康紅梅，李花花，顧春華，慕婷婷，蘇 萇

1甘肅省科學(xué)院生物研究所，甘肅 蘭州；2甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)中心；3甘肅中醫(yī)藥大學(xué)

甘肅不同產(chǎn)地冬蟲夏草品質(zhì)特征研究*

康紅梅1，李花花1，顧春華2，慕婷婷3，蘇 萇1

1甘肅省科學(xué)院生物研究所，甘肅 蘭州；2甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)中心；3甘肅中醫(yī)藥大學(xué)

目的：了解甘肅產(chǎn)冬蟲夏草的品質(zhì)特征。方法：以甘肅（天祝、積石山、瑪曲、尕海和夏河）和青海（同仁）產(chǎn)冬蟲夏草為研究對(duì)象，采用高效液相色譜儀(H PLC)和比色法測(cè)定其主要有效成分含量。結(jié)果：甘肅產(chǎn)冬蟲夏草個(gè)體較小[（0.1044±0.005）～（0.1904±0.009）g/株]。各產(chǎn)地冬蟲夏草腺苷和甘露醇含量差異不明顯，分別為（0.320±0.088)～(0.613±0.076)m g/g和(1.66±0.09)～(2.23±0.07)m g/g；嘌呤含量差異顯著，積石山和瑪曲的含量較高；蟲草多糖含量最高的是天祝和積石山的樣品，同仁最低；麥角甾醇含量以同仁產(chǎn)的最高，但與天祝和夏河產(chǎn)冬蟲夏草的差異不明顯。結(jié)論：甘肅各產(chǎn)地冬蟲夏草個(gè)體較小，主要有效成分含量與青海產(chǎn)蟲草差異不大，具有較高的品質(zhì)。

冬蟲夏草；有效成分；品質(zhì)；高效液相色譜分析;甘肅

冬蟲夏草［Cordyceps sinensis(Berk)sacc］是國家二級(jí)保護(hù)的名貴藥材，主要分布在青海、云南、四川、西藏和甘肅等省區(qū)。甘肅蟲草主要分布于碌曲、李恰如、尕海加倉、瑪曲大水、尼瑪、歐拉秀瑪、阿萬倉大山，這些地區(qū)是甘南以至甘肅冬蟲夏草的主產(chǎn)地，有人認(rèn)為所產(chǎn)品種是蟲草新種［1］，但也有證據(jù)證明甘肅蟲草與冬蟲夏草是同種異名［2］。近年來研究者用不同的方法對(duì)冬蟲夏草及菌絲體的有效成分進(jìn)行了廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)其成分包括蟲草多糖、蛋白和氨基酸、D-甘露醇、脂肪和脂肪酸、蟲草素和生物堿、抗菌活性物質(zhì)、微量元素、免疫抑制劑等。冬蟲夏草有效成分含量因產(chǎn)地、居群以及子座、蟲體部分不同而存在顯著差異。目前對(duì)蟲草質(zhì)量的評(píng)估尚未形成統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)［3］。如何選取一種（或幾種）特征性的生物活性物質(zhì)做為質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)顯得十分重要。甘肅蟲草做為我國蟲草資源的重要組成部分，若其品質(zhì)特征不清，不僅會(huì)影響甘肅蟲草保護(hù)和科學(xué)開發(fā)利用政策的制定，而且會(huì)影響甘肅蟲草的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，嚴(yán)重制約蟲草產(chǎn)業(yè)在甘肅的發(fā)展。本研究擬選取甘肅不同產(chǎn)區(qū)的冬蟲夏草為材料，通過分析主要有效成分的差異來了解甘肅蟲草的品質(zhì)特征，為進(jìn)一步提出蟲草品質(zhì)評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 從甘肅天祝、積石山、尕海、夏河、瑪曲以及青海同仁采集或購買當(dāng)天采挖的新鮮蟲草樣品用硅膠快速干燥，運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室低溫烘干，稱重，粉碎后低溫保存。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品 腺苷(批號(hào)：110879)、蟲草素(批號(hào)：110858)、腺嘌呤(批號(hào)：110886)、麥角甾醇(批號(hào):111845)均購自北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司。N6-(2-羥乙基)腺苷(批號(hào)：11111123)購自上海同田生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 蟲草大小 選取各產(chǎn)區(qū)樣品15～30根，分析天平精確稱重。

1.2.2 核苷類 腺嘌呤、腺苷、蟲草素、N6-(2-羥乙基)腺苷，采用HPLC法測(cè)定(Waters 2695高效液相色譜儀，美國Waters公司提供)。準(zhǔn)確稱取0.06 g混合蟲草粉末，加入3 mL蒸餾水，用超聲波震蕩提取25分鐘(300 W，59 kHz)，10 000 r/min離心5分鐘，取上清用0.22 μm濾膜抽濾(美國Sigma公司)，得供試樣品。

色譜條件：色譜柱為Krommasil 100-5C18柱，流動(dòng)相為［0.01 mol/L KH2PO4∶甲醇(90∶10)］，進(jìn)樣體積10 μL，柱溫45℃，運(yùn)行時(shí)間25分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm。腺嘌呤、腺苷、N6-(2-羥乙基)腺苷。見圖1。

圖1 100 μg/m L腺嘌呤、腺苷、蟲草素、N 6-(2-羥乙基)腺苷四種混標(biāo)

1.2.3 蟲草酸 (D-甘露醇) 樣品制備方法同“1.2.2”項(xiàng)，采用高碘酸鈉比色法測(cè)定D-甘露醇含量［4］。

1.2.4 蟲草多糖 采用3，5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定蟲草多糖的含量［5］。

1.2.5 麥角甾醇 采用高效液相色譜漢(HPLC)測(cè)定(Waters2695高效液相色譜，美國Waters公司提供)，取0.1g粉末狀樣品，加入10倍體積的甲醇，并于冰浴中超聲振蕩10分鐘；以10 000 r/min離心5分鐘，收集上清液；其沉淀物再加入10倍體積的甲醇重復(fù)提取及離心，合并上述上清液；以0.22 μm濾膜 (美國Sigma公司提供)過濾；取20 μL濾液進(jìn)行HPLC分析［6］。色譜條件：色譜柱Krommasil 100-5C18柱，流動(dòng)相為100%甲醇，進(jìn)樣體積為20 μL，柱溫30℃，運(yùn)行時(shí)間20分鐘，檢測(cè)波長(zhǎng)為282 nm麥角甾醇含量。見圖2。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)品：0.2 m g/m L麥角甾醇

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 每個(gè)實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，利用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所測(cè)的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。計(jì)量資料用(±s)表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 蟲草大小 各產(chǎn)地冬蟲夏草大小如表1所示，青海產(chǎn)蟲草個(gè)體最大，達(dá)(0.211 2±0.024)g/株，顯著高于甘肅各地的蟲草。天祝蟲草個(gè)體最小(0.104 4±0.005)g/株，重量約為青海蟲草的一半，其余各地蟲草個(gè)體大小差異不明顯(0.157 6± 0.006)～(0.1904±0.009)g/株。見表1。

2.2 核苷類物質(zhì) 共檢測(cè)了4種核苷類物質(zhì)［腺嘌呤、腺苷、蟲草素、N6-(2-羥乙基)腺苷］。在所有供試樣品均未檢出蟲草素(3′-脫氧腺苷)。N6-(2-羥乙基)腺苷也僅在積石山和瑪曲的樣品中檢出(分別為7.116 μg/g，8.465 μg/g1次，重復(fù)后沒有檢出。各產(chǎn)區(qū)蟲草腺苷含量如圖3-A所示。甘肅尕海的蟲草腺苷含量最高（0.613±0.076)mg/g，其次為青海同仁蟲草（0.52±0.112)mg/g，積石山和夏河的蟲草腺苷含量最低，但甘肅蟲草與同仁蟲草的腺苷含量差異不明顯。各產(chǎn)區(qū)蟲草嘌呤的含量如圖3-B所示?，斍头e石山蟲草樣品的嘌呤含量顯著高于其他蟲草(42.466±15.276)μg/g和(32.048±4.658)μg/g，天祝蟲草嘌呤含量最低（8.222±0.962)μg/g，夏河與尕海蟲草嘌呤含量與同仁的相近，含量居中。

表1 樣品的來源和個(gè)體大小

圖3 甘肅各產(chǎn)地冬蟲夏草主要有效成分含量

2.3 其他有效成分 甘肅各產(chǎn)地蟲草的甘露醇含量為(1.66±0.09)～(2.23±0.07)mg/g，與青海同仁的含量相似，差異不明顯，如圖3-C所示。各產(chǎn)區(qū)蟲草多糖含量如圖3-D所示。積石山和天祝蟲草中蟲草多糖含量最高(156.7±6.4)和(156.1± 6.5)mg/g，同仁的最低(97.2±4.3)mg/g，尕海、夏河和瑪曲的蟲草多糖含量居中。各產(chǎn)區(qū)蟲草麥角甾醇含量如圖3-E所示。同仁蟲草麥角甾醇含量最高(50.247±2.25)μg/g，但與夏河、天祝的蟲草差異不明顯；甘肅其他地方蟲草麥角甾醇含量差異不大，在(30.661±2.536)～(36.756±4.84)μg/g之間。

3 討論

冬蟲夏草是我國傳統(tǒng)的滋補(bǔ)強(qiáng)壯藥，含有蟲草多糖類、核苷類、糖醇、甾醇類、氨基酸、肽類、維生素類、無機(jī)元素、多胺類及甘露醇等多種活性成分［7-8］。《中國藥典》［9］(2010年版)對(duì)冬蟲夏草的質(zhì)量控制也僅有性狀描述和腺苷的含量測(cè)定2項(xiàng)指標(biāo)，但腺苷既不是特異性指標(biāo)成分，也不是主要有效成分，不能科學(xué)評(píng)價(jià)蟲草質(zhì)量。蟲草素(Cordycepin)，又名蟲草菌素、蛹蟲草菌素、3′-脫氧腺苷，是1950年Cunningham等人于蛹蟲草中分離出的一種抗菌物質(zhì)。蟲草素是第一個(gè)從真菌中分離出來的核苷類抗菌素，具有抑菌、抗腫瘤、抗炎等非常廣譜的生物學(xué)活性，對(duì)多種疾病都有潛在的治療作用。Holliday曾提出N6-（2-羥乙基）腺苷是一種具活性的物質(zhì)，連同腺苷和脫氧核苷統(tǒng)稱為羥乙基腺嘌呤核苷類物質(zhì)(Hydroxyethyl adenosineanalogs，HEAA)，可用作蟲草不同菌株和生產(chǎn)方法的定性和定量質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)［10］。近年來自然界中冬蟲夏草是否含有蟲草素一直存在爭(zhēng)議［11］。有部分研究表明冬蟲夏草中含有及少量蟲草素［12-13］，但在本研究中，所有樣品均未檢出3′-脫氧腺苷和 N6-(2-羥乙基)腺苷，說明以HEAA含量作為蟲草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之一還需進(jìn)一步的研究來確定。

目前對(duì)于蟲草質(zhì)量沒有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。市場(chǎng)上多以蟲體大小為冬蟲夏草分等級(jí)，個(gè)體越大等級(jí)越高，價(jià)格越高。甘肅各產(chǎn)地的蟲草個(gè)體明顯小于青海產(chǎn)蟲草，但從所檢測(cè)的有效成分含量來看，并不比同仁蟲草低，有些指標(biāo)甚至更高?？傮w來看，甘肅蟲草腺苷和甘露醇的含量與青海蟲草相似，差異不明顯；嘌呤和蟲草多糖含量較高；麥角甾醇含量較低，但夏河與天祝蟲草含量較高。因此，用蟲體大小評(píng)價(jià)蟲草品質(zhì)是不科學(xué)的。甘肅蟲草與青海同仁蟲草品質(zhì)差異不大。甘肅蟲草具有較高的藥用價(jià)值。

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Study of Quality Characteristics of DongChong XiaCao from Different Origins in Gansu Province

KANG Hongmei1,LI Huahua1,GU Chunhua2,MU Tingting3,SU Chang1
1 Gansu Provincial Academy of Sciences Institute of Biology,Lanzhou 730000,China;
2 Gansu Province Product Quality Supervision and Inspection Center;
3 Gansu University of Chinese Medicine

Objective:To study the quality characteristics of DongChong XiaCao[Cordyceps sinensis(berk)sacc] from different origins in Gansu province.Methods:Based on DongChong XiaCao from Gansu province(Tianzhu, Jishishan,Maqu,Gahai and Xiahe)and Qinghai province (Tongren),HPLC and colorimetry methods were used to determine the active components content of main.Results:DongChong XiaCao from Gansu province are smaller [(0.1044±0.005)～(0.1904±0.009)g/plant].There are no significant content differences of adenosine and mannitol in DongChong XiaCao from different origins,and the contents respectively are(0.320±0.088)～(0.613±0.076)mg/g and (1.66±0.09)～(2.23±0.07)mg/g;the differences of the purine content are significant,and the content is higher in Jishishan and Maqu;the highest content of polysaccharides in DongChong XiaCao are the samples from Tianzhu and Jishishan,and the lowest content is from Tongren;the highest content of ergosterin is the sample from Tongren,but there are no significant differences from the samples from Tianzhu and Xiahe.Conclusion:The different DongChong XiaCao from Gansu province are smaller,there are no big differences of the main content of active components from DongChong XiaCao whose origin is Qinghai province,and they are of high qualities.

DongChong XiaCao;active components;quality;HPLC;Gansu

R282.6

A

1004-6852(2016)08-0011-04

2015-12-04

甘肅省自然科學(xué)基金計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)1107RJZA 113)。

康紅梅(1973—)，女，博士學(xué)位，副研究員。研究方向：區(qū)域特色資源開發(fā)和利用。