中，避免產(chǎn)物污染等因素造成的檢測偏差[5-6]。

本次研究分別采取ELISA和熒光定量PCR的方法檢測患兒的EBV-IgM及EBV-DNA水平，結(jié)果表明，EBV-IgM表達量及EBV-DNA的Ct值在上呼吸道感染、傳染性單核細胞增多癥、支氣管肺炎及病毒性心肌炎的患兒間存在顯著差異；患兒上述指標的陽性率明顯高于對照組，不同疾病患兒的EBV-IgM及EBV-DNA陽性率無顯著差異，其中上呼吸道感染及支氣管炎肺炎患兒上述指標的陽性率高于傳染性單核細胞增多癥，而病毒性心肌炎患兒EBV-IgM及EBV-DNA陽性率較低。針對不同疾病的患兒，EBV-IgM及EBV-DNA檢測的陽性率無明顯差異，二者靈敏度相近，EBV-DNA檢測略優(yōu)于EBV-IgM檢測，但EBV-IgM特異度高于EBV-DNA。

對上述指標的診斷價值進行分析： IgM是EBV急性感染的早期指標，但持續(xù)時間較短，導(dǎo)致患兒窗口期出現(xiàn)和診斷結(jié)果假陰性，且小兒免疫系統(tǒng)尚未完善，病毒不能刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)的能夠達到檢測下限的病毒抗體[7]。不同疾病EBV-DNA的陽性率均明顯高于IgM，其原因可能是部分EBV為條件感染，不能引起足夠強度的免疫反應(yīng)，而DNA檢測可以檢出這部分感染的患兒[8]。

本次研究結(jié)果提示EB病毒IgM及DNA檢測在兒童EBV感染相關(guān)疾病診斷中具有應(yīng)用價值，早期進行上述指標檢測可以減少小兒EBV相關(guān)疾病的漏診、誤診，尤其是EBV-DNA在部分疾病的診斷中更為敏感。

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[2] 段巧艷.EB病毒感染臨床應(yīng)用研究進展[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(10):1232-1233.

[3] 陳佳紅,萬言珍.480例住院患兒EB病毒相關(guān)抗體檢測及結(jié)果分析[J].中國婦幼保健,2015,30(14):2214-2215.

[4] 劉春梅,田文君,張玥,等.EBV DNA檢測在小兒EBV感染相關(guān)疾病診斷中的意義[C].第一次全國中西醫(yī)結(jié)合檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集，2014:401-404.

[5] 孫志惠,劉鵬.EB 病毒血清學(xué)及 DNA 聯(lián)合檢測在嬰幼兒傳染性單核細胞增多癥臨床應(yīng)用研究[J].中國實驗診斷學(xué),2015,19(10):1696-1698.

[6] 朱嬋虹,鄭錦利,劉先鴻,等.335例外周血EB病毒DNA檢測的結(jié)果分析及臨床意義[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2015,33(6):749-750.

[7] 陳剛,張薇,胡冬,等.EB病毒衣殼抗原抗體IgM陽性兒童的免疫功能評估研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2015,36(15):2152-2153,2155.

[8] 柳文菊,杜昆,劉學(xué)政,等.兒童呼吸道EB病毒感染IgM抗體與病毒DNA的相關(guān)性分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(3):283-284.

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