胡冰野，保丹東

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省生化工程中心，貴州 貴陽(yáng) 550025）

獸用止痢散抗炎效果分析

胡冰野1，保丹東2

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省生化工程中心，貴州 貴陽(yáng) 550025）

為了研究止痢散抗炎的藥理學(xué)作用，為最終的臨床研究提供指導(dǎo)和借鑒意義。采用冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加、二甲苯致小鼠耳廓腫脹、等方法研究止痢散的抗炎作用。二甲苯致小鼠耳廓腫脹結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比：陽(yáng)性組耳廓腫脹度極顯著降低（P＜0.01），抑制率極顯著增高（P＜0.01）；止痢散中、高劑量組耳廓腫脹度顯著降低（P＜0.05），抑制率顯著增高（P＜0.05）；其他各藥物有一定抑制耳廓腫脹的作用，但不明顯。冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加結(jié)果顯示：陽(yáng)性組抑制率最高為46.45%；止痢散中、高劑量組抑制率分別為6.45%、16.13%，表明止痢散中、高劑量組對(duì)毛細(xì)血管通透性有一定的抑制性，但作用不明顯。結(jié)論顯示：止痢散具有抗炎作用，抗炎作用明顯。

獸用止痢散；消炎；抑制率

多葉勾兒茶，是一種勾兒茶屬綱鼠李目雙子葉植物，多葉勾兒茶全身可供藥用，勾兒茶主要含有多種活性化學(xué)物質(zhì)，有治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性慢性氣管炎、止咳化痰等功效，具有一定的抗炎作用。地榆，地榆屬薔薇目雙子葉植物綱，微寒性，苦味酸澀，中醫(yī)理論上歸肝大腸經(jīng)，主要含有皂苷，鞣質(zhì)，黃酮類物質(zhì)，功能涼血止血解毒斂瘡。地偷抗炎作用的有效成分為3，3'，4-三-O-甲基并沒(méi)食子酸，其抗炎作用明顯［1］。烏藥，山胡椒屬毛茛目山雙子葉植物綱，為常用傳統(tǒng)中藥，是重要的溫胃理氣止痛藥之一，主要含有揮發(fā)油，異吡喹酮類生物堿，用于溫中散寒，順氣止痛。烏藥還具有抗病毒性作用。

動(dòng)物新獸藥止痢散主要組成是多葉勾兒茶輔以地榆、烏藥等中草藥組合的新復(fù)方中藥制劑。民間長(zhǎng)將三者進(jìn)行配方使用，用于抗炎的效果是肯定的，但是其抗炎作用與效果只見(jiàn)于民間口頭相傳，缺乏足夠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)與書(shū)籍記載，因此本實(shí)驗(yàn)以此組方作為實(shí)驗(yàn)抗炎對(duì)象，通過(guò)對(duì)獸用止痢散進(jìn)行抗炎藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究分析，為臨床上廣泛運(yùn)用提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)為中藥在抗炎方面提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)昆明小白鼠，體重20±2 g，購(gòu)自解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（渝）2012-0003），在貴州大學(xué)貴州省生化工程中心SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（黔）2013-0001）飼養(yǎng)，試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處理方法符合中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)（2006）》的規(guī)定。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 止痢散原藥、多葉勾兒茶、地榆、烏藥（均由貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供；）冰醋酸（安徽深藍(lán)醫(yī)療科技有限公司）；生理鹽水（北京科友佳生物技術(shù)有限公司）

1.1.3 藥物保存 止痢散高劑量組按止痢散原藥100 g +100 mL雙蒸水稀釋，止痢散中劑量組：按止痢散原藥100 g+200 ml雙蒸水稀釋，止痢散低劑量組按止痢散原藥100 g+900 mL雙蒸水稀釋；止痢散、多葉勾兒茶、地榆、烏藥等藥物均置于4攝氏度冰箱保存，使用時(shí)水浴加熱到25攝氏度。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海生化儀器廠）；SBH-IIIA循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；電子天平（北京賽多利斯天平儀器廠）；KQ3200電熱恒溫水浴鍋（北京醫(yī)療設(shè)備廠）；LS-B75立式壓力蒸汽滅菌器（江陰濱江醫(yī)療設(shè)備廠）；DHG-9230A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；0.5%伊文思蘭生理鹽水液（廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)20101217）；分光光度計(jì)Thermo Multiskan GO全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司）；打孔器（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn)）等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 毛細(xì)血管通透實(shí)驗(yàn)

根據(jù)參考文獻(xiàn)毛細(xì)血管實(shí)驗(yàn)分組［1-2］，將140只小鼠按隨機(jī)次數(shù)分布表，隨機(jī)分為7組，每組20只（雌雄各半），設(shè)生理鹽水空白組、止痢散高、中、低劑量組，多葉勾兒茶+地榆組、多葉勾兒茶+地榆組+烏藥組，阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組。除空白對(duì)照組給予同體積的生理鹽水外，灌胃給藥，在正常飼養(yǎng)基礎(chǔ)上連續(xù)用藥5 d，給藥體積0.2 mL/10 g。末次給藥30 min后，予1%伊文思蘭生理鹽水溶液10 mL/kg 尾靜脈注射后，隨即予0.6%醋酸0.2 mL只腹腔注射。20 min后脫頸處死各組小鼠，剪開(kāi)腹腔，用0.9%氯化鈉注射液5 mL 沖洗腹腔數(shù)次收集洗滌液。將收集到的洗滌液置于離心機(jī)上，以4 000 r/min 離心速度，離心15 min，取上清液，用分光光度計(jì)在590 nm處比色測(cè)各組吸光度（OD）值［3］。得出吸光度（OD）值后通過(guò)計(jì)算得出各組小鼠伊文思藍(lán)含量，并計(jì)算各組抑制率見(jiàn)圖1。

抑制率（%）=（空白對(duì)照組伊文思藍(lán)含量-給藥組伊文思藍(lán)）/空白對(duì)照組伊文思藍(lán)含量×100%

2.2 二甲苯致耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)分組、給藥同消炎實(shí)驗(yàn)，用灌胃針灌胃給藥，連續(xù)用藥5 d，給藥體重0.02 mL/g，在最后一次給藥后的1.2 h用致炎劑二甲苯均勻涂于小鼠右耳正反兩面，每只小鼠0.03 mL左耳不涂作為對(duì)照［4-6］。40 min后脫臼處死小鼠并沿耳基線剪下左右兩片耳朵，用8 mm 的打孔器分別在左右兩片耳朵鉆取相同部位，置于精密電子天平上稱量，計(jì)算腫脹度和抑制率［7］。

腫脹度=（右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量/左耳質(zhì)量）

抑制率（%）=［（對(duì)照組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度）/對(duì)照組耳腫脹度］×100%

3 結(jié)果

3.1 止痢散抗炎作用

3.1.1 止痢散對(duì)正常小鼠毛細(xì)血管通透性影響 結(jié)果如表1所示，與空白組相比陽(yáng)性組伊文思藍(lán)含量極顯著減少（P＜0.01），OD590值顯著降低（P＜0.01），止痢散高劑量組伊文思藍(lán)含量顯著減少（P＜0.05）。抑制率結(jié)果如表2所示，陽(yáng)性組抑制率最高為46.45%；止痢散中、高劑量組抑制率分別為6.45%、16.13%，這一結(jié)果顯示止痢散中、高劑量組對(duì)毛細(xì)血管通透性有一定的抑制性，但不明顯。

3.1.2 止痢散對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹影響 結(jié)果如表3所示，與空白對(duì)照組相比陽(yáng)性組耳廓腫脹度極顯著降低（P＜0.01），抑制率極顯著增高（P＜0.01）；止痢散中高劑量組耳廓腫脹度顯著降低（P＜0.05），抑制率顯著增高（P＜0.05）；其他各藥物有一定抑制耳廓腫脹的作用，但不明顯。

圖1 伊文思藍(lán)含量與OD值對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表1 各組小鼠伊文思藍(lán)含量和OD90值比較（n=20，±SE）

表1 各組小鼠伊文思藍(lán)含量和OD90值比較（n=20，±SE）

組別 伊文思藍(lán)含量 OD590值空白組 0.003 10±0.000 47 0.190 377低劑量組 0.003 11±0.000 39 0.206 110中劑量組 0.002 90±0.000 38 0.192 388高劑量組 0.002 60±0.000 45 0.172 021多地組 0.003 44±0.000 43 0.226 615多地烏組 0.002 95±0.000 35 0.195 498

表2 各組小鼠伊文思藍(lán)含量及抑制率比較（n=20，±SE）

表2 各組小鼠伊文思藍(lán)含量及抑制率比較（n=20，±SE）

注：*，**表示 P＜0.05，P＜0.01；△，△△與陽(yáng)性組比P＜0.05，P＜0.01。

空白組 0.003 10±0.000 47 -陽(yáng)性組 0.001 66±0.000 6 46.45%低劑量組 0.003 11±0.000 39 5.34%中劑量組 0.002 90±0.000 38 6.45%高劑量組 0.002 60±0.000 45 16.13%多地組 0.003 44±0.000 43 5.78%組別 伊文思藍(lán)含量 抑制率（%）多地烏組 0.002 95±0.000 35 4.84%

表3 各組小鼠耳廓腫脹度比較（n=20，±SE）

表3 各組小鼠耳廓腫脹度比較（n=20，±SE）

注：*，**表示P＜0.05，P＜0.01；△，△△與陽(yáng)性組比P＜0.05，P＜0.01。

組別 腫脹度（g） 抑制率（%）空白組 0.020 91±0.005 228 -陽(yáng)性組 0.007 59±0.006 401** 63.70低劑量組 0.020 16±0.004 458 3.59中劑量組 0.018 75±0.003 379* 10.33高劑量組 0.018 09±0.005 974* 13.46多地組 0.019 98±0.004 208 4.45多地烏組 0.020 07±0.004 667 4.02

4 討論

炎癥是機(jī)體對(duì)于刺激的一種防御反應(yīng)，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和能障礙。實(shí)驗(yàn)常用物理、化學(xué)刺激法制造炎癥動(dòng)物模型來(lái)觀察藥物的抗炎作用，如外傷、高溫、低溫、紫外線或二甲苯、角叉菜膠等化學(xué)藥物致炎［8］。炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)，根據(jù)其病程經(jīng)過(guò)可分為急性炎癥和慢性炎癥。炎癥早期由于炎癥介質(zhì)的刺激，血管擴(kuò)張，血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙增大，血管壁通透性增高，炎癥局部組織血管內(nèi)的液體和細(xì)胞成分通過(guò)血管壁進(jìn)入組織間質(zhì)、體腔和黏膜表面，造成組織腫脹。因此，炎性滲出和組織腫脹是急性炎癥早期的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高觀察止痢散的抗炎效果。

影響炎癥的因素有很多，炎癥反應(yīng)受到機(jī)體不同的影響和調(diào)節(jié)，不僅和體內(nèi)細(xì)胞因子有關(guān)，還與機(jī)體所處的外界環(huán)境有關(guān)，在大量的抗炎實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)觀察二甲苯致小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)藥物的抗炎作用是一個(gè)比較可靠的方法。

因此，在本組實(shí)驗(yàn)的對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響以生理鹽水為空白對(duì)照藥、對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹模型中，以阿司匹林作為陽(yáng)性對(duì)照藥。目前阿司匹林是使用最為廣泛的鎮(zhèn)痛抗炎藥。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響和對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響實(shí)驗(yàn)來(lái)研究觀察止痢散的抗炎作用［9］，結(jié)果表明，止痢散有一定的抗炎作用，但抗炎作用不顯著。

［1］韋健全，羅瑩，黃健，等.穿破石抗炎鎮(zhèn)痛活性觀察及最大給藥量測(cè)定［J］.中成藥，2011，（9）.

［2］張明發(fā)，沈雅琴.小檗堿的消炎鎮(zhèn)痛作用［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，1990.

［3］李效振，賈書(shū)紅，張東升，等.中藥復(fù)方宮炎凈不同溶劑提取物對(duì)小鼠耳廓腫脹及毛細(xì)血管通透性的影響［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014，（2）.

［4］楊桂明，艾丹.白鮮皮抗炎有效部位的研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，（9）.

［5］鄂裘愷，謝煥松，周鳴鳴.芹菜素鎮(zhèn)痛消炎作用研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，（10）：145-146.

［6］張穎，張立木，李同德，等.紫荊葉與紫荊皮消炎鎮(zhèn)痛作用比較［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，（31）.

［7］李效振，賈書(shū)紅，張東升，等.谷新利中藥復(fù)方宮炎凈不同溶劑提取物對(duì)小鼠耳廓腫脹及毛細(xì)血管通透性的影響［J］.西北農(nóng)業(yè)大學(xué)報(bào)，2014，（23）.

［8］馮潔，周勁帆，覃富景，等.兩面針根和莖抗炎鎮(zhèn)痛不同部位活性比較研究［J］.中藥藥理與臨床2011，（6）.

［9］楊何，蔣秀全.獸用止痢、止瀉中草藥新制劑的藥理試驗(yàn)［J］.中獸醫(yī)學(xué)雜志，2014，（10）.

（編輯：張淑鳳）

R725.1

B

1006-799X（2016）10-0084-02

胡冰野（1993-），男，貴州正安人，本科在讀，主要研究方向?yàn)閯?dòng)物醫(yī)學(xué)。

貴州省重大專項(xiàng)（黔科合重大專項(xiàng)字［2013］6014）。