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        獸用止痢散抗炎效果分析

        2016-12-20 08:45:52胡冰野保丹東
        甘肅畜牧獸醫(yī) 2016年10期
        關(guān)鍵詞:小鼠劑量實(shí)驗(yàn)

        胡冰野,保丹東

        (1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 550025;2.貴州省生化工程中心,貴州 貴陽(yáng) 550025)

        獸用止痢散抗炎效果分析

        胡冰野1,保丹東2

        (1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 550025;2.貴州省生化工程中心,貴州 貴陽(yáng) 550025)

        為了研究止痢散抗炎的藥理學(xué)作用,為最終的臨床研究提供指導(dǎo)和借鑒意義。采用冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加、二甲苯致小鼠耳廓腫脹、等方法研究止痢散的抗炎作用。二甲苯致小鼠耳廓腫脹結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比:陽(yáng)性組耳廓腫脹度極顯著降低(P<0.01),抑制率極顯著增高(P<0.01);止痢散中、高劑量組耳廓腫脹度顯著降低(P<0.05),抑制率顯著增高(P<0.05);其他各藥物有一定抑制耳廓腫脹的作用,但不明顯。冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加結(jié)果顯示:陽(yáng)性組抑制率最高為46.45%;止痢散中、高劑量組抑制率分別為6.45%、16.13%,表明止痢散中、高劑量組對(duì)毛細(xì)血管通透性有一定的抑制性,但作用不明顯。結(jié)論顯示:止痢散具有抗炎作用,抗炎作用明顯。

        獸用止痢散;消炎;抑制率

        多葉勾兒茶,是一種勾兒茶屬綱鼠李目雙子葉植物,多葉勾兒茶全身可供藥用,勾兒茶主要含有多種活性化學(xué)物質(zhì),有治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性慢性氣管炎、止咳化痰等功效,具有一定的抗炎作用。地榆,地榆屬薔薇目雙子葉植物綱,微寒性,苦味酸澀,中醫(yī)理論上歸肝大腸經(jīng),主要含有皂苷,鞣質(zhì),黃酮類物質(zhì),功能涼血止血解毒斂瘡。地偷抗炎作用的有效成分為3,3',4-三-O-甲基并沒(méi)食子酸,其抗炎作用明顯[1]。烏藥,山胡椒屬毛茛目山雙子葉植物綱,為常用傳統(tǒng)中藥,是重要的溫胃理氣止痛藥之一,主要含有揮發(fā)油,異吡喹酮類生物堿,用于溫中散寒,順氣止痛。烏藥還具有抗病毒性作用。

        動(dòng)物新獸藥止痢散主要組成是多葉勾兒茶輔以地榆、烏藥等中草藥組合的新復(fù)方中藥制劑。民間長(zhǎng)將三者進(jìn)行配方使用,用于抗炎的效果是肯定的,但是其抗炎作用與效果只見(jiàn)于民間口頭相傳,缺乏足夠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)與書(shū)籍記載,因此本實(shí)驗(yàn)以此組方作為實(shí)驗(yàn)抗炎對(duì)象,通過(guò)對(duì)獸用止痢散進(jìn)行抗炎藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究分析,為臨床上廣泛運(yùn)用提供理論基礎(chǔ),同時(shí)為中藥在抗炎方面提供數(shù)據(jù)支持。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)材料

        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)昆明小白鼠,體重20±2 g,購(gòu)自解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(渝)2012-0003),在貴州大學(xué)貴州省生化工程中心SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室(動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(黔)2013-0001)飼養(yǎng),試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處理方法符合中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)(2006)》的規(guī)定。

        1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 止痢散原藥、多葉勾兒茶、地榆、烏藥(均由貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供;)冰醋酸(安徽深藍(lán)醫(yī)療科技有限公司);生理鹽水(北京科友佳生物技術(shù)有限公司)

        1.1.3 藥物保存 止痢散高劑量組按止痢散原藥100 g +100 mL雙蒸水稀釋,止痢散中劑量組:按止痢散原藥100 g+200 ml雙蒸水稀釋,止痢散低劑量組按止痢散原藥100 g+900 mL雙蒸水稀釋;止痢散、多葉勾兒茶、地榆、烏藥等藥物均置于4攝氏度冰箱保存,使用時(shí)水浴加熱到25攝氏度。

        1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海生化儀器廠);SBH-IIIA循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);電子天平(北京賽多利斯天平儀器廠);KQ3200電熱恒溫水浴鍋(北京醫(yī)療設(shè)備廠);LS-B75立式壓力蒸汽滅菌器(江陰濱江醫(yī)療設(shè)備廠);DHG-9230A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);0.5%伊文思蘭生理鹽水液(廣州化學(xué)試劑廠,批號(hào)20101217);分光光度計(jì)Thermo Multiskan GO全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司);打孔器(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn))等。

        2 實(shí)驗(yàn)方法

        2.1 毛細(xì)血管通透實(shí)驗(yàn)

        根據(jù)參考文獻(xiàn)毛細(xì)血管實(shí)驗(yàn)分組[1-2],將140只小鼠按隨機(jī)次數(shù)分布表,隨機(jī)分為7組,每組20只(雌雄各半),設(shè)生理鹽水空白組、止痢散高、中、低劑量組,多葉勾兒茶+地榆組、多葉勾兒茶+地榆組+烏藥組,阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組。除空白對(duì)照組給予同體積的生理鹽水外,灌胃給藥,在正常飼養(yǎng)基礎(chǔ)上連續(xù)用藥5 d,給藥體積0.2 mL/10 g。末次給藥30 min后,予1%伊文思蘭生理鹽水溶液10 mL/kg 尾靜脈注射后,隨即予0.6%醋酸0.2 mL只腹腔注射。20 min后脫頸處死各組小鼠,剪開(kāi)腹腔,用0.9%氯化鈉注射液5 mL 沖洗腹腔數(shù)次收集洗滌液。將收集到的洗滌液置于離心機(jī)上,以4 000 r/min 離心速度,離心15 min,取上清液,用分光光度計(jì)在590 nm處比色測(cè)各組吸光度(OD)值[3]。得出吸光度(OD)值后通過(guò)計(jì)算得出各組小鼠伊文思藍(lán)含量,并計(jì)算各組抑制率見(jiàn)圖1。

        抑制率(%)=(空白對(duì)照組伊文思藍(lán)含量-給藥組伊文思藍(lán))/空白對(duì)照組伊文思藍(lán)含量×100%

        2.2 二甲苯致耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)

        實(shí)驗(yàn)分組、給藥同消炎實(shí)驗(yàn),用灌胃針灌胃給藥,連續(xù)用藥5 d,給藥體重0.02 mL/g,在最后一次給藥后的1.2 h用致炎劑二甲苯均勻涂于小鼠右耳正反兩面,每只小鼠0.03 mL左耳不涂作為對(duì)照[4-6]。40 min后脫臼處死小鼠并沿耳基線剪下左右兩片耳朵,用8 mm 的打孔器分別在左右兩片耳朵鉆取相同部位,置于精密電子天平上稱量,計(jì)算腫脹度和抑制率[7]。

        腫脹度=(右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量/左耳質(zhì)量)

        抑制率(%)=[(對(duì)照組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度)/對(duì)照組耳腫脹度]×100%

        3 結(jié)果

        3.1 止痢散抗炎作用

        3.1.1 止痢散對(duì)正常小鼠毛細(xì)血管通透性影響 結(jié)果如表1所示,與空白組相比陽(yáng)性組伊文思藍(lán)含量極顯著減少(P<0.01),OD590值顯著降低(P<0.01),止痢散高劑量組伊文思藍(lán)含量顯著減少(P<0.05)。抑制率結(jié)果如表2所示,陽(yáng)性組抑制率最高為46.45%;止痢散中、高劑量組抑制率分別為6.45%、16.13%,這一結(jié)果顯示止痢散中、高劑量組對(duì)毛細(xì)血管通透性有一定的抑制性,但不明顯。

        3.1.2 止痢散對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹影響 結(jié)果如表3所示,與空白對(duì)照組相比陽(yáng)性組耳廓腫脹度極顯著降低(P<0.01),抑制率極顯著增高(P<0.01);止痢散中高劑量組耳廓腫脹度顯著降低(P<0.05),抑制率顯著增高(P<0.05);其他各藥物有一定抑制耳廓腫脹的作用,但不明顯。

        圖1 伊文思藍(lán)含量與OD值對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

        表1 各組小鼠伊文思藍(lán)含量和OD90值比較(n=20,±SE)

        表1 各組小鼠伊文思藍(lán)含量和OD90值比較(n=20,±SE)

        組別 伊文思藍(lán)含量 OD590值空白組 0.003 10±0.000 47 0.190 377低劑量組 0.003 11±0.000 39 0.206 110中劑量組 0.002 90±0.000 38 0.192 388高劑量組 0.002 60±0.000 45 0.172 021多地組 0.003 44±0.000 43 0.226 615多地烏組 0.002 95±0.000 35 0.195 498

        表2 各組小鼠伊文思藍(lán)含量及抑制率比較(n=20,±SE)

        表2 各組小鼠伊文思藍(lán)含量及抑制率比較(n=20,±SE)

        注:*,**表示 P<0.05,P<0.01;△,△△與陽(yáng)性組比P<0.05,P<0.01。

        空白組 0.003 10±0.000 47 -陽(yáng)性組 0.001 66±0.000 6 46.45%低劑量組 0.003 11±0.000 39 5.34%中劑量組 0.002 90±0.000 38 6.45%高劑量組 0.002 60±0.000 45 16.13%多地組 0.003 44±0.000 43 5.78%組別 伊文思藍(lán)含量 抑制率(%)多地烏組 0.002 95±0.000 35 4.84%

        表3 各組小鼠耳廓腫脹度比較(n=20,±SE)

        表3 各組小鼠耳廓腫脹度比較(n=20,±SE)

        注:*,**表示P<0.05,P<0.01;△,△△與陽(yáng)性組比P<0.05,P<0.01。

        組別 腫脹度(g) 抑制率(%)空白組 0.020 91±0.005 228 -陽(yáng)性組 0.007 59±0.006 401** 63.70低劑量組 0.020 16±0.004 458 3.59中劑量組 0.018 75±0.003 379* 10.33高劑量組 0.018 09±0.005 974* 13.46多地組 0.019 98±0.004 208 4.45多地烏組 0.020 07±0.004 667 4.02

        4 討論

        炎癥是機(jī)體對(duì)于刺激的一種防御反應(yīng),表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和能障礙。實(shí)驗(yàn)常用物理、化學(xué)刺激法制造炎癥動(dòng)物模型來(lái)觀察藥物的抗炎作用,如外傷、高溫、低溫、紫外線或二甲苯、角叉菜膠等化學(xué)藥物致炎[8]。炎癥是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng),根據(jù)其病程經(jīng)過(guò)可分為急性炎癥和慢性炎癥。炎癥早期由于炎癥介質(zhì)的刺激,血管擴(kuò)張,血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙增大,血管壁通透性增高,炎癥局部組織血管內(nèi)的液體和細(xì)胞成分通過(guò)血管壁進(jìn)入組織間質(zhì)、體腔和黏膜表面,造成組織腫脹。因此,炎性滲出和組織腫脹是急性炎癥早期的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高觀察止痢散的抗炎效果。

        影響炎癥的因素有很多,炎癥反應(yīng)受到機(jī)體不同的影響和調(diào)節(jié),不僅和體內(nèi)細(xì)胞因子有關(guān),還與機(jī)體所處的外界環(huán)境有關(guān),在大量的抗炎實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)觀察二甲苯致小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型、冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)藥物的抗炎作用是一個(gè)比較可靠的方法。

        因此,在本組實(shí)驗(yàn)的對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響以生理鹽水為空白對(duì)照藥、對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹模型中,以阿司匹林作為陽(yáng)性對(duì)照藥。目前阿司匹林是使用最為廣泛的鎮(zhèn)痛抗炎藥。

        本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響和對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響實(shí)驗(yàn)來(lái)研究觀察止痢散的抗炎作用[9],結(jié)果表明,止痢散有一定的抗炎作用,但抗炎作用不顯著。

        [1]韋健全,羅瑩,黃健,等.穿破石抗炎鎮(zhèn)痛活性觀察及最大給藥量測(cè)定[J].中成藥,2011,(9).

        [2]張明發(fā),沈雅琴.小檗堿的消炎鎮(zhèn)痛作用[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),1990.

        [3]李效振,賈書(shū)紅,張東升,等.中藥復(fù)方宮炎凈不同溶劑提取物對(duì)小鼠耳廓腫脹及毛細(xì)血管通透性的影響[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,(2).

        [4]楊桂明,艾丹.白鮮皮抗炎有效部位的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,(9).

        [5]鄂裘愷,謝煥松,周鳴鳴.芹菜素鎮(zhèn)痛消炎作用研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,(10):145-146.

        [6]張穎,張立木,李同德,等.紫荊葉與紫荊皮消炎鎮(zhèn)痛作用比較[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2011,(31).

        [7]李效振,賈書(shū)紅,張東升,等.谷新利中藥復(fù)方宮炎凈不同溶劑提取物對(duì)小鼠耳廓腫脹及毛細(xì)血管通透性的影響[J].西北農(nóng)業(yè)大學(xué)報(bào),2014,(23).

        [8]馮潔,周勁帆,覃富景,等.兩面針根和莖抗炎鎮(zhèn)痛不同部位活性比較研究[J].中藥藥理與臨床2011,(6).

        [9]楊何,蔣秀全.獸用止痢、止瀉中草藥新制劑的藥理試驗(yàn)[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志,2014,(10).

        (編輯:張淑鳳)

        R725.1

        B

        1006-799X(2016)10-0084-02

        胡冰野(1993-),男,貴州正安人,本科在讀,主要研究方向?yàn)閯?dòng)物醫(yī)學(xué)。

        貴州省重大專項(xiàng)(黔科合重大專項(xiàng)字[2013]6014)。

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